点击显示 收起
【摘要】 目的 通过比较平均红细胞容积（MCV）、平均红细胞血红蛋白含量（MCH）的检测及与基因诊断相结合的检测方法，探讨对地中海贫血筛查的选择性和诊断的准确性。 方法 以MCV与MCH的检测作初筛试验，以基因诊断试验作确诊试验，同时用MCV与MCH的检测和红细胞渗透脆性试验比较，用基因诊断试验和过去血红蛋白电泳比较。 结果 对1852例婚检者做MCV与MCH的检测，筛选出237例地中海贫血阳性者，并进行基因诊断分析，发现地中海贫血145例，占7.83%，其中α-地中海贫血杂合子67例，占3.6%;β-地中海贫血携带者78例，占4.2%。而在红细胞脆性试验及血红蛋白电泳法中均出现不同程度的漏检。 结论 在地中海贫血初筛中MCV与MCH的检测优于红细胞脆性试验，在确诊方法中基因诊断试验优于血红蛋白电泳。做好婚前和产前对地中海贫血的筛查、基因诊断，对预防和降低重型地中海贫血患儿出生具有重要意义。
【关键词】 地中海贫血;婚检;基因诊断
Using different ways as an initial screening and definite diagnosis of thalassemia in premarriage check up
CHEN Jie，LI Hui-min，KE Xiao-yan，et al.
Dagang People's Hospital，Guangzhou511470，China
【Abstract】 Objectives Through quite average red blood cell volume（MCV），average red blood cell hemoglobin content（MCH），the examination method which unifies with the gene diagnosis，the discussion selective and the diag-nosis accuracy to the thalassemia.Methods Does by MCV and the MCH examination initially screening，by the gene diagnosis as a definite method，meanwhile compares with MCV，the MCH and the red blood cell，electrophoresis com-parison with the gene diagnosis experiment and the past hemoglobin electricity.Results Make MCV and the MCH ex-amination to1，852examples pre-marritage physical examinations，screening237examples thalassemia gender，and carries on the gene diagnostic analysis.Discovert145examples，accounts for7.83%，alpha-thalassemia heterozy-gote67examples，accounts for3.1%;Beta-thalassemia carrier78examples，accounts for4.22%.But appears the varying degree in the red blood cell fragility test and hemoglobin electrophoresis to escape the examines.Conclu-sions Screening MCV and the MCH examination at the thalassemia at the beginning of anemia surpasses the red blood cell fragility test，in diagnosis using the method the gene diagnosis experiment to surpass the hemoglobin elec-trophoresis，before the wedding and pre-natal sieves to the thalassemia looks up，the gene diagnosis，to prevents and reduces the heavy thalassemia trouble birth to have the vital significance.
【Key word】 thalassemia;premarital check-up;genetic diagnosis
地中海贫血是由于珠蛋白基因缺失或突变，导致珠蛋白肽链合成障碍，使α链和β链合成失去平衡而导致的溶血性贫血。本病在我国多见于南方各省，可分为α-地中海贫血和β-地中海贫血两大类 ［1］ 。HbBart's胎儿水肿综合征是一种重型α-地中海贫血，胎儿于妊娠末期或出生后不久死亡，本症患儿为常染色体显性纯合子，父母均为α-地中海贫血1杂合子 ［2］ 。父母β轻型杂合子将有较高机会出生重型β-地中海贫血患儿。据有关调查资料显示在广东地中海贫血的发生率约为10%。针对广东是地中海贫血高发地区，广州市从2001年起，在全市婚前医学检查单位对婚检男女开展轻型地中海贫血筛查，而广州市婚检中心在2002年明确规定要以MCV和MCH为地中海贫血筛查首选指标，并把MCV<82fl/L和MCH<26pg/L定为地中海贫血筛查标准的依据 ［3］ 。在2002年9月～2003年9月期间，我院在1852例婚检人群中开展地中海贫血的筛查及诊断，先做MCV和MCH、红细胞渗透脆性试验，筛选出237例MCV<82fl/L和MCH<26pg/L的个体，以及198例红细胞脆性溶血<62%的个体，再进行血红蛋白电泳检测和地中海贫血基因诊断试验确诊。并以地中海贫血基因诊断结果为标准进行对照，检测血红蛋白电泳对地中海贫血诊断的准确性。现将结果报道如下。
