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【摘要】 目的 比较 99 Tc-MDP与中药处方骨密Ⅲ号联合治疗与第三代磷酸盐药物氨基二磷酸盐对骨质疏松动物模型的疗效的价值。 方法 应用药物盐酸地塞米松诱导制作兔骨质疏松动物模型，分别应用 99 Tc-MDP联合骨密Ⅲ号治疗和氨基二磷酸盐治疗兔骨质疏松动物模型，治疗16周后进行X线摄片、CT、核素骨显像、骨细胞学、骨形态计量、骨密度及骨生物力学测定。 结果 99 Tc-MDP联合骨密Ⅲ号治疗组和氨基二磷酸盐治疗组与骨质疏松对照组比较:骨形体计量分别上升166.88%、65.66%;腰椎骨密度分别上升28.28%、13.13%;股骨头骨密度上升30.03%、16.50%;核素骨显像差值上升30.72%、25.64%;生物力学上升26.94%、15.57%。骨细胞学也有明显的改变。 结论 99 Tc-MDP联合骨密Ⅲ号治疗既有双磷酸盐的作用又具有活血、补肾、壮骨等功能。可能对骨组织的生长和代谢起到较明显支持、促进作用。
【关键词】 99 Tc-MDP;骨密Ⅲ号;氨基二磷酸盐;骨质疏松动物模型;治疗
The comparative study between99 Tc-MDP combined with GUMIⅢand amino-diphosphate in the treatment of animal osteoporosis model
GAO Ke-jia，ZHAO Guo-ding，LI Zong-ju，et al.
Shanghai Huangpu Distric Central Hospital，Nuclear Medicine Department，Shanghai200002，China
【Abstract】 Objective To compare the clinical value between 99 Tc-MDP combined with GUMIⅢand amino-diphosphate in the treatment of animal osteoporosis model.Methods After the animal osteoporosis model induced by dexamethasone hydrochloride was set up，the rabbits were separate into3groups，in2groups of them were treated re-spectively by isotope drug 99 Tc-MDP together with GUMIⅢand aminodiphosphate，and another group was osteoporo-sis control group.After16weeks X-ray，CT，radionuclide bone scintigraphy，bone cytology，bone morphology，bone min-eral density and bone biomechanics were examined.Results After treatment，compared with the control group， 99 Tc-MDP combined with GUMIⅢgroup and aminodiphosphate group increased in bone morphology respectively for166.88%and65.56%，in lumbar spine bone density for28.28%and13.13%，in femur head bone density for30.03%and16.50%，in radionuclide bone scintigraphy value for30.72%，25.64%，in bone biomechanics for26.94%，15.57%.It also showed some improvement in bone cell cytology.Conclusion 99 Tc-MDP combined with GUMIⅢin the treatment of animal osteoporosis model showed the therapeutic effect not only of the diphosphate，but also of the Chinese Traditional Drug such as activating the blood stream and strengthening the kidney and bone.It maybe sustain and accelerate the growth and metabolism of bone tissues evidently.
