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【摘要】 目的 建立高效液相色谱法测定精制冠心颗粒中赤芍的芍药苷含量。方法 采用Hypersil ODSC18（4.6mm×200mm,5μm）色谱柱，乙腈－0.1%磷酸溶液（13：87）为流动相，流速为1.0ml/min，检测波长230nm。 结果 芍药苷在0.1210～1.0886μg范围内呈良好的线性关系，r=0.9999，平均回收率为99.93%（n=6），RSD=1.45%。 结论 所建立的方法稳定、可靠，可为该产品建立质量控制方法提供参考。
【关键词】 高效液相色谱法; 精制冠心颗粒; 芍药苷; 含量测定
Determination of paeoniflorin in Jingzhiguanxin granules by HPLC
ZHOU Lin. Yongzhou Institute for Drug Control.Hunan 425100,China
【Abstract】 Objective To establish a HPLC method for determination of paeoniflorin in Jingzhiguanxin granules. Methods A Hypersil ODSC18 column（200mm×4.6mm,5μm）was used with a mobile phase of acetonitrile-0.1%phosphoric solution（13:87）.The flow rate was 1.0ml/min and the detection wavelength was 230nm. Results The linearity range of paeoniflorin was 0.1210～1.0886μg （r=0.9999）, the average recovery rate was 99.93%（n=6）with RSD 1.45%. Conclusion This method is accurate,,reproducible and availed for the quality control of Jingzhiguanxin granules.
【Key words】 HPLC; jingzhiguanxin granules; paeoniflorin; determination
精制冠心颗粒由丹参、红花、川芎、赤芍、降香组成，具有活血化瘀等功效，用于瘀血内停所致的胸痹，症见胸闷、心前区刺痛。该药品标准收载于《中国药典2005年版一部》，缺含量测定项。方中丹参为君药，但丹参的丹酚酸在加水煎煮时水解，其含量不稳定，故不选择丹参作为含量测定指标。赤芍为方中臣药，具有清热凉血、化瘀止痛的功效，其有效成分为芍药苷［1,2］，本文采用高效液相色谱法对赤芍的芍药苷进行了含量测定研究。该方法稳定、可靠，可为该产品建立质量控制方法提供参考。
1 仪器与试药
岛津LC-10AD高效液相色谱仪（配有SPD-10A检测器，N2000色谱工作站），AE240电子分析天平（梅特勒公司）。芍药苷对照品（供含量测定用，批号：110736-200424，中国药品生物制品检定所提供），3批精制冠心颗粒（批号分别为：20060312，20060316，20060425）。乙腈、磷酸为色谱纯，水为超纯化水，其他试剂均为分析纯。
2 溶液的制备
2.1 对照品溶液 精密称取芍药苷对照品15.12mg，置50ml量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取2ml，置10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。
2.2 供试品溶液 取本品约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，超声处理（功率300W，频率50kHz）40min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液即得。
2.3 缺赤芍阴性样品溶液 取缺赤芍阴性样品，同“2.2”项下方法操作，即得。
3 方法与结果
3.1 色谱条件与系统适用性试验 色谱柱为Hypersil ODSC18（4.6mm×200mm,5μm），流动相为乙腈－0.1%磷酸溶液（13：87），流速为1.0ml/min，柱温为室温。分别精密吸取“2”项下对照品溶液、供试品溶液及缺赤芍阴性样品溶液各10μl，注入液相色谱仪，按本色谱条件测定。结果芍药苷理论塔板数为12000以上，芍药苷与邻近的杂质峰分离度为2.6以上，阴性样品在芍药苷对照品相同保留时间位置上未见色谱峰，说明方中其他成分对芍药苷测定无干扰，结果见图1。
A.对照品 B.样品 C.阴性样品
图1 HPLC色谱图3.2 线性关系考察 精密吸取“2.1”项下对照品溶液2、6、10、14、18μl注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定峰面积，并以峰面积（Y）对进样量（X，μg）进行线性回归，得线性方程：Y=1661351.89X-6260.33，r=0.9999，进样量在0.1210～1.0886μg范围内呈良好的线性关系。
3.3 精密度、重复性试验和稳定性试验 按上述色谱条件，精密吸取“2.1”项下对照品溶液连续进样6次，每次10μl，峰面积平均值为1099626.6，RSD为0.9% ，结果表明精密度良好。按“2.2”项下方法处理同一批样品（批号：20060316）6份，HPLC分析，进样量均为10μl，芍药苷含量的平均值为3.52 mg/g，RSD为1.1% ，结果表明重复性良好。精密吸取“2.2”项下供试品溶液10μl，按上述色谱条件于0、2、4、8、12h进样测定，峰面积平均值为1169356.7 ，RSD为1.9%结果表明供试品溶液在室温下，12h内稳定。
3.4 加样回收试验 取已知含量的精制冠心颗粒样品（批号：20060312，含量为3.61 mg/g）6份，每份约0.5g，分别置具塞锥形瓶中，分别精密加入对照品溶液（0.1768mg/ml）各10ml，再按“2.2”项下方法制备供试品溶液，HPLC分析，进样量均为10μl，结果见表1。表1 加样回收率测定结果
3.5 样品的测定 精密称取3批样品（批号分别为：20060312，20060316，20060425）各3份，每份约1g。按“2.2”项下方法制备供试品溶液，HPLC分析，进样量均为10μl，按外标法计算芍药苷含量，结果见表2。表2 样品测定结果
4 讨论
4.1 流动相的选择 参考文献［3，4］，试验中考察了三组流动相系统：甲醇-0.05mol/L磷酸二氢钾溶液、甲醇-异丙醇-水-冰醋酸、乙腈-0.1%磷酸溶液，结果表明以乙腈-0.1%磷酸溶液（13：87）为流动相时，芍药苷峰基线分离，且峰形较好，故选择流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液（13：87）。
4.2 提取方法的选择［3，4］ 比较超声提取与回流提取，发现芍药苷提取率相差不大，因超声提取供试品溶液所含杂质较少，且方法简单，便于操作，故选择超声提取。曾试验了甲醇和稀乙醇提取，结果甲醇优。考察了甲醇溶剂量（40、50、60ml），结果选择甲醇50ml。考察了提取时间（20、40、60min），结果选择40min。
【参考文献】
1 江苏新医学院.中药大辞典（上册）.上海：上海人民出版社，1977，1093-1095.
2 国家药典委员会.中华人民共和国药典（2005年版,一部）.北京：化学工业出版社，2005，68-69.
3 汤美健，罗海龙，李永江,等.HPLC法测定除湿白带丸中芍药苷的含量.中国药品标准，2007，8（5）：71-74.
4 周祖坤，孙代华，凌飒.高效液相色谱法测定当归芍药颗粒剂中芍药苷的含量.药物分析杂志，2006，26（7）：1001-1003.
作者单位：425100 湖南永州，永州市药品检验所