应用PCR-SSP方法研究内蒙古地区少数民族HLA-DQA1基因多态性

     应用PCR-SSP方法研究内蒙古地区少数民族HLA-DQA1基因多态性 (pdf)  

    【摘要】  目的  探讨内蒙古地区鄂温克族和回族少数民族群体HLA-DQA1基因多态性，并与南、北方汉族及南方少数民族做比较，分析其基因型多态性分布特点。 方法  采用多聚酶链式反应—序列特异性引物（PCR-SSP）技术研究了99例鄂温克族、56例回族健康人群的HLA-DQA1基因位点多态性分布情况。 结果  鄂温克族HLA-DQA1等位基因频率依次为：*0301（0.394），*0104（0.212），*0102（0.152），*0501（0.152），*0103（0.04），*0201（0.051）；未检测到的基因是*0601；*0401；*0302；回族HLA-DQA1等位基因频率依次为：*0301（0.339），*0102（0.214），*0501（0.143），*0601 （0.143），*0401（0.036），*0201（0.054），*0103 （0.071）；未检测到的基因是*0302，*0101，*0104。结论  鄂温克族和回族的HLA-DQA1等位基因分布既有共同点，也各有其独特性。与中国其他民族比较具有差异性。

    【关键词】  人类白细胞抗原；PCR-SSP；基因； 多态现象

      Investgation of HLA—DQA1 polymorphism in national minority of Inner Mongolia by PCR-SSP

    JIANG Li-ping,SUN Li-hua,BAO Tu-ya,et al.Histology and Embrology Teaching and Research Section, Inner Mongolia Medical College,Hohhot 010059，China

    【Abstract】  Objective  To investgate the distribution of HLA-DQA1 gene polymorphism in Ewenki and Hui nationalities of Inner Mongolia;Having compared with other groups in China to analyze the charactoristic of the gene types.Methods  By the polymerase chain reaction(PCR)-squence specific primer(SSP).Results  Gene frequncy of 99 in Ewenki were : *0301（0.394）,*0104（0.212）,*0102（0.152）,*0501（0.152）,*0103（0.04）,*0201（0.051）；*0601,*0401,*0302were abcent ；Gene frequncy of 56 in Hui were *0301（0.339）,*0102（0.214）,*0501（0.143）,*0601 （0.143），*0401（0.036）,*0201（0.054）,*0103 （0.071）；*0302,*0101, *0104 were abcent.Conclusion  There was not only the same charactoristics but also the special ones in HLA—DQA1 gene polymorphism of Ewenki and Hui nationalities which had some difference by comparing with other groups in China.

    【Key words】  human leucocyte antigen;PCR-SSP;gene;polymorphsim

    HLA是人类主要组织相容性复合体，它不仅具有个体差异，而且还有不同民族的差异。不同群体HLA基因分布的调查，对于探讨各民族起源有很重要的意义［1］。HLAⅡ类抗原DQ由高度多态的A、B链构成，研究DQA的多态性对于人类种群关系研究、人类进化、相关疾病和异体移植有着重要的理论意义和实践意义。鄂温克族是个人口总数很少的民族，主要聚居在我国东北地区，少数居住于黑龙江省。回族分布在全国各地。近几年随着分子生物学的快速发展，对人类健康群体的研究不断深入。本文采用PCR-SSP法，从探讨鄂温克族、回族HLA-DQA1基因多态性入手，研究其基因分布的异同点，并与中国其他民族做比较。

    1  材料与方法

    1.1  研究对象  99例鄂温克族健康人标本来源内蒙古东部地区三代以上父母均为鄂温克族，男48例，女51例，平均年龄23.30岁。静脉取血2～3ml，加抗凝剂，-20℃保存。56例回族健康人，标本来源健康体检，男34例，女22例，平均年龄38.60岁。

    1.2  实验材料和方法

    1.2.1  标本DNA制备  参照文献［2,3］。

    1.2.2  PCR—SSP法1.2.2.1  引物设计  HLA-DQA1特异性扩增引物参照文献［4］稍作修改， 9个5′引物及7个3′引物共组成12对不同的引物对，能鉴定有表达产物的HLA-DQA1等位基因。

    1.2.2.2  PCR扩增条件及试剂  每管PCR反应液总体积为10μl，包括：DNA模板1μl(80ng);10ⅹBuffher 1μl;4ⅹdNTP 1μl(2.5mM);Primer 1μl(各5pmol);Taq DNA 聚合酶0.35U(华美生物工程公司提供)加去离子四蒸水至10μl，混匀，稍加离心，加2μl无菌石蜡油以防蒸发。置PCR仪上按92℃预变性（2′）；92℃变性（30″）；60℃退火（45″）；72℃延伸（60″）；72℃最后延伸（10″）的程序进行32个循环扩增。