【Key words】 99 Tc-MDP;GUMI-Ⅲ;animal osteoporosis model;treatment
骨质疏松症是在中、老年人群中较普遍存在的疾病 ［1～3］ ，尤其在老龄化的城市里更为突出。本科采用Tc-99-亚甲基二磷酸钠（简称 99 Tc-MDP）与本院自配中药处方骨密Ⅲ号 ［4，5］ 联合治疗骨质疏松动物模型和阳性对照组第三代双磷酸盐药物氨基二磷酸盐进行疗效比较，实验结果显示 99 Tc-MDP联合骨密Ⅲ号治疗具有一定的优越性和价值。
1 材料
1.1 动物 购置由上海申旺实验动物养殖场［许可证号:SCXK（沪）2002-0011］培育的健康新西兰雌性实验白兔48只，体重均为3.5±0.5kg。
1.2 药物 （1）诱导制作骨质疏松动物模型的药物盐酸地塞米松（DX）由上海信谊金米药业有限公司生产，5mg/瓶（批准文号:国药准字H31021568）。（2） 99 Tc-MDP由成都云克药业有限公司生产，剂型为A、B剂:A剂（液体）含锝-99量为5μg/瓶，B剂（冻干粉剂）内含亚甲基二磷酸钠5mg/瓶（批准文号:国药准字H20000218）。（3）“氨基二磷酸盐”由默沙东（意大利）公司美国默克公司分部生产，10mg/片，批准文号:国药准字（2001）J-27号。
1.3 观察指标 骨密度测定（骨密度仪:双能X线骨密度仪LUNAR.DXP-L.USA）。骨生物力学测定（骨力学仪:万能材料测试仪INSTRON-5543.USA）。骨形态计量检测（形态计量仪:光学显微镜NIKON.E600.JAPAN，形态计量软件IPP.USA）。核素骨骼显像（同位素扫描仪SPECT Sopha DSX法国产，使用低能通过平行孔准直器）。X线摄片、CT、组织病理学检测。
2 方法
2.1 分组 购置实验兔至上海市第六人民医院动物实验室后先适应新环境饲养2周，将实验动物分为6组，每组8只。实验分为二个阶段，第一阶段:使实验兔到骨质疏松模型建立为止。第二阶段:在兔骨质疏松模型建立后进行治疗到疗程结束。A组（正常对照组，第8周后处死）;B组（骨质疏松动物模型对照组，肌肉注射DX6周后处死）;C组（正常对照组，饲养到实验结束时处死）;D组（骨质疏松动物模型对照组，直到实验结束时处死）;E组（骨质疏松动物模型 99 Tc-MDP联合骨密Ⅲ号治疗组）;F组（骨质疏松动物模型氨基二磷酸治疗组）。
2.2 骨质疏松动物模型制作 B、D、E、F4组实验兔以3mg/kg剂量的DX肌肉注射 ［6］ ，每周2次，连续6周。A、B2组进行实验室X线摄片、CT、核素骨显像检测后处死，取实验兔股骨和腰椎做骨形态计量分析（骨小梁体积%）、骨密度测定（g/cm 3 ）及骨生物力学测定（牛顿N）及股骨头部位进行骨细胞学检查。E、F组实验兔分别给予 99 Tc-MDP联合骨密Ⅲ号治疗和氨基二磷酸盐治疗。
2.3 骨质疏松动物模型制成后，除C组外，余下的实验兔D、E、F组仍然以每周1次DX（3mg/kg用量）肌肉注射维持。2.4 治疗方法 99 Tc-MDP治疗用注射生理盐水稀释，以2mg/（kg·3ml）剂量经耳静脉注射治疗，每周1次。骨密Ⅲ号自己煎制，每贴药以成人用量的体积3ml/kg计算，1次/d。氨基二磷酸盐按一般成人剂量，0.2mg/（kg·3ml）用水稀释清晨口服，1次/d。总疗程时间为16周。在治疗过程中，C、D、F组以3ml/kg的注射用生理盐水经实验兔耳静脉推注，以达到实验条件基本相似的目的。
2.5 实验室检查 X线摄片、CT、核素骨显像，取像中放射性感兴趣区（ROI）的实验兔的股骨头与股骨中段相比较，处死去除软组织后取实验兔股骨、第3、4腰椎、股骨头部位进行骨细胞学、骨形态学计量分析、骨密度测定及骨生物力学测定。
2.6 统计学处理 采用t检验方式分析各实验室检测结果之间的差异。
3 结果
