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首页合作平台在线期刊中华中西医杂志2005年第6卷第5期论著

山楂叶总黄酮对小鼠组织脂蛋白脂酶的表达影响

来源:INTERNET
摘要:【摘要】目的观察山楂叶总黄酮对小鼠组织细胞脂蛋白脂酶表达影响。方法将小鼠随机分为正常对照组、吡咯列酮组、山楂叶总黄酮组(n=10),给药8天后,ELISA法检测血液、脂肪组织、肌组织所含LPL。结果与对照组相比,各组鼠血液中LPL均无明显改变(P0。肌组织中吡咯列酮组LPL增高(P0。...

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  【摘要】 目的  观察山楂叶总黄酮对小鼠组织细胞脂蛋白脂酶表达影响。 方法  将小鼠随机分为正常对照组、吡咯列酮组、山楂叶总黄酮组(n=10),给药8天后,ELISA法检测血液、脂肪组织、肌组织所含LPL。 结果  与对照组相比,各组鼠血液中LPL均无明显改变(P>0.05);肌组织中吡咯列酮组LPL增高(P<0.05),山楂叶总黄酮高、中、低组的LPL增高(P<0.001、P<0.01);而脂肪组织中吡咯列酮组的LPL降低(P<0.05),山楂叶总黄酮高、中组的LPL降低(P<0.01)。 结论  山楂叶总黄酮能影响小鼠LPL的表达,并有组织表达差异。

    Effect of hawthorn total flavonoids on expression of lipoprotein lipase in mice tissues

    Yan Jin,Fan Chunlei,Wo Xingde,et al.

    Life Science Department,Zhejiang College of Traditional Chinese Medicine,Hangzhou310053.
   
    【Abstract】 Objective To investigate the effect of total flavonoids of hawthorn leaves on the expression of lipoprotein lipase in mice tissues.Methods 50ICR mice were randomly divided into three-groups:the control group was treated with distilled water;pioglitazone group was treated with10mg/kg;the flavonoids groups were treated with16mg/kg,8mg/kg,4mg/kg respectively.The LPL mass in serum,adipose tissue,muscular tissue of each group were detected by enzyme labeling linked immunosorbent assay(ELISA).Results No significant difference of LPL mass in serum was found for all groups.Comparing with the control group,the flavonoids groups and the pioglitazone group,the LPL level in muscular tissues increased significantly,but the LPL level in adipose tissues decreased.Conclusion Our experimental results demonstrated that the total flavonoids of hawthorn leaves had a significant effect on the ex-pression of lipoprotein lipase in mice and difference in different tissues.

    【Key words】 lipoprotein lipase hawthorn flavonoids pioglitazone mice ELISA

    脂蛋白脂酶(lipoprotein lipase,LPL)是一种调节脂质燃料处理的关键酶,它催化血循环中富含甘油三酯的脂蛋白水解,提供脂肪酸供组织利用。LPL可由大多数组织产生,尤其在骨骼肌、心肌和脂肪组织合成率最高。LPL在多大程度上影响冠心病尚未充分明了。就现有资料看,作为空腹和餐后脂蛋白分解的关键调节因子,LPL具有抗动脉粥样硬化的作用,因此以此作为靶标对治疗脂质异常预防动脉粥样硬化具有重要意义 [1] 。山楂是一种常用的消导类中药,近年的研究表明,其黄酮类成分还具有降血压、强心、降血脂等药理作用 [2,3] ,临床用于治疗冠心病、心律失常已有多年,但对山楂的基础研究不多。本文通过观察山楂叶总黄酮对小鼠组织细胞脂蛋白脂酶表达影响,探讨山楂叶总黄酮的降血脂作用的分子机制。

    1 材料与方法

    1.1 材料 ICR小鼠:50只,雌、雄兼用,20~22g左右由浙江中医学院动物中心提供;盐酸吡咯列酮购自江苏恒瑞医药股份有限公司;山楂叶总黄酮购自山西中晋药业有限公司;羊抗鸡IgG-HRP购自美国KPL公司;鼠抗牛LPL单克隆抗体,鸡抗人LPL抗体,本实验室自制;纯化的LPL:日本ToYoBo.Co;酶标仪:美国,Dynatech MR4100。

