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肾小球肾炎是一种常见疾病，有研究发现在其病理生理过程中，粘附分子及其粘附机制与炎症发生、发展有关 ［1］ ，因此本研究采用牛血清白蛋白（BSA）所致家兔急性实验性肾炎模型为观察对象，探讨细胞间粘附分子中免疫球蛋白超家族成员之一，细胞间粘附分子-1（intercellular adhesion molecule-1，ICAM-1）在肾小球肾炎炎症过程中的作用，并观察IL-6对其炎症过程中的影响及霉酚酸酯（mycophenolate mofetil，MMF）在肾炎过程中的保护作用机制。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 实验动物及药品 健康大耳白兔，购于中国医科大学实验动物部，雌雄兼用，体重1.8～2.0kg，随机分组，每组6只，共18只。霉酚酸酯（罗氏制药）。牛血清白蛋白（BSA）:上海生物制品所。IL-6ELISA检测试剂盒（bio-source Co.USA生产）购于北京邦定生物制品公司。CD54/IˉCAM-1免疫组化试剂盒购于北京中山生物制品公司。
1.1.2 家兔急性血清病模型制造 按Von Pirquet方法 ［2］ 将牛血清白蛋白（BSA）用无菌生理盐水溶解，以250mg/kg剂量1次耳缘静脉注射，造成家兔“一过性”急性实验性血清病，正常组注射等量生理盐水。实验分3组:在注射后24h开始，分别给药:A.霉酚酸酯试验组:家兔注射后BSA24h后+霉酚酸酯灌胃（40mg/只×7d）。B.模型对照组:家兔注射后BSA24h后，常规喂养。C.空白对照组:正常组注射等量生理盐水，常规喂养。
1.1.3 收集标本 各组处理后1，3，5天及1、2、3和4周分别测定24h尿蛋白含量，同时分别心脏采血2.5ml/只，分离血清，ELISA法检测其血清IL-6的含量，第4周全部处死，进行手术取肾10%甲醛固定，脱水，石蜡包埋，切片3～4μm。免疫组化检测粘附分子ICAM-1。
1.2 实验指标及检测方法
1.2.1 尿蛋白测定 采用Biuret方法 ［3］ 。
1.2.2 血清IL-6测定 采用ELISA，按试剂盒说明操作，检测波长490nm，以标准品1000、500、250、125、62、31、16pg/ml之OD值在半对数纸上作图，画出标准曲线，根据样品OD值通过直线回归方程计算出样品IL-6含量。
1.2.3 免疫组化方法 石蜡切片脱蜡至水。3%H 2 O 2 灭活内源性过氧化物酶，92℃抗原热修复，加抗ICAM-1抗体，按试剂盒说明操作。苏木素复染，常规脱水、透明、封片。镜下观察，阳性物质呈棕色。
1.2.4 统计学方法 采用SPSS10.0统计软件，进行多组间方差检验和两组间t检验。
2 结果
2.1 家兔24h尿蛋白含量测定 见表1。
表1 家兔实验性急性血清病模型24h尿蛋白含量测定 （略）
注:模型对照组与空白对照组比较 ˇ P<0.05，霉酚酸酯与空白对照组比较P>0.05，霉酚酸酯治疗与模型对照组的比较 ˇˇ P<0.01
2.2 家兔血清IL-6测定 见表2。
表2 家兔实验性急性血清病模型IL-6测定（略）
注:霉酚酸酯与模型对照组比较 ˇ P<0.05
2.3 肾组织病理学检查 光学显微镜观察结果发现家兔注射后BSA后未经治疗的阳性实验组肾小球基底膜（GBM）增厚明显，肾小球体积增大，球丛内有较多炎症细胞浸润，毛细血管壁增厚。血管内有微血栓形成，镜下可见大量IˉCAM-1阳性细胞（图1），而霉酚酸酯治疗组毛细血管壁及GBM增厚比模型组轻（图2），镜下可见少量ICAM-1阳性细胞，说明霉酚酸酯治疗组可有效缓解家兔急性实验性肾小球肾炎。
3 讨论
近年越来越多的文献报道细胞粘附分子及其粘附机制可能是介导和参与肾炎时细胞浸润、细胞外基质扩张乃至肾小球硬化的分子基础 ［4，5］ 。ICAM-1主要表达于巨噬细胞表面，炎症时其表达可大量增加，ICAM-1的配体为淋巴细胞功能相关抗原-1（LFA-1），LFA-1在白细胞表面连续表达，而ICAM-1则被认为是一种可被细胞因子诱导并表达于组织细胞表面的糖蛋白，因此，如果能抑制ICAM-1的表达或抑制细胞因子诱导ICAM-1的表达作用，将使炎症反应得以减轻 ［6］ 。故本实验通过免疫组化方法研究细胞粘附机制，证实ICAM-1参与了急性实验性血清病时肾组织的损伤过程，霉酚酸酯可明显减轻家兔急性实验性血清病时肾小球的组织损伤。
肾小球肾炎的发病与免疫功能紊乱有关，主要是免疫复合物在肾小球内沉积造成免疫损伤。蛋白尿是慢性肾炎和肾病综合征的诊断和疗效判定的主要指标，目前消除蛋白尿仍以激素或免疫抑制剂为主要治疗手段，缓解率仅在30%左右 ［7］ 。本研究证实霉酚酸酯可以有效抑制尿蛋白的排泄，降低蛋白尿，与阳性未治疗的对照组比较P<0.01，霉酚酸酯通过降低尿蛋白来减轻家兔急性实验性肾小球肾炎的病理损害，由此改善肾功能。
在肾小球肾炎的发病过程中，细胞因子对肾损伤的作用机制日益受到关注 ［8～10］ ，我们的研究发现IL-6在家兔急性实验性肾小球肾炎的发病过程中明显升高，说明细胞因子参与了肾小球肾炎的肾损伤过程 ［11］ 。霉酚酸酯多用 于肾移植中，近来有文献报道用于治疗狼疮性肾炎的个案，药理作用机制是通过嘌呤代谢途径中的次黄嘌呤核苷酸脱氢酶（IMPDII）而抑制细胞增殖 ［12］ ，主要影响B和T淋巴细胞，对其他细胞尤其肝、骨髓细胞影响较弱，MMF对亢进的体液免疫和细胞免疫具有很强的调节作用。我们的试验结果表明应用霉酚酸酯可有效降低IL-6水平（P<0.05），说明霉酚酸酯通过降低细胞因子的水平，从而抑制免疫细胞的趋化、浸润、活化和增殖，降低自身抗体的分泌而减轻肾小球炎症反应，使肾功能改善。由于霉酚酸酯作用温和，肝及骨髓毒副作用低，所以MMF作为新型免疫抑制剂更具优势。霉酚酸酯可通过对肾组织细胞及粘附分子作用的影响，使肾功能得以改善，为临床有效应用霉酚酸酯在肾脏疾病的防治中可能有重要意义。
（本文图片见封三）（略）
参考文献
1 郭志勇，崔若兰.IAM-1在肾小球系膜区炎症、增生过程中的作用及己酮可可碱的保护效应.中国中西医结合肾病杂志，2001，2（11）:625-627.
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12 胡伟新.霉酚酸酯治疗狼疮性肾炎及血管炎展望.肾脏病与透析肾移植杂志，1998，7（3）:264.
作者单位:110034辽宁沈阳医学院病原生物学教研室
110001辽宁沈阳解放军第202医院