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【摘要】 目的 建立中药中铜、锌、镁、铁、钙含量测定的前处理方法。方法 用1.00%的硝酸提取中药蝌蚪中的铜、锌、镁、铁、钙,用火焰原子吸收分光光度法测定，并与消化方法进行了比较。结果 与消化法测定的结果基本一致，符合率为96.8%～102.3%。结论 此方法优于消化法,可代替消化法用于中药中微量元素的测定。
【关键词】 中药；微量元素；提取法
蝌蚪为蛙科蛙属动物泽蛙(Rana Limnocharis Boie)、黑斑蛙(Rana nigromaculata Hallowell)和金钱蛙(Rana plancyi Lataste)的幼体。蝌蚪性凉滑润，有清热解毒的功效，主治热毒疮肿［1］。民间早有生食蝌蚪以治疗宫颈癌等恶性肿瘤的经验。 近年来研究表明蝌蚪提取液具有抑制肿瘤细胞生长并诱导其分化的作用［2～4］，但对其微量元素的测定常常采用干法灰化和湿法消化法, 湿法消化法费时,干法灰化易造成元素的损失,为此本文采用硝酸浸取法,并与湿消化法进行了比较,以期建立一种简便易行的动物性中药的前处理方法。
1 材料与方法
1．1 材料仪器 铜、锌、镁、铁、钙基准物质(优级纯)；浓硫酸、盐酸、高氯酸等(均为分析纯)；去离子水(电导率为5.59×10-8S/cm)；蝌蚪粉（自制）。WYX-402型原子吸收分光光度计（沈阳分析仪器厂）；分析天平（上海分析仪器厂）。
1．2 实验方法
1．2.1 样品的采集与处理 采集郑州市郊鱼塘活蝌蚪，用自来水洗干净，再用去离子水洗3遍，在红外干燥箱中于100℃烘干，研细得蝌蚪粉，密封后置冰箱中，在-20℃保存待用。
1．2.2 酸浸法 准确称取上述蝌蚪粉样品，每份0.5000 g于50ml锥形瓶中，加入10 ml 1.0mol/L的硝酸室温浸泡2h后,于振荡器上振荡10min,以3000r/min离心10min,将上清液移入100ml 容量瓶中,再向50ml锥形瓶样品中加入10ml 0.5mol/L的硝酸浸泡1h, 并重复提取两次,合并3次提取液入100ml容量瓶中,用0.1mol/L稀硝酸稀释至标线待测，同时作空白、平行和回收试验。
1．2.3 湿消化法 准确称取上述蝌蚪粉样品，每份0.5000g于50ml锥形瓶中，加入硝酸、高氯酸消化液 ( V硝酸 ：V高氯酸 = 5 ：1 )，在电炉板上缓缓加热至无白烟，得无色透明溶液，继续加热至近干后用去离子水定容至100ml容量瓶中，待测。同时作空白、平行及回收试验。
1．2.4 标准系列的配制及测定 取1000mg/L的Cu、Zn、Mg、Fe、Ca标准储备液25ml于250ml的容量瓶中，用去离子水稀释至标线，即为100mg/L的Cu、Zn、Mg、Fe、 Ca标准溶液。
准确移取100mg/L的Cu、Zn标准溶液 0.25、0.50、0.75、1.00、1.25ml；100mg/L的Mg标准溶液0.50、1.00、1.50、2.00、2.50ml于250ml的容量瓶中，用去离子水稀释至标线。在原子吸收分光光度计上，按表1工作条件进行测定，各元素标准曲线浓度范围、回归方程及回归系数见表2。
表1 仪器测定条件（略）
表2 铜、锌、铁、钙、镁标准曲线的回归方程及回归系数（略）
1．2．5 样品测定的精密度和准确度 准确称取上述蝌蚪粉样品12份，其中6份做酸浸法，6份做消化法，每份0.5000g于50ml锥形瓶中，其中每种处理方法中，3份为平行试验，3份中准确加入一定量的铜、锌、镁标准溶液，用酸浸法和湿消化法处理后，在与标准系列完全相同的条件下配制待测液，若样品超出了仪器和标准曲线的线性范围，做适当稀释后测定。
2 结果与讨论
2.1 两种方法的测定结果 用上述两种方法处理的样品，在原子吸收分光光度计上用火焰法测定标准和样品的吸光度，由标准曲线的回归方程，再根据取样量及稀释倍数，计算出蝌蚪样品中铜、锌、镁、的含量［5］。酸浸法的精密度和准确度见表3，消化法的精密度和回收率见表4。
2.2 酸浸法和消化法两种测定方法的符合率 由上述结果显示,湿法消化法的回收率为93.33%～96.00%,相对标准偏差为:1.5%～5.5%,故认为消化准确,故以湿法消化测得的蝌蚪样品中的元素结果为基础,将酸浸法处理样品的测定结果与之比较,二者的符合率如表5所示。
表3 酸浸法处理样品中各元素平行测定的精密度和回收率（略）
表4 湿法消化法处理样品中各元素平行测定的精密度和回收率（略）
表5 酸浸法与湿消化法处理蝌蚪测定结果比较 (略)
由酸浸法和消化法两种测定方法的比较结果显示，用酸浸法对中药蝌蚪进行提取测定用火焰原子吸收分光光度法测定蝌蚪中无机元素的含量不仅简单易行，且准确度高，上述几种元素的平均回收率在90.00%～96.33%,并且不用加热,笔者认为，该法可作为动物组织及动物中药样品中微量元素测定的前处理方法。
【参考文献】
1 江苏新医学院编.中药大辞典(下册).上海：上海科学技术出版社，1986，2610.
2 白经修，于静，丁蔚，等.蝌蚪提取液对小鼠红白病细胞分化的诱导作用.解剖学报，1995，26(4)：403.
3 白经修，于静，丁蔚，等.蝌蚪提取液对Hela细胞作用机理的探讨.解剖学报，1993，24(1)：68.
4 杨红梅，白蓉，尤笑迎，等. 不同方法制备的蝌蚪提取液对HL-60细胞的作用.河南医科大学学报，1998，33(4)：52.
5 闫素清.火焰原子吸收法测定血清、红细胞中微量元素的含量及临床意义的探讨.世界元素医学，1997，4(4)：4.
(编辑：黄 杰)
作者单位： 450052 河南郑州，郑州大学化学系
450052 河南郑州，郑州大学一附院检验科
450052 河南郑州，郑州大学公共卫生学院卫化教研室