    1.2 方法 小鼠50只,随机分为正常对照组、阳性对照组、山楂叶总黄酮高、中、低组,每组10只,雌、雄各半,分笼饲养,常规进食(普通饲料)、饮水。给药方式:每日灌胃1ml/一次,共8天。正常对照组,灌水1ml/每鼠;阳性对照组,吡咯列酮(TD类药)10mg/kg;山楂叶总黄酮高剂量组16mg/kg;山楂叶总黄酮中剂量组8mg/kg;山楂叶总黄酮低剂量组4mg/kg。小鼠末次给药6h后取样:(1)血样:摘眼球取全血,3000rpm×10min离心,分离血清,-20℃保存。(2)组织匀浆:分别取后腿肌肉组织、腹腔脂肪组织,按W/V(1:1),加PBS(pH7.4),冰浴中碾磨15min,8000rpm,4℃离心15min,取上清液,获鼠肌、脂肪匀浆液。ELISA法检测血液、组织所含LPL:鼠抗牛LPL单克隆抗体(1:4000)包被96孔酶标板,1%BSA封闭,加入血清或组织上清液,再分别加鸡抗人LPL抗体(1:2000),羊抗鸡IgG-HRP(1:2000),邻苯二胺显色后492nm读OD值。

    2 结果

    对于血液中LPL,两用药组与对照组相比均无明显差异(P>0.05)。与对照组比,在肌组织中,TD组LPL的含量显著增高(P<0.05);山楂叶总黄酮高剂量组有极其显著性增高(P<0.001);中、低剂量组有极显著性增高(P<0.01)。与对照组比,在脂肪组织中,TD组LPL含量显著减少(P<0.05),山楂叶总黄酮高、中剂量组LPL含量有极显著 性减少(P<0.01),见表1。

    表1 各组织中LPL含量 (略)注:与对照组比, * P<0.05有显著增高, ** P<0.01有极显著性增高, *** P<0.001有极其显著性增高; △ P<0.05有显著减少, △△ P<0.01有极显著减少

    3 讨论

    山楂叶总黄酮是从山楂叶子中提取的黄酮类化合物的总称,已分离出三十余种单体。其中黄酮类化合物能显著降低总胆固醇和甘油三酯(TG)。但对山楂降脂研究大多限于临床和动物实验的疗效观察,未能深入探讨山楂叶总黄酮作用的分子机理,国内有学者认为山楂、山楂黄酮有上调低密度脂蛋白表达的作用,通过低密度脂蛋白受体途径降低血清胆固醇含量 [4] 。LPL在脂蛋白分解代谢中起主要作用,几乎在各主要器官、组织均有表达(肝脏除外),且各组织的LPL对机体脂质代谢的作用各不相同,在转录与转录后各级水平上的调控也明显存在差异。这对于决定LPL水解产物-游离脂肪酸(FFA)的流向具有重要意义。可用脂肪组织(AT)与骨骼肌组织(SM)中LPL的活性比值作为判断FFA流向的一个重要指标 [5] 。比值较高时体内FFA将更多流向脂肪组织进行脂质的积聚与能量的储备,比值较低时进入肌肉组织以利于机体氧化产能。本文用山楂叶总黄酮和噻唑烷二酮(thiazolidinedione,TD)类药吡咯列酮,观察小鼠组织细胞中LPL含量的改变,结果发现各组鼠血液中LPL均无明显改变。血循环中的LPL含量极低,通常无活性,且半衰期很短,有可能不能反映体内各组织LPL的总体活性水平,因此各实验组的鼠血液中LPL均无明显改变。有意义的是与对照组相比,肌组织中TD组LPL含量显著增高,山楂叶总黄酮组LPL有极显著性增高。脂肪组织中TD组、山楂叶总黄酮组与对照组相比LPL显著下降,且药物浓度与LPL的表达量存在量效关系。说明山楂叶总黄酮对不同组织中LPL的表达调控明显存在差异。根据脂肪组织(AT)与骨骼肌组织(SM)中LPL的活性比值的意义,提示山楂叶总黄酮能促使肌肉组织中FFA的氧化产能;减少脂肪组织中脂质的积聚。由于肌肉组织中存在机体近一半的LPL,由肌肉LPL产生的FFA主要用于氧化产能,因此肌肉LPL变化对脂肪/肌肉LPL活性比值及循环中FFA流向也会产生重大影响 [6] 。且骨骼肌中LPL的过度表达可阻止食物诱导的体脂堆积 [7] 。山楂叶总黄酮能改变脂肪组织(AT)与骨骼肌组织(SM)中LPL的活性比值,从而影响血浆脂蛋白及TG水平。临床应用山楂属植物制成各种制剂,用于治疗高脂血症,取得较好的效果。LPL是胰岛素敏感性酶,胰岛素对脂肪组织、骨骼肌组织等的LPL影响有特异性,已知胰岛素能上调脂肪组织中LPL,而肌肉LPL则在胰岛素调节下呈相反变化 [8,9] 。高脂血症体内胰岛素受体水平较低,存在胰岛素抵抗,而且随着血TG水平的增高逐渐加重,外周组织对胰岛素的敏感性逐渐降低,最终高胰岛素血症下调骨骼肌LPL,血浆TG分解降 低 [10] 。TD类药物(吡咯列酮)是胰岛素增敏剂,能增加外周组织对胰岛素的敏感性,最终降低血清胰岛素水平,改变组织细胞中LPL的表达。本实验中吡咯列酮使脂肪组织的LPL表达明显下降,肌肉组织中LPL有所增加,脂肪组织(AT)与骨骼肌组织(SM)中LPL的活性比值下降,促使FFA流入肌组织以利氧化供能。目前临床使用的降脂药物较多,其中bezafibrate类、TD类药物有明确的降脂作用,可提高LPL活性,使甘油三酯水平下降,但仍有一定副作用,不宜长期使用,而沙棘、刺梨、大蒜等一些有降脂活性的中药或食品安全无毒,其中山楂以其显著的防治高血脂效果倍受关注。本实验结果表明:山楂叶总黄酮能影响小鼠LPL的表达,并有组织表达差异,改变脂肪组织(AT)与骨骼肌组织(SM)中LPL的活性比值。根据TD组的实验结果可考虑山楂叶总黄酮的这种作用是否与胰岛素调节LPL有关。此外由于山楂叶总黄酮有多种有效成分,对牡荆素、皮素、金丝桃甙等单体成分进行深入细致的药理研究具有重要意义。

