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Effects of haw and hawthorn leaf extracts on serum SOD and GSH-Px in rats
ZHANG Shu-hua，CHU Jin-hua，WANG Hui，et al.
College of Public Health and Family Medicine，Capital Uni-versity of Medical Sciences，Beijing100054，China
【Abstract】 Objective Male Wistar rats were used as experimental subject to investigate the antioxidation effect of haw and hawthorn leaf extracts.Methods The rats were feeding on a high-fat diet for5weeks，while different dos-es of the two kinds of extracts were administered respectively by gavage once a day.Then serum SOD and GSH-Px activity were determined.Results It showed that both haw and hawthorn leaf extracts can increase the activity of SOD and GSH-Px，the activity of hawthorn leaf was higher than that of haw.Conclusion It indicates that haw and hawthorn leaf both have an action of antioxidation.
【Key words】 haw;hawthorn leaf;SOD;GSH-Px
山楂为蔷薇科植物，具有保健与药用的历史，近年来对山楂和山楂叶的化学、药理与临床等研究表明，具有降血压、降血脂的作用，尤其在心血管系统方面有有效的治疗保健和抗衰老作用，因此更加受到人们的青睐。本文用山楂和山楂叶的提取物进行了抗氧化作用的实验研究，为山楂和山楂叶的进一步开发、利用提供可靠的科学依据。
1 材料与方法
1.1 山楂和山楂叶的提取 山楂和山楂叶均采自北京房山地区。山楂用清水和去离子水浸洗干净，用消毒纱布擦干水分、去核、称重，加20倍去离子水煮1h。用四层纱布过滤，取一定量冷冻干燥，称重，计算含量。稀释成0.06g/ml、0.18g/ml、0.30g/ml的提取液备用 ［1］ 。山楂叶用清水和去离子水浸洗干净，自然晾干、去茎根、取叶部分称重，加20倍去离子水浸煮1h后过滤，取一定量冷冻干燥，称重，计算含量。稀释成0.03g/ml、0.09g/ml、0.15g/ml的提取液备用。
1.2 动物处理与分组 实验动物选用SPF级雄性Wistar大鼠，体重（200±50）g，由首都医科大学实验动物中心提供），在清洁、通风、恒温、恒湿、无污染的SPF环境下生长。适应性饲养大鼠1周后，按体重随机分为8组，每组10只。空白对照组:饲以基础饲料。高脂对照组:饲以高脂饲料（79%基础饲料+1%胆固醇+10%蛋黄酚+10%猪油） ［2］ 。山楂低剂量组:饲以高脂饲料，每天按0.8ml/100g bw灌胃0.06g/ml的山楂提取液。山楂中剂量组:饲以高脂饲料，每天按0.8ml/100g bw灌胃0.18g/ml的山楂提取液。山楂高剂量组:饲以高脂饲料，每天按0.8ml/100g bw灌胃0.30g/ml的山楂提取液。山楂叶低剂量组:饲以高脂饲料，每天按0.8ml/100g bw灌胃0.03g/ml的山楂叶提取液。山楂叶中剂量组:饲以高脂饲料，每天按0.8ml/100g bw灌胃0.09g/ml的山楂叶提取液。山楂叶高剂量组:饲以高脂饲料，每天按0.8ml/100g bw灌胃0.15g/ml的山楂叶提取液。连续给药35天，自由进食饮水，5周后禁食一天宰杀，断头取血，分离血清。
1.3 试剂、仪器 SOD、GSH-Px试剂盒购自南京建成生物工程研究所;旋转蒸发仪，冷冻干燥仪，紫外可见分光光度计（日本岛津公司UV-2450），恒温水浴箱。
1.4 实验方法 血清SOD活力测定:黄嘌呤氧化酶法 ［3］ ，血清GSH-Px的活力的测定:DTNB法 ［2］ 。
1.5 统计学方法 采用SPSS for Windows10.0统计软件进行统计学处理，计量数据进行单因素方差分析。
2 结果
2.1 山楂叶对大鼠血清SOD和GSH-Px的影响 见表1。
表1 山楂叶对大鼠血清中SOD和GSH-Px活性的影响 （略）
注:与高脂对照组相比 * P<0.05;与空白组相比 △ P<0.05
