国产盐酸塞利洛尔片在健康受试者的血药浓度与药效学相关性

　　【摘要】 目的 研究国产盐酸塞利洛尔片在健康志愿者体内的血药浓度、药物动力学及药效学，并考查血药浓度与药效学参数相关性。方法 用反相高效液相色谱法测定国产盐酸塞利洛尔片在9名受试者体内血药浓度，同时用GP-303血流动力学测定仪测量平均血压（MAP）、心率（HR），每搏输出量（SV）、体循环阻力（TPR）。结果 服药后3.5h血药浓度达高峰，4.0h药效达高峰，9名受试者ka为（1.26±0.57）h -1  ，k为（0.21±0.05）h -1  ，t 1/2k  为（3.45±0.91）h，t  max  为（3.5±0.3）h，C  max  为（794±124）ng/ml，AUC 0～∞ 为（4508±519）μg·h·L -1  。血药浓度与药效△MAP、△HR、△SV、△TPR的相关系数分别为r 1 =（0.8705±0.0505），r 2 =（0.7626±0.0966），r 3 =（0.7875±0.0961），r 4 =（0.8110±0.576）。结论 药效高峰滞后于血药浓度高峰，血药浓度与各药效指标相关性依次为△MAP>△TPR>△SV>△HR。

　　Jiang Yanfeng，Qu Fujun，Sun Hua
    
　　Wan Dashan Pharmaceatical HarBin Branch Factory of theHeilongJiang Province，Harbin150060.
   
　　【Abstract】 Objective To study the plasma concentrations，pharmacokinetics and pharmacodynamics of doˉmestic celiprolol hydrochloride in healthy volunteers，and examine the correlation between plasma concentrations and pharmacodynamics.Methods The plasma concentrations of domestic celiprolol hydrochloride table
ts in plasma were determined with high performance liquid chromatography，at the same time，mean artery pressure（MAP），heart rate（HR），stroke volume（SV），total peripheral resistance（TPR）were measured with GP-303insrtument.Results Plasˉma concentrations attained peak in3.5h after taking，drug effects attained peak in4.0h The pharmacokinetic parameˉters of9subjects were as following，ka（1.26±0.57）h -1  ，k（0.21±0.05）h -1  ，t 1/2  （3.45±0.91）h，t  mas  （3.5±0.3）h，C  max  （79.4±124）ng/ml，AUC 0～∞ （4508±519）μg·h·L -1  .The co
rrelation factors between plasma concentrations and drug effects as△MAP，△HR，△SV and△TPR were r 1 =（0.8705±0.0505），r 2 =（0.7626±0.0966），r 3 =（0.7875±0.0961），r 4 =（0.8110±0.0576）.Conclusion Drug effect peak delays after plasma concentrations peak，the degree of correlation between plasma concentratio
ns and drug effects index is△MAP>△TPR>△SV>△HR.

　　Key words celiprolol hydrochloride high performance liquid chromatography pharmacokinetics pharmacoˉdynamics
    
　　盐酸塞利洛尔（celiprolol hydrochloride，cel）是一种无内源性拟交感活性及膜稳定作用的新型β 1 受体阻滞剂，口服生物利用度高，国外已经在临床上应用于高血压，心绞痛及心律失常的治疗，效果显著，毒副作用小 ［1］  。我们参考国外文献 ［2］  采用反相高效液相色谱法对国产Cel片在人体的血药浓度、药物动力学及药效学进行了研究，并考察了血药浓度与药效学参数的相关性。

　　1 材料与方法
  
　　1.1 血药浓度测定
   
　　1.1.1 药品与试剂 Cel片（天津药物研究院生产，100mg·片 -1  ，批号990829），Cel对照品（天津药物研究院，纯度99.9%）;乙腈为色谱纯;乙醚重蒸2次使用;其他试剂为分析纯;水为超纯水。
    
　　1.1.2 仪器 waters810色谱分析系统（510高压平流泵，712WLSP自动进样器，486紫外检测器，Baselime810色谱处理系统）;日本产GP-303血流动力学测定仪;普通离心机。

　　1.1.3 色谱条件 色谱柱:Nova-pak C 18  （300mm×3.9mm，4μm）（中国科学院大连化学物理研究所）;柱温（25±0.2）℃:流动相为乙腈-0.1mol/L磷酸盐缓冲液（pH4.0）-水（55:6:39）;流速1ml/min;紫外检测波长λ=237nm。

　　1.1.4 血样处理 精取1ml血浆加入具塞试管中，加0.01mol/L磷酸盐缓冲液（pH6.0）1ml摇匀，再加2mol/L NaOH溶液200混匀，重蒸乙醚4ml提取2次，合并提供液于尖底试管中，加入0.01mol/L硫酸200μl，旋涡振荡90s，离心，弃去有机层，残留乙醚用氮气吹干，取水相50μl进样。

　　1.2 药物动力学实验
  
　　1.2.1 受试者选择与给药方案 9名男性志愿受试者，年龄20～24岁，体重67～75kg，身高170～180cm，临床及实验室检查均属正常范围。受试者在实验前2周未服任何药物，全部签署知情书后入选。实验过程中禁烟、酒、茶。服药前禁食12h后于7:00时200ml温开水吞服Cel片200mg，服药后4h统一食低脂肪、低蛋白午餐，实验期间禁服其他药物。临床监护病房有危机情况抢救措施。
   
