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【摘要】 目的 测定不育患者精子乳酸脱氢酶同工酶X的含量，探讨其对男性不育诊断的意义。方法 选择84例不育患者为研究对象(Ⅰ组)，对照组为生殖能力正常的61例（Ⅱ组）。精液乳酸脱氢酶X测定采用定量检测试剂盒，用两点法测定。结果 不育患者精子乳酸脱氢酶X较对照组均有明显下降，与对照组差异有显著性（P＜0.01），且与精子的A级+B级具有相关性（r＝0.674， P＜0.05）。结论 不育患者精子乳酸脱氢酶X含量下降，能反映精子的活力，是男性不育临床诊断的较好指标。
【关键词】 男性不育； 乳酸脱氢酶
The expression of dehydrogenase-x lactate in sperm from infertile men
LI Bo,LIU Jing-wei.The Reproduction center of Qingdao Female and Children Therapy and Healthy Center， Shandong 366000,China
【Abstract】 Objective We measured lactate dehydrogenase-x (LDH-X) activity in sperm and seminal plasma from infertile men, to explore whether the LDH-X in sperm and seminal plasma is meaningful to the diagnoses of infertility of men.Methods Eighty-four infertile men (group I) and sixty-one men with normal fertility (group II) were investigated. We detected the activity of LDH-X using semen lactate dehydrogenase x isoenzyme (LDH-X) quantitative assay kit.Results The concentration of sperm between group II and group I was significant(P＜0.05). The survival rate and the percentage of grade A and grade B sperm， the difference between group II and group I was significant (P＜0.01).The difference LDH-X activity in sperm between group I and group II was significant (P＜0.01). The difference was no significant in LDH-X activity in seminal plasma and LDH-X activity in seminal plasma-in all sperm ratio between tow groups. LDH-X activity in sperm have positive correlation ( r=0.674, P＜0.05) with the percentage of grade A and grade B sperm.Conclusion LDH-X activity in sperm of infertile men was lower than normal. The LDH-X in sperm and seminal plasma is good parameter to the diagnoses of infertility of men.
【Key words】 male infertility; dehydrogenase lactate
乳酸脱氢酶同工酶X(LDH-X)是精子特有的乳酸脱氢酶同工酶, 这种LDH 的同工酶与糖的酵解活动密切相关,LDH-X酶主要分布在成熟雄性生殖细胞线粒体内, 它对精子的发生和成熟起着重要作用［1］。本文通过测定不育患者精子及精浆的LDH－X的含量，探讨其对不育诊断的意义。
1 资料与方法
1.1 一般资料
1.1.1 标本收集 标本取自青岛市妇女儿童保健中心生殖中心门诊就诊患者。在不育病史至少为2年的就诊不育患者为Ⅰ组（84例）。Ⅱ组为正常对照组（61例）：经临床及辅助检查证实男性生殖功能正常，且1年内配偶有妊娠史，如宫外孕或流产史。
1.1.2 试剂和仪器及其来源 乳酸脱氢酶同工酶X定量检测试剂盒为深圳月亮湾生物工程有限公司。
1.2 试验方法
1.2.1 精液的常规化验 所有受试者在禁欲3～5天后手淫法收集精液于专用杯内, 水浴箱中37℃保温, 于1h内作精液分析, 采用WHO推荐的方法和评估标准［2］。精液参数包括精液量、密度、活动精子百分率、前向运动级别。精子活率采用伊红染色法。
1.2.2 LDH-X测定标本准备 新鲜精液液化后，迅速将标本充分混匀，然后将标本分装成两份（每份约0.5ml），其中一份3000r离心15～20min，取上清液用于全精液LDH-X活性检测。溶解后的精浆标本可直接用于精浆LDH-X检测。
1.2.3 乳酸脱氢酶测定方法 本文采取两点法。
1.2.4 结果处理 全精子LDH-X（u/L）＝全精液LDH-X-精浆LDH-X；精子LDH-X（mu/106精子）＝全精子LDH-X/精子浓度（M）；精浆/全精子LDH-X比值＝精浆LDH-X/全精子LDH-X。
1.3 统计学分析 采用SPSS11.0分析统计软件，t检验比较各组参数。所有分析以P＜0.05或P＜0.01作为差异有显著性或有非常显著性。