    1.2.3  统计学方法  基因频率用直接计算法统计，群体间的等位基因比较采用χ2检验。

    2  结果

    2.1  内蒙古地区鄂温克族、回族HLA-DQA1等位基因频率  见表1（略）。

    2.2  内蒙古地区鄂温克族、回族HLA-DQA1等位基因分布与其他民族比较  见表2。

    根据测得的鄂温克族、回族HLA-DQA1等位基因频率与国内学者对其他民族群体该基因位点研究的数据进行了比较，结果见表2。 表1  内蒙地区鄂温克族、回族HLA-DQA1等位基因的分布频率（略）表2  内蒙地区鄂温克族、回族HLA-DQA1等位基因频率（略）注：与鄂温克族比较：1）P<0.01,2)P<0.05；与回族比较：3）P<0.01,4）P<0.05

    3  讨论 

    MHC-Ⅱ类抗原在人类称HLA-Ⅱ类抗原，他是存在于人体第六对染色体短臂上一组密切连锁基因群的表达产物，一般认为有三个亚区，即DP、DR、DQ，每一个位点至少有一个α基因和一个β基因。据研究表明［5，6］，HLA不同基因座位的各等位基因在人群中以一定频率出现，且呈现为连锁不平衡。由于这些特点，某些单体型在群体中以较高频率出现，并较之单一HLA基因型更能显示人种和地理族的特点［7］。

    本文运用PCR—SSP法对鄂温克族和回族人群的DQA1基因多态性进行了研究，并与云南汉族、满族、维吾尔族、北方蒙古族做比较。研究结果表明：鄂温克族和回族的HLA-DQA1*0301、*0501、*0102的等位基因频率较高；*0201、*0103均较低，在统计学上差异无显著性。而回族的*0601基因是高频率基因，在鄂温克族却未检测到；鄂温克族的*0104是高频率基因，在回族却未检测到。与其他民族群体比较，鄂温克族与云南汉族在*0601；与满族在*0601、*0104、*0301、*0101；与维吾尔族在*0101、*0103、*0201、*0301；与北方蒙古族在*0101、*0102、*0103、*0302、*0601上差异均有显著性。回族与云南汉族在*0104、*0201、*0601；与满族在*0101；与维吾尔族在*0101、*0103、*0201、*0301；与北方蒙古族在*0101、*0102上差异均有显著性。

    对上述资料的解释为：我国是个多民族的国家，中华民族的形成和发展经历了一个复杂的融和、变迁的历史过程。由于历史、地理、自然环境、社会等各种因素的影响，不同民族，甚至同一民族的不同群体的HLA基因型构成存在差异。经比较鄂温克族与南方汉族仅在*0601上差异具有显著性，而在其他基因型上却无明显差异；回族与满族在*0101上差异有显著性，而在其他基因型上却无明显差异。这种现象能否运用地理、历史、环境、社会等因素来解释，有待进一步加大样本量，来分析以上两个民族的遗传规律及基因结构。

    【参考文献】

    1  陈亭平，王琳琳，林伟雄,等.越南中部京族HLA-DQA1等位基因多态性分析.中华微生物和免疫学杂志，2004，24（2）：112-114.

    2  J萨姆布鲁克，E F弗里奇，J曼尼阿蒂斯.分子克隆实验指南,第二版.北京:科学出版社，1992,919-924.

    3  卢圣栋.现代分子生物学实验技术.北京:高等教育出版社，1993,571-584.

    4  Olerup O,Aldener A,Fogdell A,et al.HLA-DQB1 and HLA-DQA1 typing by PCR amplifi cation  with sequence specific primer(PCR-SSP)in 2 hours.Tissue Antigens,1993,41:119

    5  Gao XH,Winsey S,Li G, et al.HLA-DR and DQ polymorphsim in bullous pemphioid form Northern China.Blackwell Science Ltd,Clinical and Experimental Dermatology,2002，27:319-321.

    6  Correa PA,Whitworth WC,Kuffner T，et al. Polymorphsim in the north-western Colombian population.Tissue Antigens,2002，59:436-439.

    7  耿排力，吴洪福，朱海宏，等.青海土族、撒拉族HLA—DQA1和DQB1基因多态性探讨.中国免疫学杂志，2005,21（1）:35-39.

  作者单位： 1 010059 内蒙古呼和浩特，内蒙古医学院组胚教研室（Δ通讯作者）

    2 010059 内蒙古呼和浩特，内蒙古医学院第一附属医院康复科 

　 (编辑：李  木)