    参考文献

    1 Chiba T,Miura S,Sawamura F,et al.Antiatherogenic effects of a novel lipoprotein lipase-enhancing agent in cholesterol-fed New Zealand white rabbits.Arterioscler Thromb Vasc Biol,1997,17(2):601-608.

    2 高莹,肖颖.山楂及山楂黄酮提取物调节大鼠血脂的效果研究.中国食品卫生,2002,14(3):14-16.

    3 Manolov P N,Retkol V D.Experimental studies on the pharmacologi-cal activity of hyperoside.Comp Rend Acad Bulgare Sci,1997,30:1071.

    4 林秋实,陈吉棣.山楂及山楂总黄酮预防大鼠脂质代谢紊乱的分子机制研究.营养学报,2000,22(2):131-136.

    5 Bessesen DH,Rupp CL,Eckel RH.Trafficking of dietary fat in lean Rats.Obesity Research,1995,3:191-203.

    6 Kern PA.Potential role of TNFalpha and lipoprotein lipase as candidategenes for obesity.J Nutr,1997,127:1917-1922.

    7 Jensen DR,Schlaeper IR,Morin CL,et al.Prevention of diet-induced obesity in transgenic mice overexpressing skeletal muscle lipoprotein li-pase.Am J Physiol,1997,273:R684-R689.

    8 Panarotto D,Remillard P,Bouffard L,et al.Insulin resistance affects the regulation of lipoprotein lipase in the postprandial period and in an adipose tissure-specific manner.Eur J Clin Invest,2002,32(2):892.

    9 Roberts CK,barnard RJ,Liang KH,et al.Effect of a diet on adipose tis-sue and skeletal muscle VLDL receptor and LPL:implications for obesi-ty and hyper-lipidemia.Atherosclerosis,2002,161(1):133-141.

    10 Ascaso JF,Real JT,Merchante A,et al.Lipoprotein phenotype and insulin resistance in familial combined hyperlipidemia.Metabolism,2000,49(12):1627-1631. 

    基金项目:本课题受国家自然科学基金资助(编号:30070932)
    作者单位:310053杭州浙江中医学院生命科学系,分子医学研究所( △ 通讯作者)
    310018杭州师范学院医学院生物化学教研室

作者: 严 瑾 范春雷 沃兴德 罗 艳 2005-6-10
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