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He-Ne激光照射对淋巴结内巨噬细胞、 淋巴细胞影响的实验研究(pdf)
【摘要】 目的 探讨弱激光对机体免疫刺激作用的机理。方法 用剂量63.7J/cm2的He-Ne激光照射小鼠神阙穴，照射时间为10天，每天照射5min，（1）采用台盼蓝活体注射显示巨噬细胞吞噬力试验方法；（2）采用吖啶橙（AO）显示核酸的荧光染色法分别观察小鼠肠系膜淋巴结内巨噬细胞的吞噬功能和淋巴细胞内核酸含量的影响。（3）观察淋巴结组织结构。结果 （1）照射组淋巴结内巨噬细胞吞噬功能较对照组显著增高，差异有非常显著性(P<0.01)；（2）照射组淋巴细胞内核酸含量较对照组明显增多。（3）淋巴小结增多增大。结论 适当剂量的He-Ne激光可激活淋巴结免疫功能，提高机体免疫力。
【关键词】 激光；巨噬细胞； 淋巴细胞
An experimental study of He- Ne laser irradiation on the macrophages and lymphocytes in lymph node
REN Ming-ji, JIANG Li-ping,WU Yan,et al.Department of Histology and Embryology,Inner Mongolia Medical College,Hohhot 010059 ,China
【Abstract】 Objective To research the effects of He-Ne laser irradiation on immunity of organism. Methods Shenque acupoints of mice abdomen were irradiated by He-Ne laser at the dosages of 63.7J/cm2 for 10 days , 5 minutes each day .Then following methods are taken : (1)Observing the phagocytosis of the macrophages in lymph node after trypan blue injecting the live mice .(2)Observing the changes of nucleic acid of lymphocytes with fluorescence microscope. (3) Observing the tissue structure of lymph node by HE stain.Results The four indexes : number of trypan granule , area of granule , ratio of granule area to cell area and granule integral optical density at irradiated group were higher than that of non-irradiated group (P<0.01) . The nucleic acid of irradiated groups were higher than non-irradiated group. In addition. the lymphoid nodule in the irradiated groups remarkable changes indicating their activation. Conclusion He-Ne laser at appropriated dosages may activate lymph node and enhance the immunity of organism.
【Key words】 laser;macrophage; lymphocyte
淋巴结是机体的主要周围淋巴器官，位于淋巴循环的通路上，其大小、结构及内含细胞成分的变化与机体的免疫功能状态密切相关。本文采用He-Ne激光照射小鼠神阙穴后，观察激光对肠系膜淋巴结组织结构和其内巨噬细胞吞噬力及淋巴细胞增殖能力的影响。旨在探讨低强度激光对机体免疫刺激作用机制，为临床应用提供实验依据。
1 材料与方法
1.1 材料 昆明种小白鼠，体重18～22g，雌雄各半，随机分成对照组和照射组，采用上海产1000B(c)He-Ne激光器照射小鼠神阙穴（剪毛），照射功率25mW，照射剂量为63.7J/cm2 ，光斑直径0.3cm ，照射时间为10天，每天照射5min。