第一阶段实验结果:实验兔予以肌肉注射DX6周后，对A、B2组实验兔的核素显像、X线摄片、CT和病理细胞学切片以及相关的实验进行比较，结果提示这2组的检测中存在较大的差异，以股骨头部位的细胞学改变尤为明显。A组基本无骨质破坏的征象，而B组则表现为股骨头关节表面软骨破坏，骨小梁稀疏、断裂，骨母细胞消失等明显骨破坏现象。A组骨扫描显示放射性分布均匀、清晰、对称，B组核素骨显像示骨骼显像模糊不清，但四肢大关节部位则放射性范围增大或浓聚，长骨放射性相对增强。X线摄片、CT直观变化不明显。B组与A组相比骨形态计量平均下降72.51%，腰椎骨密度下降26.51%，股骨骨密度下降25.82%，核素同显像比值下降27.75%，骨生物力学下降了30.24%。考虑本次实验的骨质疏松的动物模型成立，并使下一步实验继续进行，见表1。 表1 治疗前2组实验兔检测结果 （略）注:P<0.01
第二阶段结果:经过16周的治疗，CT仅见D组的股骨头摄片显示较模糊，透亮度减弱，X线摄片检查基本无明显的差异。各组实验动物实验室检测比较:C组与治疗前处死的正常组A组的病理组织学切片差异无显著性，B组与D组的病理组织学切片差异也无显著性。核素骨显像所见:C、E组骨显像较清晰，B、D组骨显像明显模糊，F组骨显像介于前二者间。股骨头细胞学检查，以C组为对照，见B、D组骨质疏松对照组的股骨头骨皮质存在破坏，骨小梁稀疏骨，母细胞明显减少。E、F组与B、D组比较股骨头细胞学显示有较明显的改善，尤其E组骨组织改善、修复较明显，基本与C组相似，而F组修复差于E组，见表2。 99 Tc-MDP联合骨密Ⅲ号治疗组和氨基二磷酸盐治疗组与骨质疏松对照组比较:骨形体计量分别上升166.88%、65.56%;腰椎骨密度分别上升28.28%、13.13%;股骨头骨密度上升30.03%、16.50%;腰椎骨显像差值上升30.72%、25.64%;生物力学上升26.94%、15.57%。饲养中，仅见D组4只实验兔的四肢呈一定程度的活动受限外，其他C、E、F组均未见明显的异常表现。17、26、41、42号实验兔分别于治疗时间的12周与15周时因腹泻而死亡。 表2 治疗后各组实验兔检测结果 （略）注:P<0.01
4 讨论
骨质疏松症是一种临床上的常见病，严重者能明显影响患者生活质量，尤其对因某些疾病必须长期应用糖皮质激素维持治疗者发病率更高。虽然临床上对骨质疏松治疗有一定的治疗措施 ［7］ ，其疗效不一。探索更有效地治疗骨质疏松症的方法具有较大的临床价值。本实验采用糖皮质激素DX以3mg/kg剂量肌肉注射的方法诱导制作兔骨质疏松动物模型，经过每周2次，连续6周注射后实验室检查骨形态计量、腰椎骨密度、股骨头骨密度、核素骨显像比值、股骨三点弯生物力学检测值实验显示A组（正常对照组）与B组（骨质疏松对照组）存在较大的差异。取实验兔的腰椎和股骨头行细胞学病理切片也提示:A组未见明显的骨质破坏，而B组的骨组织存在明显的骨小梁稀疏、断裂，骨母细胞消失等骨破坏现象。说明兔骨质疏松动物模型成立 ［8］ 。另见相隔16周后各项检测显示:正常对照组A组和C组的检查结果基本相似，骨质疏松动物模型组B组和D组的结果也基本相似。
双磷酸盐类药物治疗骨质疏松症的特点是具有P-C-P结构，能抵御生物酶解作用，对破骨细胞发挥细胞毒作用，诱导成骨细胞分泌抑制因子，阻断破骨细胞启动的破骨过程，抑制骨吸收 ［9］ 。“氨基二磷酸盐”是第三代磷酸盐药物，在治疗骨质疏松症方面有很好的疗效 ［10］ 。动物模型组的实验室检测结果显示，在骨形态计量、腰椎骨密度、股骨头骨密度、核素骨显像差值、股骨生物力学与骨质疏松对照组比较均有明显的提高。
99 Tc-MDP是由微量元素锝-99（ 99 Tc）与亚甲基二磷酸钠（MDP）螯合而成的化合物，具有双磷酸盐类药物的治疗骨质疏松作用。另外，有资料报道，微量元素锝-99（ 99 Tc）具有清除人体内自由基有保护超氧化物歧化酶（SOD）的活力 ［11］ 。骨密Ⅲ号是由中药炙黄芪、骨碎补、鹿角片、红花等为主要成分组成，具有补肾、壮骨、活血等功能，对骨组织的生长和代谢能起到支持、促进作用，在临床上已经用于治疗骨质疏松症。通过本实验的结果提示: 99 Tc-MDP联合骨密Ⅲ号治疗由糖皮质激素诱导的兔骨质疏松动物模型的疗效明显，一定程度上也优于氨基二磷酸盐药物，为治疗人体骨质疏松症或由糖皮质激素引起的骨质疏松症提供了依据。
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作者单位:200002上海，上海市黄浦区中心医院核医学科（Δ 中医科）
（编辑:黄 杰）