由表1可见，山楂叶剂量组和空白剂量组与高脂对照组间SOD差异无显著性（P>0.05）;高脂对照组GSH-Px值明显低于空白对照组，并且差异有显著性（P<0.05），山楂叶的各组GSH-Px与高脂对照组相比均有所增加，并有显著性差异（P<0.05），山楂叶高剂量组与空白对照组差异无显著性（P>0.05），中、低剂量组GSH-Px低于空白对照组，差异有显著性（P<0.05）。
2.2 山楂对大鼠血清SOD、GSH-Px的影响 见表2。
表2 山楂对大鼠血清中SOD和GSH-Px活性的影响 （略）
注:与空白组相比 Δ P<0.05，与高脂对照组相比 * P<0.05
表2结果表明:经单因素方差分析F=3.228，P<0.05，各组间有显著性差异。进一步进行两两比较，高脂对照组SOD值低于空白对照组且差异有显著性（P<0.05），山楂各剂量组与空白对照组SOD值差异无显著性（P>0.05），山楂高、中剂量组能够增加SOD活性，与高脂对照组相比差异有显著性（P<0.05），山楂低剂量组与高脂对照组差异无显著性（P>0.05）。
经单因素方差分析F=375.33，P<0.01，各组间差异有显著性。进一步进行两两比较，高脂对照组值GSH-Px低于空白对照组且差异有显著性（P<0.05），补充山楂后能增加GSH-Px活性，山楂各剂量组GSH-Px高于高脂对照组，差异有显著性（P<0.05）;但山楂各剂量组GSH-Px还是低于空白对照组且差异有显著性（P<0.05），山楂高剂量组与山楂低剂量组差异有显著性（P<0.05）。
2.3 山楂与山楂叶对大鼠血清中SOD、GSH-Px的影响的比较
2.3.1 山楂与山楂叶对大鼠血清中SOD的影响的比较 见图1。经单因素方差分析F=0.782，P=0.568，各组间无显著差异。
图1 山楂和山楂叶对SOD作用的影响（略）
2.3.2 山楂与山楂叶对大鼠血清中GSH-Px的影响的比较 见图2。经单因素方差分析F=44.433，P<0.01，各组间有显著差异，进一步进行两两比较，山楂叶各组GSH-Px值均高于山楂组，并差异有非常显著性（P<0.01）。
图2 山楂和山楂叶对血清GSH-Px作用的比较（略）
注:*相同剂量山楂和山楂叶组比较，P<0.05
3 讨论
近年来对山楂和山楂叶的作用越来越引起人们的关注，山楂不仅是一种天然食物，也是草药。山楂和山楂叶的主要化学成分为黄酮类，是公认的最具抗氧化潜力的一类化合物，许多疾病的发生发展与活性氧的产生有关。有望成为低毒高效的抗氧化剂来补充体内抗氧化物的不足，以防治某些活性氧作用所致疾病 ［3，4］ 。
体内氧自由基的产生和清除在正常情况下应当是平衡的。如果由于某种原因，使得体内产生的氧自由基过多，或者体内防护、清除和修复能力下降，体内就会出现氧自由基代谢的失衡，就会导致自由基损伤引起疾病的发生。说明体内已无力维持自由基平衡，需要补充外源氧自由基清除剂，帮助维持体内氧自由基的平衡。
机体中的抗氧化酶，主要有超氧化物歧化酶（SOD），各种过氧化物酶（GSH-Px）、过氧化氢酶（CAT）和其他血红素蛋白过氧化物酶。这些酶在防治氧代谢物的损伤中具有重要的作用，它们不但协同的防治活性氧的损伤效应，而且相互间还起着保护作用。
本研究进一步观察了山楂与山楂叶对大鼠血清中SOD、GSH-Px含量的变化，结果显示山楂叶剂量组和空白剂量组与高脂对照组间SOD活性差异无显著性（P>0.05），虽然在统计学上没差异有显著性，但也能看到不同剂量山楂叶SOD活性有增加的趋势。而山楂高、中剂量组与高脂剂量组相比有显著差异。山楂叶的各组GSH-Px活性与高脂对照组相比均有所增加，并差异有显著性（P<0.05），山楂各剂量组GSH-Px活性均高于高脂对照组，差异有显著性（P<0.05），说明具有抗氧化作用和降血脂作用。与文献报道相同 ［5，6］ 。
山楂和山楂叶的抗氧化作用不仅是由于含有维生素C、有机酸、黄酮等还原性物质的直接作用，更重要的是通过增强抗氧化物酶系统的活性而起作用的。
通过山楂与山楂叶对大鼠血清中SOD、GSH-Px的影响的比较，我们观察到山楂在增加SOD活力方面作用与山楂叶无显著性差异，但山楂叶增加GSH-Px活力优于山楂。
对山楂和山楂叶的研究有望成为一种高效的抗氧化剂来补充体内抗氧化物质的不足，以防治某些活性氧作用所致的疾病，为进一步的开发利用山楂特别是山楂叶的资源提供理论依据。
【参考文献】
1 高莹，肖莹.山楂及山楂黄酮提取物调节大鼠血脂的效果研究.中国食品卫生杂志，2002，14（3）:14-16.
2 庞战军，周玫，陈瑗.自由基医学研究方法.北京:人民卫生出版社，2000，118-120，147-151.
3 陈四平，臧亚茹.山楂叶的研究进展.承德医学院学报，2003，20（2）:164-165.
4 林秋实.山楂及山楂黄酮预防大鼠脂质代谢紊乱的分子机制研究.营养学报，2000，22（2）131-135.
5 曾昭晖.山楂叶茶水提物抗氧自由基作用的研究.首都医科大学学报，1996，17（2）:99-102.
6 陈吉，薛彬，李可基，等.速溶山楂饮料对高脂血症患者血脂、抗氧化酶和免疫功能的作用.中华预防医学杂志，2002，36（3）:172-175.
作者单位:100054北京，首都医科大学公共卫生与家庭医学学院
北京丰台疾病预防控制中心