1.2 方法 （1）取材前3日，每天往腹腔内注射0.5%的无菌台盼蓝0.3ml ，第4日取肠系膜淋巴结。用10%福尔马林固定，常规法制成石蜡切片，用伊红淡然，将切片用HI-CI型医学图像分析系统于每组600倍光镜下随机选择12屏，统计巨噬细胞吞噬台盼蓝的颗粒数目(GN)、颗粒面积(GA)及其与细胞面积之比(GA/CA)和颗粒积分光密度(IOD) 4项指标，并输入微机作F检验。（2）取肠系膜淋巴结涂片，用Carnoy 氏固定液固定15min, 再用0.01% AO缓冲液染色10min, 置OLYMPUS BHF-型荧光显微镜的高倍镜下观察，DNA呈黄色荧光，RNA呈红色荧光，DNA或RNA含量越多，黄色或红色越深越亮。（3）常规HE染色方法观察淋巴结的组织结构。
2 结果
2.1 He-Ne激光对淋巴结巨噬细胞吞噬能力的影响 淋巴结的每组切片置图像分析系统的光镜下放大600倍，随机选择12屏观察淋巴结髓质区，巨噬细胞胞质内出现蓝色颗粒为阳性，台盼蓝颗粒呈大小、粗细不等，分布不均，颜色深浅各异。图像分析结果用统计软件作F检验，见表1。表1 He-Ne激光照射对淋巴结巨噬细胞吞噬功能的图像分析结果注：照射10天组与对照组比较，*P<0.01
结果表明：照射组的巨噬细胞吞噬台盼蓝的颗粒数目、颗粒面积、颗粒面积与细胞面积之比和颗粒的积分光密度四项指标均较对照组增高，差异有非常显著性(P<0.01)。
2.2 He-Ne激光对淋巴细胞内核酸的影响 活性染料AO同时显示两种核酸，在荧光镜下 DNA呈黄色荧光，RNA呈红色荧光，随核酸含量的增加，颜色加深变亮。本实验结果显示：照射组淋巴细胞内黄色和红色较对照组明显的加深、变亮。说明照射组淋巴细胞中两种核酸含量较对照组增多。同时可见许多增殖分化形成的浆细胞。
2.3 He-Ne激光对淋巴结组织结构的影响 本实验用光镜观察淋巴结实质结构，与对照组比较照射组的淋巴结内淋巴小结多而大，生发中心明显，高内皮微静脉变大。髓索内可见浆细胞。
3 讨论
淋巴结的大小、结构及内含细胞成分的变化与机体的免疫功能状态密切相关。淋巴结受不同的抗原刺激可发生不同的应答变化，各种结构相对增大或缩小，并与疾病相关。淋巴结的巨噬细胞在负责清除淋巴液中的抗原物质的同时处理抗原，并提呈给T淋巴细胞，T淋巴细胞增殖，引发细胞免疫。B细胞接触抗原后，在Th细胞的辅助下增殖分化，导致淋巴小结增多增大，髓索中浆细胞增多，引发体液免疫［1］。
低能量的He-Ne激光已在临床广泛的应用，并取得了显著的治疗效果［2］。尤其对免疫性疾病疗效更佳［3］。有关作用机制的研究已有很多报道［4,5］。神阙穴（脐中央）位于经络上，具有运行气血，沟通上下表里，调节脏腑机能。我们采用He-Ne激光照射小鼠神阙穴后，从组织、细胞和分子水平观察了He-Ne激光对淋巴结的影响，结果显示：(1)与对照组比较，照射组的淋巴结中淋巴小结明显增多、增大，在淋巴索中可见浆细胞，高内皮微静脉变大。说明He-Ne激光照射可增强体液免疫，促进淋巴细胞再循环。(2)各照射组GN、GA、GA/CA 及IOD四项指标均较对照组显著增高。(3)照射组淋巴结的淋巴细胞DNA和RNA含量明显增多，同时观察到B淋巴细胞分化为浆细胞及其各种过渡状态的细胞。DNA是生物遗传的物质基础，遗传信息通过DNA转录成RNA，再由RNA翻译成特定的蛋白质，通过蛋白质执行各种生命的功能［6］。B淋巴细胞活化后进行增殖分化形成浆细胞。提示He-Ne激光可激活淋巴结内免疫细胞。增强巨噬细胞吞噬功能，促进淋巴细胞增殖分化能力，特别是B淋巴细胞增殖分化浆细胞，促进淋巴细胞再循环，提高机体的免疫功能。
【参考文献】
1 成令忠.现代组织学.上海：上海科学技术文献出版社,2003,640.
2 Jing Chen , Dai Chengxiang , Liu Ruiyun, et al .Low dosage HeNe laser irradiated in blood vessel to treat 60 patients with coronary artery disease . Chinese Journal of Physical Therapy ,1997，20(3):89-90 (in Chinese)
3 安雅民. 氦氖激光治疗感染伤口疗效观察. 中华理疗杂志，1991,14（1）：26-27.
4 高美华，李武修，冯献启，等. 激光照射对荷瘤小鼠淋巴细胞活性的影响.中国激光，2002,29（4）：381-382.
5 任明姬，师永红，辛兰，等. He-Ne激光穴位照射对小鼠腹腔巨噬细胞功能的影响.中国激光医学杂志,2000,9（2）：109-112.
6 谷志远.现代医学分子生物学.北京：人民军医出版社，1998,30.
*基金项目：内蒙古自然科学基金资助项目（No 20001306）
作者单位： 010059 内蒙古呼和浩特,内蒙古医学院组织胚胎学教研室
(编辑：李 木)