1 资料与方法
1.1 资料来源 2002年9月～2003年9月在本院婚前保健科接受婚前检查欲婚男女1852人，抽血分装于不同的抗凝管。检测MCV和MCH采用EDTA-K2抗凝血1ml;红细胞渗透脆性试验采用肝素抗凝血1ml;基因诊断试验采用枸橼酸钠抗凝血2ml。
1.2 检测方法及诊断标准
1.2.1 MCV和MCH EDTA-K2抗凝血在AC970型血细胞分析仪进行测定血常规，正常标准值MCV>82fl/L，MCH>26pg/L。
1.2.2 红细胞渗透脆性试验 采用地中海贫血一管筛查法，测定红细胞对低渗盐水溶液的抵抗力。正常标准>62%。
1.2.3 基因诊断试验 检测α-地中海贫血 SEA /基因的双重PCR技术 ［4］ ，PCR扩增和电泳鉴定PCR产物;检测β-地中海贫血的反向点杂交（PDB）技术。由中山医科大学达安基因诊断中心提供PCR试剂，在PE9700型PCR仪上测定。
1.2.4 血红蛋白电泳测定 采用Hb分析仪（海伦FPIFE3000型）。（1）HbA 2 <2.5%→α-地中海贫血基因分
析;（2）HbA 2 >3.5%→β-地中海贫血基因分析;（3）HbA 2 2.5%～3.5%→重做血红蛋白电泳测定。
1.3 统计学方法 采用SPSS10.0统计软件包χ 2 检验。
2 结果
2.1 在1852例婚检者的地中海贫血筛查中，我们把237例MCV<82fl/L和MCH<26pg/L的个体进行基因分析确认，发现其中有5例地中海贫血基因携带者原是在红细胞脆性试验正常组内，而被漏诊。由此可见，MCV和MCH对地中海贫血初筛的检出率比红细胞脆性试验高。结果见表1。
表1 1852例婚检者的两种地中海贫血初筛结果及经基因诊断后的检出率对照 （略）
2.2 从1852例婚检对象血液检测出地中海贫血145例，占7.86%。其中α-地中海贫血67例，占3.6%，主要为轻型（标准型）α-地中海贫血，为α-地中海贫血1杂合子，65例;静止型α-地中海贫血为α-地中海贫血2杂合子，仅有2例。β-地中海贫血基因携带者78例，占4.2%，全为轻型，在我们检测中，β-地中海贫血突变基因有5种。结果见表2。
表2 1852例婚检对象各种地中海贫血基因检出率 略
2.3 基因分析对地中海贫血初筛者进行确认时，检出率高于血红蛋白电泳，特别在α-地中海贫血确证试验中，两方法差异有显著性（P<0.005），见表3。
表3 1852例婚检者地中海贫血基因诊断与血红蛋白电泳检测的两种方法的结果比较 略
3 讨论
（1）根据《中华人民共和国母婴保健办法》:第八条，婚前医学检查包括严重遗传性疾病的检查;第十八条，经产前诊断，胎儿患严重遗传性疾病的，医师应当向夫妻双方说明情况，并提出终止妊娠的医学意见。广东是地中海贫血高发地区，因此，建立一种快捷、准确及价廉的地中海贫血初筛方法是落实婚检的关键。目前，国外已较普通应用MCV和MCH检测法筛查轻型地中海贫血。而地中海贫血是由于珠蛋白基因的缺失或缺陷，引起珠蛋白中一种或几种合成缺失或减少从而导致Hb合成减少、体积变小、形成小细胞低色素性贫血。MCV可反映RBC的大小;而MCH可反映Hb的含量，即间接反映地中海贫血造成的珠蛋白合成量减少。本研究结果得出，在237例地中海贫血筛查阳性者中，就发现在红细胞渗透脆性试验正常组中有5例是漏诊的，故红细胞渗透脆性试验不应作为地中海贫血初筛的方法，而用MCV和MCH检测法则较敏感、简单、快捷。
（2）基因诊断对地中海贫血确诊的临床推广价值:本研究中血红蛋白电泳测定采用Hb分析仪（海伦FPIFE3000型），人工操作的血红蛋白电泳试验误差难以避免，且容易出现假阴性，检出率低;特别是HbA 2 在2.5%～3.5%之间的，检测α-地中海贫血不敏感，特异性不高，易漏检。而基因诊断是目前临床上特别是对婚前医学检查男女开展地中海贫血确诊上推广使用的方法，是一项灵敏度高、假阴性率低、快捷、准确、杂合子检出率高、不易产生漏检的实验指标，能精确地鉴定出地中海贫血基因携带者。
（3）在婚前医学检查中对轻型地中海贫血基因携带者进行地中海贫血确诊的意义:α-地中海贫血是一种常染色体不完全显性遗传病 ［5］ ，临床上可分为HbBart's胎儿水肿综合征、血红蛋白H病、轻型和静止型;其中，HbBart's水肿胎儿多在宫内死亡或产后即死。β-地中海贫血是一种常染色体隐性遗传病，临床上可分为重型、轻型、中间型和HPFH遗传病;其中，重型患者多因严重贫血，需输血维持生命，给家庭和社会带来极大的精神负担和经济负担。轻型地中海贫血患者平时无症状或只有轻度贫血，但夫妻若为同型地贫的基因携带者，每次怀孕，其子女有1/4的机会为重型地贫患者。鉴于地中海贫血的危害性，在婚检中用MCV和MCH测定开展轻型地中海贫血的筛查，对轻型地中海贫血基因携带者进行基因诊断确诊，对双方同类地中海贫血基因携带者夫妻在孕期开展产前诊断，指导婚配及生育，是降低HbBart's水肿胎儿和重型β地中海贫血患儿出生、提高人口素质最有效的预防措施。
【参考文献】
1 赵汝良.医学遗传学基础，第2版.北京:人民卫生出版社，2001:84.
2 陈竺.医学遗传学.北京:人民卫生出版社，2001，129-132.
3 孙筱放.遗传性疾病与婚育.广州市婚前保健培训教材，2002，11:104.
4 刘敬忠，周桔，王立荣，等.两对常见缺失型α-地中海贫血快速检测技术的研究.中华检验医学杂志，2001，24（6）:333-335.
5 Higgs D R，Vickers MA，Wilkie A OM，et al.A reviewof the molecular genetics of the human-globins gene cluster.Blood，1989，73:108-1104.
作者单位:511470广东广州，广州番禺区大岗人民医院
（编辑:罗 彬）