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1 试验材料
1.1 样品(1~11)均为市售产品 见表1。
表1 11种样品生产单位及批号(略)
贝斯素对照品:由中国药品生物制品检定所提供,批号:0267-9701
空白样品:按《卫生部药品标准中药成方制剂第十册》制法项下方法自制缺人工牛黄的空白粉末。
1.2 仪器与试剂
1.2.1 超声仪 上海申波超声公司,型号SCQ-50型。
1.2.2 硅胶 青岛海洋化工有限公司。
1.2.3 薄层板 自制硅胶G板。自制含羧甲基纤维素钠的硅胶G板,临用前110℃活化半小时。
所有化学试剂均为分析纯,水为超纯水。
2 方法与结果
2.1 薄层鉴别(一) 取样品及空白对照品各一粒内容物,置三角烧瓶中,加丙酮5ml超声处理10min,过滤,滤液蒸干,残渣加甲醇2ml使溶解,作供试品溶液。另取贝斯素对照品约50mg,置10ml量瓶中,加甲醇5ml超声处理10min,加甲醇至刻度,静置,取上清液作对照品,照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VIB)试验,吸取上述溶液各5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以冰醋酸-甲苯-水(10:7.5:0.5)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%H 2 SO 4 乙醇液,105℃烘约10min,置紫外灯下(365nm)检视。结果对照品显四个以上荧光斑点,在与对照品相应位置上,有三批样品显一个斑点,其余样品均显四个以上相同颜色的荧光斑点,空白对照品无斑点。见图1。
图1 鉴别(一)薄层色谱图(略)
S-对照品 1~11-样品 K-空白
2.2 薄层鉴别(二) 取样品及空白对照品各一粒内容物,置10ml容量瓶中,加水5ml超声处理10min,加甲醇至刻度,静置,取上清液作供试品溶液。另取贝斯素对照品约30mg,同法制成对照品溶液,照薄层色谱(中国药典2000年版一部附录VIB)试验,吸取上述溶液各5μl,分别点于同一含羧甲基纤维素钠的硅胶G薄层板上,以正丁醇-冰醋酸-乙醇-水(4:2:1:1)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以1%茚三酮乙醇液,105℃烘约10min。结果对照品显一个紫红色斑点,在与对照品相应位置上,有三批样品未显紫红色斑点,其余样品均显一个紫红色斑点,空白对照品无斑点。见图2。
图2 鉴别(二)薄层色谱图(略)
S-对照品 1~11-样品 K-空白
3 讨论
根据文献 [3] ,笔者分别以贝斯素中所含不同类成分特征设计了鉴别(一)、(二)。由于在鉴别(一)中,样品用甲醇提取时部分成分对用10%磷钼酸乙醇液显色的斑点有干扰,经多种溶媒提取实验比较后,改用丙酮提取样品,用10%硫酸乙醇显色,荧光斑点清晰无干扰,且斑点荧光可保持数日不褪。
考察了温度、相对湿度变化对薄层结果的影响。其中温度对薄层结果影响较为明显。室温较低时(<15℃)易形成边缘效应和展开剂中不同溶媒无法同时展开的现象。室温过高(>30℃)展开速度过快,斑点易拖尾。相对湿度过高(>70%)则影响薄层色谱的重现性。实验证实,在室温20℃~30℃,相对湿度70%以下展开,分离效果最佳。
经过对该品种4个生产厂家11个批次样品的薄层鉴别结果分析,发现有一个厂家三个批次样品用原检验方法检验合格,而用本文补充的薄层鉴别方法检验不合格的事例,为该品种的检验方法需要补充完善提供有利佐证。
参考文献
1 卫生部药典委员会.卫生部药品标准中药成方制剂.第十册,北京:人民卫生出版社,1995,29.
2 龚新民.新部颁标准人工牛黄的特点.中成药,1998,20(2):20.
3 卫生部.中华人民共和国卫生部标准WS3 -132(Z-122)-98.
4 刘亚蓉.中成药中牛黄与人工牛黄的薄层鉴别.西北药学杂志,1995,10(6):10.
作者单位:421001湖南省衡阳市药品检验所