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【摘要】 目的 观察乙型肝炎后肝硬化患者血清内毒素（endotoxin）水平的变化，分析其与患者病情程度及肝纤维化血清学指标透明质酸(HA)、层粘连蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原氨基端肽(PⅢNP)、Ⅳ型胶原(Ⅳ.C)水平的关系。方法 采用鲎试验、放射免疫法（RIA）分别检测40例正常人、30例乙型肝炎后肝硬化患者的血清内毒素、HA、LN、PⅢNP、Ⅳ.C水平。结果 肝硬化患者各组内毒素及所测血清学指标均明显高于正常组（P<0.05），内毒素水平按病情严重程度依次升高，各组之间均差异有显著性（P<0.05），并与所测肝纤维化血清学指标的水平正相关，相关系数(r)分别为0.921、0.825、0.762、0.752，P均<0.05。结论 内毒素随肝功能损害加重而升高，且内毒素水平升高与血清肝纤维化指标水平升高呈正相关，提示内毒素可能促进肝硬化患者肝纤维化和病情的发展。
【关键词】 乙型肝炎后肝硬化；肝纤维化；内毒素；血清肝纤维化指标
肝硬化患者易发生小肠细菌过度生长［1］，导致营养物质吸收障碍及毒性物质（如内毒素）产生增加，而内毒素在慢性肝病的发展和转归中的作用正引起人们的高度重视和研究［2，3］，由于内毒素对肝功能恶化及一系列并发症的产生具有重要的作用，但特异性的抗内毒素治疗还停留在试验阶段，因此减少内毒素的产生具有重要的意义。本文对30例慢性乙型肝炎后肝硬化患者血清内毒素和透明质酸(HA)、层黏连蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原氨基端肽(PⅢNP)、Ⅳ型胶原(Ⅳ.C)水平进行同步检测，分析内毒素在肝纤维化进程中的可能作用。
1 受试者与方法
1.1 受试者 符合中华医学会传染病寄生虫病学会、肝病学分会联合修订的《病毒性肝炎防治方案》(2000年9月，西安)中乙型肝炎后肝硬化诊断标准［4］的住院患者30例，其中Child-Pugh A级9例、Child-Pugh B级11例和Child-Pugh C级10例。正常对照40例，均为健康体检者，其性别、年龄与肝硬化组均有可比性。
1.2 方法 鲎试验法检测血清内毒素（上海伊华临床医学科技公司提供试剂）；放免法（RIA）检测HA、LN、PⅢNP、Ⅳ.C（试剂分别由上海海研生物医学技术中心和芬兰Orion Corporation提供）。血样采集：试验当天清晨经肘静脉无热原注射器采空腹血3ml，置入无热原肝素抗凝试管，于低温离心机(-4℃)4000r/min离心5min，提取血浆无热原试管-20℃保存待检。血清内毒素、HA、LN、PⅢNP、Ⅳ.C含量的测定严格按照说明书操作。
1.3 统计学处理 所有数据以x±s表示，应用用SPSS11.0统计软件对数据采用t检验和方差分析，分析前检测正态性和方差齐性；相关性采用Spearman相关分析，以P＜0.05有统计学意义。
2 结果
结果表明，各项检测指标均随着肝功能严重程度的加重而升高，以Child-Pugh C级组为最高。内毒素水平比较：正常对照组与其他3组均差异有显著性(P<0.05)，Child-Pugh A级、Child-Pugh B级和Child-Pugh C级之间均差异有显著性(P<0.05)。HA、LN、PⅢNP、Ⅳ.C水平比较：正常对照组与肝硬化3组均差异有显著性(P<0.05)；肝硬化3组之间差异均有显著性(P<0.05)。各组血清内毒素、HA、LN、PⅢNP、Ⅳ.C的含量见表1。
表1 各组血清中内毒素、HA、LN、PⅢNP、Ⅳ.C的含量 (略)
3 讨论
内毒素是存在于革兰阴性细菌（G-细菌）菌体细胞壁内的脂多糖（LPS），在细菌快速生长或死亡时释放出来，大多数肝病伴内毒素血症患者无明显的感染证据，认为其内毒素主要来自肠道，称之为肠源性内毒素血症，由肠道G-细菌产生并释放出来。肝病时肠腔内细菌过度生长繁殖，内毒素产生增加，且肝病时常伴有肠黏膜通透性增加，因而内毒素吸收亦增加，加之肝脏对内毒素的清除功能减退、门体分流、淋巴回流增加等因素，因此肝病时常易发生内毒素血症。本研究表明，肝硬化患者血浆内毒素水平明显升高，且随病情加重而增加，提示内毒素水平升高是肝功能损害的结果之一。
内毒素可诱导肝硬化大鼠肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、一氧化氮（NO）等细胞因子的释放［5］。内毒素是一类具有高度活性的大分子物质，可依赖LPS结合蛋白和CD14系统作用于细胞，尤其是巨噬细胞、单核细胞、中性粒细胞等，然后通过一系列的细胞内信号传导系统诱导细胞产生多种生物活性分子，如肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素（IL）等肽类物质和白三烯、血小板活化因子、血栓素等脂类介质及一氧化氮大量产生［6］。此外，内毒素可直接产生肝细胞毒性作用，引起微循环障碍，加重肝脏损伤，抑制肝细胞再生。损伤的肝细胞、内皮细胞及激活的Kuffer细胞，间接诱导和激发肝星状细胞的基因和表型发生改变，成为被激活的星状细胞，称之为肌成纤维样细胞，不仅继续受旁分泌途径的调节，且通过自分泌效应维持和扩展其激活状态，结果肝星状细胞大量增值、活化，并产生大量细胞外基质，而细胞外基质的降解相对或绝对不足，最终导致纤维化。内毒素还可上调结缔组织生长因子（CTGF）mRNA的表达，且呈一定的剂量效应关系［7］。笔者发现肝硬化患者血清内毒素水平升高与血清肝纤维化指标水平升高呈正相关，提示内毒素可促进肝纤维化进展。表明肝功能损害加重了内毒素血症，内毒素等毒性物质又加重肝功能损害，形成恶性循环，降低血浆内毒素可能有助于延缓肝硬化的病情进展、减少并发症及改善预后。
【参考文献】
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7 袁粒星，刘小菁，高举，等. 内毒素对肝星状细胞结缔组织生长因子表达的影响. 中华肝脏病杂志，2003，11（4）：200.
作者单位： 1 200040 上海，复旦大学附属华山医院消化科
2 442008 湖北十堰，郧阳医学院附属东汽公司总医院消化科
(编辑：汪 洋)