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【摘要】 目的 探讨山楂提取物对小鼠免疫功能的调节作用。方法 建立小鼠免疫功能低下模型，观察山楂提取物对小鼠网状内皮系统吞噬能力、免疫脏器和白细胞的影响。结果 山楂提取物能增强网状内皮系统吞噬能力，能提高免疫低下模型小鼠的免疫脏器指数和升高外周血白细胞。结论 山楂提取物对免疫功能具有一定的增强作用。
【关键词】 山楂; 免疫; 白细胞
The modulating effects of hawthorn extract on the immune function
LIU Chun-li, ZHANG Feng-lin, LI Ming-kai，et al.
School of Biomedical Engineering 710032, China
【Abstract】 Objective To investigate the modulating effect of hawthorn extract on the immune function in mouse．Methods The model of immune hypo-function was established．The solution containing hawthorn extract was given and the impact to the reticulation endothelium system's ingestion ability, immune viscera and leucocyte were observed．Results Hawthorn extract could increase the ingestion ability of reticulation endothelium system, enhance the immune viscera index of immune function and increase the leucocytes．Conclusion Hawthorn extract played a promote role in immune function modulation．
【Key words】 hawthorn; immunity; leucocyte
山楂属蔷薇科植物，是一种天然食物，也是草药。山楂富含山楂酸、花色素、柠檬酸、酒石酸、抗坏血酸、咖啡酸、鞣酸、金丝桃甙、槲皮素、牡剂素、萜烯、有机酸及黄酮类等活性物质［1～4］。山楂是一个传统的消食健胃、活血化瘀、增强食欲和免疫功能的植物药，但作用机制尚不完全清楚。为探讨山楂提取物是否对免疫功能有调节作用，本实验应用反映免疫功能特性的指标观察山楂提取物对网状内皮系统吞噬能力、免疫脏器指数和白细胞的影响。
1 材料与方法
1.1 受试药物 取山楂果实，经80%乙醇回流提取2次，合并提取液，浓缩成浸膏。分别取一定量浸膏加水稀释，搅拌均匀，浓缩成含生药5 mg/ml的样品。
1.2 实验动物 昆明种小鼠，体重18～22g，雌雄各半，由第四军医大学实验动物中心提供。生产合格证为陕动字08-013号。颗粒饲料喂养，分笼饲养于空调温室内，室温（23±2）℃，相对湿度45%～60%，自由饮用自来水，自动控制昼夜各12h，自动换气通风。
1.3 方法
1.3.1 小鼠免疫功能低下模型的制备 应用免疫抑制药环磷酰胺（30mg/kg体重皮下注射，每2天1次，共3次）以及氢化可的松（15mg/kg体重灌胃，每天1次，共5次），同时设立蒸馏水以检验模型是否成功。
1.3.2 刚果红廓清实验 山楂提取物（0.1g/kg）、阳性药物左旋咪唑（0.625 g/kg体重）及蒸馏水阴性对照灌胃，每天1次，连续给药5天，于末次给药24h后从小鼠尾静脉注射刚果红15min后眼眶取血，离心后取血浆，以稀氢氧化钠液（pH=10）稀释，在721型分光光度计上比色，波长为520nm，计算刚果红在外周血中存留的浓度。
1.3.3 对小鼠免疫脏器影响的实验 小鼠免疫功能低下模型的制备及给药同前，第6天脱颈处死动物，取肝脏、脾脏和胸腺等免疫器官，秤重。
1.3.4 对小鼠白细胞影响的实验 小鼠免疫功能低下模型的制备及给药同前，第6天眼眶取血，吸取20μl外周血置于已加0.38ml淋巴细胞计数稀释液的试管中，混匀，静置5min，待红细胞和血小板完全溶解后，再混匀，取一滴加入白细胞计数盘，静置3min，待白细胞沉下后计数。按白细胞计数法数4角大方格中白细胞数，每mm3血中白细胞数=四大方格的白细胞数×50。
2 结果
2.1 刚果红溶液标准曲线的计算 配置0.25%、0.1%、0.075%、0.05%、0.025%、0.01%、0.0025% 7个不同浓度的刚果红溶液，在721型分光光度计上比色，波长为520nm，灵敏度为1，测得光密度值分别为0.690、0.269、0.205、0.148、0.070、0.044、0.024，计算得r=0.9995，Y=0.3688X（Y为刚果红浓度，X为光密度值）。
2.2 对小鼠网状内皮系统吞噬能力的影响 根据刚果红溶液标准曲线，计算各组小鼠外周血中存留的刚果红浓度, 见表1。由表1所示，环磷酰胺和氢化可的松制备的免疫低下模型小鼠吞噬细胞系统廓清功能明显降低，山楂提取物和左旋咪唑（阳性对照药）可增强免疫低下模型小鼠吞噬细胞系统廓清功能。
2.3 山楂提取物对小鼠免疫脏器指数的影响 见表2。由表2所示，环磷酰胺制备的免疫低下模型小鼠免疫脏器的指数明显降低，山楂提取物和左旋咪唑可提高免疫低下模型小鼠的免疫脏器指数。
2.4 山楂提取物对小鼠外周血白细胞的影响 见表3。
表1 山楂提取物对小鼠吞噬细胞廓清功能的影响 （略）
注：*P<0.05 vs 蒸馏水组,#P<0.05 vs 蒸馏水组
表2 山楂提取物对小鼠免疫脏器指数的影响 （略）
注：*P＜0.05 vs 对照组，#P＜0.05 vs 环磷酰胺模型组
表3 山楂提取物对小鼠外周血白细胞（102个/mm3）的影响 （略）
注：*P<0.05 vs 对照组，#P<0.05 vs蒸馏水组
由表3所示，环磷酰胺和氢化可的松制备的免疫低下模型小鼠外周血白细胞明显降低，山楂提取物对环磷酰胺和氢化可的松制备的免疫低下模型小鼠外周血白细胞有升高作用，左旋咪唑可升高免疫低下模型小鼠的外周血白细胞。
3 讨论
机体的免疫系统是由非特异性免疫、体液免疫和细胞免疫共同构成的防御系统，单核巨噬细胞的吞噬能力是衡量机体非特异免疫功能的标志之一。当细菌、异物等抗原性物质进入机体后，可迅速被单核巨噬系统吞噬和清除，因而巨噬细胞廓清指数的多少可以反映其吞噬功能的强弱。针对病原微生物侵袭和体内细胞变异，体液免疫和细胞免疫通过形成抗体或产生细胞因子等方式针对特异性抗原产生各种生物学效应。
有关研究表明，山楂对巨噬细胞的吞噬功能有显著增强作用，在安全可靠的基础上具有一定的调节体液免疫功能作用，能明显提高小鼠抗体生成和巨噬细胞吞噬鸡红细胞的功能［5］。另外，山楂还可使人体lgG水平轻度增加，使NK细胞活力均显著提高［6］。在体内和体外实验均证实山楂能抗过敏反应［7］。本文通过观察山楂提取物对免疫功能低下小鼠免疫功能状态的影响及调节作用，结果显示山楂提取物能增强网状内皮系统吞噬能力，提高免疫低下模型小鼠的免疫脏器指数和升高外周血白细胞，说明山楂提取物能显著提高免疫功能低下小鼠机体的免疫功能。
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（编辑：宋 冰）
作者单位： 710032 陕西西安，第四军医大学生物医学工程系（*唐都医院麻醉科，＃药学系药理学教研室，△通讯作者）