2 结果
2.1 两组患者的精液的常规化验结果 见表1。
精液量两组间差异无显著性。精子密度在不育组与正常对照组差异有显著性(P＜0.05)。精子活率和A级＋B级精子两组间差异有非常显著性(P＜0.01)。
表1 各组精液常规结果 （略）注：*表示与Ⅱ组（正常对照）比较，P＜0.05；**表示与Ⅱ组（正常对照）比较，P＜0.01
2.2 两组患者的精子乳酸脱氢酶X，精浆乳酸脱氢酶X及精浆/全精子LDH-X比值化验结果 见表2。
表2 不育患者与对照组的化验比较 （略）注：*表示与Ⅰ组比较P＜0.01
不育患者精子乳酸脱氢酶X明显下降与对照组差异有非常显著性（P＜0.01），且与精子的A级+B级具有相关性（r＝0.674， P＜0.05）。而精浆乳酸脱氢酶X和精浆/全精子LDH-X比值在3组间差异无显著性(P＞0.05)。
3 讨论
本文通过测定男性不育患者精子乳酸脱氢酶X，并与正常对照组进行比较，分析其间差异有无显著性，来探讨其对于临床诊断和治疗有无意义。(1)精子乳酸脱氢酶同工酶X是精子特有的乳酸脱氢酶同工酶, 这种LDH的同工酶与糖的酵解活动密切相关,LDH-X酶主要分布在成熟雄性生殖细胞线粒体内, LDH-X自初级精母细胞粗线期开始合成，直至精子形成，随着生精细胞的成熟分化，LDH-X mRNA水平急剧下降， LDH-X含量逐渐上升［3］。它对精子的发生和成熟起着重要作用。乳酸脱氢酶同工酶X(LDH-X) 是乳酸脱氢酶中与LDH1-5不同的另一种特殊类型的同工酶。oldberg于1963 年在多种哺乳动物、鸟类睾丸组织和精子中发现LDH-X［4］。LDH-X分子内由4个相同的C亚基组成。用化学方法分析,每个亚基由331个氨基酸构成,电子X 衍射分析是329个氨基酸构成,用氨基酸测序由330个氨基酸组成［5］。LDH-X主要分布在成熟雄性生殖细胞线粒体内，和LDH的其他同工酶一样催化糖酵解过程中最后一个反应, LDH-X 的催化能力更强，但是LDH-X 又有其自身的特性。LDH-X 具有底物特异性,对碳链长于4个碳原子的α2酮酸也具有催化作用,笔者利用这一特点,测定LDH-X 的活性［6］。LDH－X参与精子的获能［7］，体外实验发现其参与还原当量的运输和利用,LDH-X可以把还原当量从细胞浆穿梭到线粒体呼吸链,从而利于精子的氧化磷酸化，为精子提供运动所需能量［8］。(2)精子乳酸脱氢酶同工酶X测定结果可以看出，比精浆乳酸脱氢酶X和精浆/全精子LDH-X比值两个指标更有价值。不育组其测定值比对照组明显低，且差异有显著性。在精子的发育和成熟过程中，各种因素都有可能影响到精子LDH-X的产生。同时由于精子细胞膜的损伤，使部分精子细胞浆中的LDH-X漏出精子外，从而使精子LDH-X含量下降。精浆中的LDH-X含量由于计算方法没有考虑精子的密度，其参考价值不如精子LDH-X。罗比［9］的研究和Eliasson R［10］的研究均认为在计算LDH-X时应考虑精子的密度，如考虑到精子的密度参考价值较大。总之，不育患者精子乳酸脱氢酶X含量下降，能反映精子的活力，是男性不育临床诊断的较好指标。而精浆LDH-X含量参考意义不如精子乳酸脱氢酶X含量测定有意义。对于临床治疗上也可考虑应用维生素C和维生素E，可使精浆中的LDH-X下降，提高精液质量［11］。
【参考文献】
1 郭玉佳,李叔庚. 不育症精子乳酸脱氢酶同工酶C4的细胞化学定位、定量研究.中国组织化学与细胞化学杂志,1998，7(4)：443-449.
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6 Philippopoulos M,Xiong Y, Lin C.Identifying the mechanism of protein loop closure:A molecular dynamics simulation of the Bacillus stear other mophilas LDH loop in solution.Protein Eng,1995, 86:565-573.
7 O’Flaherty CM, Beorlegui NB, Beconi MT. Lactate dehydrogenase-C4 is involved in heparin- and NADH-dependent bovine sperm capacitation. Andrologia, 2002 Apr, 34(2): 91-97.
8 Fernando G, Gallina NM, Gerez De, et al. The lactate pyruvate shuttle in spermatozoa: operation in vitro archi.Biochem Biophys, 1994,308:515-519.
9 罗比,王平.不育男性精子及精浆中乳酸脱氢酶C4同功酶活性的研究.生殖与避孕,1989,9(3):6-11.
10 Eliasson R， Virji N.LDH-C4 in human seminal plasma and its relationship to testicular function. Int J Androl,1985,8(3): 201-214.
11 Yousef MI， Abdallah GA， Kamel KI. Effect of ascorbic acid and Vitamin E supplementation on semen quality and biochemical parameters of male rabbits. Anim Reprod Sci, 2003，76(1-2): 99-111.
(编辑：若 木)
作者单位：266000 山东青岛，青岛市妇女儿童医疗保健中心生殖中心
山东泰安，泰安市中心医院