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Home医源资料库在线期刊中华医学实践杂志2006年第5卷第7期

琐阳花色甙复合瘤苗对实验性肺癌小鼠免疫功能影响的研究*

来源:中华医学实践杂志
摘要:【摘要】目的观察琐阳花色甙复合瘤苗治疗实验性肺癌小鼠体内免疫功能效应。方法用LCC细胞接种的方法制造肺癌模型,分别观察对照组(荷瘤小鼠注射生理盐水)、实验组(荷瘤小鼠免疫接种琐阳花色甙复合瘤苗)体内血清白细胞介素-2(IL-2)、肿瘤坏死因子(TNF)水平及脾细胞对肺癌(LCC)的细胞毒活性的变化。05),实验组小鼠脾细......

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  【摘要】  目的  观察琐阳花色甙复合瘤苗治疗实验性肺癌小鼠体内免疫功能效应。方法  用LCC细胞接种的方法制造肺癌模型,分别观察对照组(荷瘤小鼠注射生理盐水)、实验组(荷瘤小鼠免疫接种琐阳花色甙复合瘤苗) 体内血清白细胞介素-2(IL-2)、肿瘤坏死因子(TNF)水平及脾细胞对肺癌(LCC)的细胞毒活性的变化。结果  实验组IL-2、TNF血清含量与对照组相比,差异有显著性(P<0.05),实验组小鼠脾细胞对小鼠肺癌(LCC)的细胞毒活性显著增强,明显高于对照组(P<0.05)。结论  琐阳花色甙复合瘤苗能明显提高实验性肺癌小鼠的免疫功能。

    【关键词】  琐阳花色甙复合瘤苗;免疫肺癌小鼠;IL-2;TNF;细胞毒活性变化

     Reaserch of immunity function on kung tumor by cancer cell vaccine modified with anthocyanins

    HUANG Qian,TANG Yan,BIAN Jing-wen,et al.Medical College of Yangzhou University,Yangzhou,Jiangsu 225001,China

    【Abstract】  Objective  Observation of effect of immunity function in the mice through the cancer cell vaccine modified with anthocyanins cure the experimentive lung cancer.Methods  Making a lung cancer model by inoculate  with LCC,separately observe the control group(inject normal sakine to mice with LCC ) and experimental group (inoculate the cancer cell vaccine modified with  anthocyanins to mice with LCC),the level of  IL-2、TNF in it and the change of the toxicity and activity of the cell to the LCC.Results  The level of IL-2、TNF in the serum in experimental group compare with the control group show marked difference (P<0.05),toxicity and activity of the cell to the LCC obviously boost up in the spleen cell of the rice in the  experimental group (P<0.05).Conclusion  The cancer cell vaccine modified with  anthocyanins can obvious exaltate the immunity function of mice with lung cancer.

    【Key words】  cancer cell vaccine modified with anthocyanins;mice with Lcc; IL-2;TNF;active of cytotoxin

    锁阳又名不老药、锈铁棒,为锁阳科锁阳属植物(本科单属单种)锁阳(Cyr3omorium songaricumRupr.)的干燥肉质茎,生于荒漠草原、草原化荒漠与荒漠地带,多寄生于茨黎科白刺属(Nitraria)植物的根上。主要分布于我国西北部地区,蒙古、原苏联中亚地区也有分布。锁阳味甘、性温,具补肾、助阳、益精、润肠养筋之功用。中医治阳痰、遗精、不孕、腰膝酸软、肠燥便秘、血枯、尿血等。锁阳还是较常用蒙药,名“乌兰一高要”,蒙医认为其味甘、涩,性温,具有平息“协日”,消食、健身之功效,用于泛酸、胃脱胀痛、“协日”性头痛、阳痰、腰腿痛、早泄、白带多等。琐阳是增强机体免疫功能的有效中药,在抗衰老、提高机体免疫功能方面有重要作用[1~3]。本实验用琐阳提取物花色甙(anthocyanins)生物修饰构建复合瘤苗,观察其对实验性肺癌小鼠体内血清中白细胞介素-2(IL-2)、肿瘤坏死因子(TNF)含量变化及实验组小鼠脾细胞对小鼠肺癌(LCC)的细胞毒活性的影响,现将实验结果报道如下。

    1  材料与方法

    1.1  材料

    1.1.1  药物  琐阳花色甙,由扬州大学中西医结合研究所提供。

    1.1.2  动物  BALB/c纯系小鼠,雌雄各半,4~6周龄,体重18~25g,随机分组,购自江苏省实验动物中心。

    1.1.3  主要试剂及器材  IL-2、TNF放免试剂盒(由北京原子能研究所提供),台式高速及低速离心机(上海医用分析仪器厂),BECKMAN  DP-5500型r计数器(美国BECKMAN公司产品)。

    1.1.4  LCC系肺癌细胞株  上海生物细胞所购入,由本实验室传代。

    1.2  方法

    1.2.1  肺癌模型的复制  肺癌细胞株LCC用RPMI-1640培养液培养,常规消化后,RPMI-1640培养液洗涤。计数并调成2.5×105/ml浓度,取200:1,即5×1011个细胞种于BALB/c小鼠右前腋皮下[4]。

    1.2.2  琐阳花色甙复合瘤苗系列生物修饰构建  按本室创建的方法实施[5,6]。

    1.2.3  细胞毒实验  采用MTT法:取代传24h后的LCC作靶细胞;接种肿瘤后14天处死,荷瘤对照组小鼠及实验组小鼠和正常小鼠的脾细胞为效应细胞,效:靶比例为20:1。实验组、荷瘤对照组、空白对照组小鼠各12只(正式实验时,对照组小鼠死2只)[7]。

