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利培酮（Rispeiaone）是新型的苯并异恶唑类非典型抗精神药，对精神分裂症阳性和阴性症状均有效，且副作有小。利培酮口服药后可被快速完全地吸收，健康受试者口服利培酮1mg后，在1h内达到峰浓度，峰浓度为8μg/L，利培酮平均绝对生物利用为70%半衰期为（2.8±0.5）h。利培酮的主要代谢物为9-羟利培酮，经由肝细胞色素P450酶CYP2D6崔化产生，具有与利培酮相似的药理活性，利培酮与9-羟利培酮浓度之和在血药浓度研究中有重要意义。安定医院以前采用外标法测，结果不理想，改为内标法，结果比较好 ［1，2］ 。
1 材料与方法
1.1 标准品与试剂 标准品:利培酮和9-羟利培酮由Jassen公司赠送;内标物氯氮平购自Sigma公司，纯度均≥99%。甲醇和乙腈为市售色谱纯试剂，乙醚和盐酸为市售分析纯试剂。乙醚需经重蒸后一月内使用。蒸馏水为自制重蒸水，氮气为高纯氮。空白血清为体检健康人之混合血清。
1.2 仪器 SP8810高效液相色谱泵，SP Spectra100型紫外检测器，SPChromJet型色谱积分仪。其它小型仪器为GC-88B型漩涡混合器（江苏海门），BFX5-180型低速离心机（北京）。
1.3 色谱条件 色谱柱:Inertsil-ODS-3（5μm，4.6mm×250mm）。流动相:甲醇:乙腈:纯水（5:35:60）（V/V）每100ml加入冰酸1.8ml，正丁胺1.875ml。流动相流速为1ml/mim。检测器为紫外检测器，检测波长为280nm，AUFS0.01。积分仪:CS=0.25cm/min AT=8PT=50，室温20℃。
1.4 溶液配制
1.4.1 储备液 用十万分之一天平准确称取利培酮、9-羟利培酮、氯氮平10mg于三个小烧杯中，先用少量甲醇溶解，转入10ml容量瓶中，再用适量甲醇洗涤烧杯三次一并转入容量瓶中，滴加甲醇至刻度，得到浓长为1.00mg/ml的储备液溶度。
1.4.2 混合标准应用液 ［3］ 取利培酮储备液40ml、9-羟利培酮储备液72ml于同一个10ml溶量瓶中，加甲醇至刻度得到利培酮浓度为4μg/ml9-羟利培酮浓度为7.2μg/ml的混合标准应用液，继续用甲醇逐步稀释得浓度如下的系列混合标准液，利培酮浓度分别为2.0，1.0，0.5，0.25，0.125，0.0625，0.03125μg/ml，9-羟利培酮浓度分别为3.6，1.8，0.9，0.45，0.1125，0.05625μg/ml。
1.4.3 内标应用液 取氯氮平储备液50μl于25ml容量瓶中，加甲醇到刻度得到浓度为2μg/ml的内标应用液。
1.5 标本处理 ［4］ 在10ml带塞离心管中，加入1.0ml血清，内示50μl，混匀;每支试管各加2MNaOH0.5ml，混匀;各加5ml乙醚，在旋涡混合器上混合2min，4000rpm离心5min;将上层液转入10ml尖度试管中，各加入0.2MHCL200μl，在旋涡混合器上混合2min，4000rpm离心5min;弃去上层，下层水相于90℃～100℃水浴中用氮气吹干，残渣用50μl流动相溶解，取25μl进行色谱分析。
2 结果
2.1 标准曲线及线性范围 取8份空白血清（各1.0ml），空白管加入100μl甲醇，其余7支管分别加入不同浓度的混合标准液50μl，使血清中利培酮和9-羟利培酮的浓度分别为:利培酮浓度为100，50.0，25.0，12.5，6.25，3.125，1.5625ng/ml。9-羟利培酮浓度分别为180，90.0，45.0，22.5，11.25，5.625，2.8125ng/ml。然后按标本处理方法提取药物，进行色谱分析后，用药物峰高与内标峰高的比值（y）对药物浓度（x）进行线性回归，得标准曲线方程:y=a+bx，（n=7）;内标法:9-羟利培酮y=0.01748+0.02408x，r=0.993;利培酮:y=0.00594+0.02734x，r=0.9998;外标法:9-羟利培酮y=4.33857+34.75306x，r=0.9992;利培酮:y=-5.06965+39.43028x，r=0.9991;线性范围:9-OHRiS为2.8～180ng/ml，RiS为1.5625～100ng/ml。
2.2 标本测定 取未知标本1ml，按标本提取方法进行药物提取，色谱分析，计算峰高比利用的标法求取9-0HRiS，RiS浓度。当临床并用氯氮平或氯氮平峰受到干扰时，采用外标法，求取9-OHRiS和RiS的浓度。
2.3 临床应用 经过三个多月临床和门诊服用利培酮之后，多名患者药物浓度的测定和以前应用外标法进行比较，结果证明采用内标法后，使结果更准确，重复性更好，更适于利培酮浓度测定。（因为利培酮和9-羟利培酮有效浓度比较低）。
2.4 色谱图 将空白血清加药，空白血清及病人血清经提取处理后进行色谱分析，利培酮9-羟利培酮和内标氯氮平的保留时间分别为4.43min，5.32min，9.86min三种药物均达基线分离，内源性物质不干扰测定。
2.5 提取回收率和精密度 用空白血清配制成利培酮和9 -羟利培酮浓度分别为100ng/ml，50.0ng/ml，25.0ng/ml，以药血清经提取后测得的色谱峰高与相应浓度药物的甲醇溶液直接进样的色谱峰高的百分比为提取回收率，求算以上三个浓度水平的利培酮和9-羟利培酮的血清测定的提取回收率均为80%以上，批内精密度和批间精密度均在10%以内。
3 讨论
利培酮的常用剂量为2～8mg/d，稳态血药浓度多在10ng/ml以下，有效血药浓度在20ng/ml ［5］ 。药物浓度比较低，用外标法结果影响比较大，所以建立内标法，使其结果更准确，为临床提供更可靠的结果。本法在碱性条件下，采用有机溶剂提取，消除内源性物质的干扰，采取HCL反提取，在90℃～100℃水浴下，氮气吹干，用流动相溶解，所得标本溶液清澈透明，流动相可循环使用一个月以上。既节约试剂，降低成本费，又免去每天开机和关机时的冲洗和缩短机器平衡时间。
标本处理完后，不能及时做的，不要溶解。放置时间长了，利培酮结果增高，所以，进样时尽量少溶解标本个数。
参考文献
1 李华芳，李鸣.利培酮的血药浓度与临床效应的关系.上海精神医学，1999，新11（4）:189-192.
2 陈方斌，余海鹰.利培酮血药浓度测定及临床应用.中国新药杂志，2001，10（6）:450-453.
3 付崇铭，王登勤.反相高效液相色谱法测定人血中利培酮及9-羟利培酮及其临床应用.中国临床药理学杂志，2001，17（2）:121-124.
4 李文标，翟屹民，王传跃，等.高效液相色谱电化学检测法测定血清奥氮平浓度.药物分析杂志，2000，20（5）:304-307.
5 翟屹民，李文标.高效液相色谱库仑阵列电化学检测法测定血清中利培酮与9-羟利培酮.首都医科大学精神卫生学院论文汇编2002.
作者单位:136000吉林省脑科医院