点击显示 收起
【摘要】 目的 建立鳖甲山楂颗粒中熊果酸含量测定的方法。方法 高效液相色谱法。色谱柱：Zorbax SB-C18（4.6mm×2.50mm，5μm）；流动相：甲醇-水（0.5%乙酸胺）（84：16）；流速：1ml/min；检测波长：215nm；柱温：30℃。结果 熊果酸线性范围0.5548～2.7740μl，平均回收率为99.53%，RSD为1.65%。结论 该方法准确，可靠，可用于控制鳖甲山楂颗粒的质量。
【关键词】 熊果酸；高效液相；含量测定
【Abstract】 Objective To establish the method to determine the content of urolic acid in micro-porphyrizaed bie-zha granula.Methods High performance liquid chromatography was used.C18 column was used;the mobile phase was consisted of MeOH-warter(84:16);the detection wavelength was at 215nm;the flow speed was 1ml/min;the column temperature was 30℃.Results The HPLC recoveries was 99.53% for urolic acid with RSD=1.65%.Conclusion The method can be used for controlling the quality of the micro-porphyrizaed granula.
【Key words】 urolic acid;HPLC;content determination
鳖甲山楂颗粒剂由鳖甲和山楂两味药组成，具有疏肝理气、消脂护肝、活血散瘀等功效。临床主要用于脂肪肝和肝纤维化等症的防治。制备过程中，鳖甲采用超微粉碎技术处理。笔者采用高效液相色谱法对鳖甲山楂颗粒中指标成分熊果酸进行了含量测定。
1 仪器与材料
高效液相色谱仪Agilent1100，G1311A泵，G1316紫外检测器，Agilent色谱工作站。微量进样器Agilent Technologies。熊果酸标准品由中国药品生物制品检定所提供（批号：20030205）。
2 方法与结果
2.1 色谱条件及系统适用性 色谱柱：Zorbax SB-C18（4.6mm×2.50mm，5μm）；流动相：甲醇-水（0.5%乙酸胺）（84：16）；流速：1ml/min；检测波长：215nm；柱温：30℃。在上述色谱条件下，鳖甲山楂颗粒中熊果酸能达到基线分离。
2.2 样品供试液的制备 取颗粒剂5份，每份约2.5g，分别精密称量，置25ml容量瓶内，精密加入20ml甲醇后进行超声处理20min，使颗粒混悬均匀，放置至室温后加甲醇定容至刻度，用微孔滤膜过滤，即得供试品溶液。
2.3 阴性对照品溶液的测定 按处方比例取出除山楂以外的其他中药和辅料按鳖甲山楂颗粒剂制备工艺制成阴性对照品。取阴性对照品适量，精密取定，照供试品溶液的制备方法制备，测定结果显示在熊果酸相应峰的位置无任何峰出现，说明鳖甲山楂颗粒中其他成分对熊果酸的测定无干扰。
2.4 线性关系的考察 精密称取经P2O5减压干燥36h的熊果酸对照品3.47mg用甲醇定容至5ml，制成0.69mg/ml的熊果酸对照品溶液。精密取定熊果酸对照品溶液2ml置10ml量瓶中加甲醇溶解并至刻度，用微量进样器分别精密量取4、8、12、16、20μl，运用高效液相色谱仪测量，记录色谱图，根据进样量和测得的峰面积计算标准曲线，结果见表1。
表1 线性关系考察结果（略）
经计算得回归方程式：Y=3.8903X－0.114(r=0.9998，n=5)。这一结果显示熊果酸进样量在0.5548～2.7740μl范围内有良好线性关系。
2.5 稳定性试验 吸取鳖甲山楂颗粒供试品溶液，用20μl定量环在每隔一定时间（2h）后进样测定，连续进样5次，分别测定峰面积的变化情况，表明供试品在8 h内稳定。
2.6 精密度试验 用20μl定量环注入熊果酸对照品溶液，重复进样5次，测定峰面积并计算其相对标准偏差，结果显示仪器精密度良好。
2.7 重现性试验 取同一批号鳖甲山楂颗粒，按供试品溶液的制备方法处理后，分别进样测定，计算熊果酸的含量，结果表明实验重现性良好。
2.8 回收率试验 取已知熊果酸含量鳖甲山楂颗粒适量，精密称定，分别加入一定量的熊果酸对照品，照供试品溶液的制备方法制备，用20μl定量环进样，测定峰面积并计算回收率，结果见表2。
表2 回收率试验结果（略）
结果表明本方法具有良好的回收率。
2.9 样品的含量测定 取5批样品，照供试品溶液的制备方法处理后，分别精密吸取样品溶液采用高效液相色谱仪测定，结果见表3。
表3 样品的含量测定结果 （略）
结果表明，5批样品中熊果酸平均含量为1.28mg/g。
3 讨论
在本讨论所给定的色谱条件下，熊果酸的分离效果较好，但保留时间相对较长。为了缩短保留时间，结合文献［1～3］，分别以甲醇-乙酸乙酯-水（1%三乙胺），乙腈-甲醇-水等多种流动相进行比较试验，但分离状态不理想，结果表明，以甲醇-水（0.5%乙酸胺）（84：16）为流动相时，基本实现稳定性良好的基线分离。
【参考文献】
1 谢莹，杭太俊.高效液相色谱法测定中药中齐墩果酸和熊果酸的含量.中国中药杂志,2001,26(9):615-616.
2 黄晓彤.山楂核中熊果酸含量HPLC测定.上海中医药大学学报,2001,15(1):53-55.
3 韩瑞兰.薄层扫描法测定山楂中熊果酸的含量.内蒙古中医药,1999，(18):93-94.
(编辑：余 强)
*基金项目：湖北省科技厅攻关项目(编号：2002AA301C18)
作者单位： 430061 湖北武汉，湖北中医学院
430061 湖北武汉，湖北省中医院国家肝病中心