　　1.2.2 血浆样品收集 于服药前和服药后1.5、2.5、3.0、3.5、4.0、5.5、8.0、12.0h各采静脉血3ml，肝素抗凝，离心分离血浆，-20℃保存至测定。
  
　　1.2.3 数据处理 9名志愿受试者不同时间血药浓度数据逐一用3P87药物动力学程序拟合，求算药物动力学参数，C  max  、T  max  为实测值。

　　1.3 药效学实验 分别于服药前和服药后1.5、2.5、3.0、3.5、4.0、5.5、8.0、12.0h用GP-303血流动力学测定仪测定平均血压（MAP）、心率（H
R）、每博输出量（SV）和体循环阻力（TPR），即于每次前臂脉采血的同时另一侧前臂用GP-303血流动力学测定仪测量药效。将服药后不同时间的药效与服药前测量值的差值（△MAP、△HR、△SV、△TPR）作为统计分析参数。

　　2 结果
  
　　2.1 色谱条件与分离 上述条件下Cel的保留时间为4.283min，分离度>1.5，分离效果良好，无血浆成份干扰。色谱分离结果见图1。图1 Cel HPLC色谱图 A:Cel对照品;B:Cel血浆样品;C:空白血浆;1、色谱峰2.1.1 标准曲线 准确配制浓度为10、20、50、100、200、500、1000、2000ng/ml的血浆样品，按“1.1.4”项下样品处理方法处理，50μl进样，以峰面积（A）对浓度（C）回归得标准曲线方程C=9.90+2.12×10 -3  A，r=0.9951，P<0.01。故本法在10～2000ng/ml范围内线性良好，最小检测浓度为10ng/ml，s/n>3。
  
　　2.1.2 回收率与精密度 准确配制含Cel10、200、2000ng/ ml血浆样品，按“1.1.4”项下样品处理方法处理，50μl进样，得峰面积，单点法求算回收率，每个浓度测定5个平行样，结果回收率分别为（87.5±5.2）%，（86.1±5.6）%，（86.3±6.0）%。以上3种浓度日内RSD为（3.4±0.3）%（n=5）。日间RSD（3.5±0.51）%（n=5）。
   
　　2.2 血药浓度测定结果 9名受试者po国产Cel片200mg后不同时间的平均血浆药物浓度测定结果见表1。

　　表1 9名受试者po片200mg后平均血浆药物浓度 （略）

　　2.3 药物动力学参数 9名志愿者po国产Cel片200mg血药浓度值用3P87药物动力学程序拟合得药物动力学参数， Cmax，Tmax为实测值。结果见表2。

　　表2 9名志愿受试者po Cel片200mg后的平均药物动力学参数 （略）

　　2.4 药效学参数 ［3]9名志愿受试者于服药前和服药后与采血时间相同点，用GP-303血流动力学测定仪测量药效，将给药前药效值减去给药后不同时间测得药效值记为药效波动值，即△MAP、△HR、△SV、△TPR。结果见表3。

　　2.5 血药浓度与药效学参数相关性 以不同的血药浓度 平均值分别对△MAP（X 1 ）、△HR（X 2 ）、△SV（X 3 ）、△TPR（X 4 ）回归，得回归方程分别为Y 1 =69+22X 1 ，Y 2 =81+26X 2 ，Y 3 =37+24X 3 ，Y 4 =8+14X 4 。另将每个受试者不同时间的血药浓度对其不同时间的药效学参数（△MAP、△HR、△SV、△TPR）回归，得每个受试者的相关系数（r 1、r 2 、r 3 、r 4 ），最后求出9名受试者的每个相关系数的均值和标准差，再与相关系数的临界值表r 0.05  =0.707和r 0.01  =0.834比较，结果r 1 =0.8705±0.0505，P 1 <0.01、r 2 =0.7626±0. 0966，P 2 <0.05、r 3 =0.7875±0.0966，P 3 <0.05、r 4 =0.8110±0.0576，P 4 <0.05。
   
　　表3 9名志愿受试者po Cel片200mg后药效学参数 （略）

　　3 讨论

　　本研究采用反相高效液相色谱法测定国产Cel片在健康人血药浓度，结果表明Cel色谱峰处无血浆其他成份干扰，专一性强，灵敏度高，最低检测浓度可达到10ng/ml。日内、日间RSD均小于5%。提取回收率大于80%。可用于生物样品中Cel药物浓度的测定。3.5h血药浓度达高峰，血药浓度个体差异大，临床应用需给予重视。4.0h药效达高峰，药效高峰滞后于血药浓度高峰0.5h。血药浓度与药效参数相关性依次为△MAP>△TPR>△SV>△HR。且血药浓度与药效参数MAP、TPR、SV及HR有显著的相关性， 其相关性最强的是MAP。

　　参考文献
   
　　1 Frohlich ED.Vasodilatoryβ-blockers and regional hemodynamic efˉfects.Am Heart J，1991，121（3）:1012.
  
　　2 Buskin JN，Upton RA，Sorgel F，et al.Specific and sensitive assay of celiprolol in blood，plasma and urine using high perfomance liquid chroˉmatography.J Chromatogr，1992，230（6）:454.
  
　　3 姜礼红，赵红青，张一娜.硝酸甘油舌下片在老年健康受试者和患者体内的药物动力及药效学.中国临床药学杂志，2003，14（4）:29. 

　　作者单位:150060黑龙江省完达山制药厂哈尔滨分厂
       　　  150086哈尔滨医科大学附属第二医院药学药物研究所