    1.2.4  实验分组及免疫接种  造模后小鼠随机均分为3组,每组12只,雌雄各半。(1)实验组:  将琐阳花色甙与培养的LCC进行系列生物构建,制成LCC-复合瘤苗组,分别对BALB/c纯系鼠进行免疫接种3次(每组10个样本,每周1次,分前左、右肢,后左、右肢,每肢按三点法接种,用量为0.4ml/肢),第28天眼眶取血,采用眶动静脉取血法,将动物倒持压迫眼球,使其突出充血后,以眼科镊子迅速取眼球,收集血液于5ml玻璃试管中,4℃静置4h,2000/min离心10min,吸取血清,进行IL-2、TNF水平检测。(2)空白对照组:未荷瘤正常小鼠接种生理盐水,方法步骤同实验组。(3)荷瘤对照组:接种生理盐水,方法步骤同实验组。血清TNF含量分析:用放射免疫学方法。检测方法采用液相竞争法,取聚苯乙烯试管编号,操作方法严格按照试剂盒说明书进行。血清IL-2含量分析:用放射免疫学方法。血清的收集同TNF含量分析。测定方法采用平衡法,取聚苯乙烯试管编号,操作方法严格按照试剂盒说明书进行。正式实验时,对照组小鼠死4只,实验组小鼠死1只[8]。

    1.2.5  统计学处理  采用t检验及方差分析。

    2  结果

    2.1  琐阳花色甙复合瘤苗对实验肺癌小鼠血清IL-2水平影响效应  见表1、图1。表1  琐阳花色甙复合瘤苗对实验肺癌小鼠血清IL-2水平的作用注:与荷瘤对照组比较,*P<0.05 图1  琐阳花色甙复合瘤苗对实验 肺癌小鼠血清IL-2水平影响2.2  琐阳花色甙复合瘤苗对实验肺癌小鼠血清TNF水平影响效应  见表2、图2。表2  琐阳花色甙复合瘤苗对实验肺癌小鼠血清TNF水平的作用注:与荷瘤对照组比较,*P<0.05

    2.3  琐阳花色甙复合瘤苗免疫后小鼠脾细胞对LCC杀伤效应的影响  见表3。图2  琐阳花色甙复合瘤苗对实验肺癌小鼠血清TNT水平影响表3  注:与其他组比较,*P<0.01

    3  讨论

  肿瘤的发生、转移与免疫功能密切相关,免疫功能的低下是肿瘤发生与转移的重要原因。目前,已知IL-2具有杀伤肿瘤细胞的作用,TNF亦有抗肿瘤及参与免疫调节作用。笔者选择了与恶性肿瘤关系较为密切的TNF、IL-2及小鼠脾细胞对小鼠肺癌(LCC)的细胞毒活性作为指标,进行研究分析[9,10]。

    肿瘤坏死因子(TNF)是一类由细菌内毒素诱导的,能引起肿瘤出血性坏死的细胞因子。通常将TNF分为α和β两类,TNF-α又称恶病质因子(Cachectin),是激活巨噬细胞产生的一种蛋白;TNF-β又称淋巴毒素(lymphntoxin ),是淋巴细胞分泌的一种糖蛋白。人体TNF-α和TNF-β基因均位于第6对染色体,与主要组织相容性复合体(MHC )基因毗邻或介于HLA-DR和HLA-A位点之间。这两类基因产物有30%~50%的氨基酸序列同源性,通过共同的细胞膜受体起作用[11~14]。本实验测试的TNF含量既包括TNF-α,又包括TNF-β。笔者的实验结果显示,荷瘤对照组小鼠血清TNF含量显著低于空白对照组及免疫治疗实验组,而在免疫治疗实验组与空白对照组之间差异无显著性,认为可能荷瘤对照组的肿瘤抑制了自身巨噬细胞及淋巴细胞对各种活性物质的反应,从而使其分泌TNF减少。而经免疫治疗的实验组可以解除这种抑制作用,其TNF水平接近空白对照组水平(P>0.05)。

    很多疾病如肿瘤、自身免疫性疾病、免疫缺陷性疾病、多种感染性疾病以及衰老的过程中,常伴有IL-2产生或功能异常。这些疾病并非均适于用IL-2进行治疗,而且由于IL-2体内半衰期短,用量大,副作用严重,大大地限制了其临床应用。面对上述情况,研究者们在发掘能够影响IL -2产生和活性的中药方面做了大量工作。同时又将其作为评价中医药对免疫系统作用的一个重要指标。本研究实验结果表明,荷瘤小鼠IL-2血清含量显著低于空白对照组及实验组,此表明荷瘤小鼠对照组的免疫抑制导致IL-2含量减少,琐阳花色甙复合瘤苗的免疫接种能明显提高实验性肺癌荷瘤小鼠机体的IL-2活性,激活其免疫功能[15,16]。

    实验研究表明,经琐阳花色甙复合瘤苗免疫后小鼠脾细胞对LCC杀伤效应显著增强,细胞毒活性达(82.43±6.46)%,实验组与荷瘤对照组相比差异有显著性(P<0.05)。琐阳花色甙复合瘤苗的免疫接种能提高自身的细胞免疫功能,增强机体的抗瘤效应[17]。本研究探讨了琐阳花色甙复合瘤苗对实验性肺癌小鼠免疫功能的影响,为瘤苗治疗的免疫机制及临床应用研究提供理论和实验依据。

    【参考文献】

    1  赵守训,秦康,丁志遵.中药辞海(第三卷).北京:中国医药科技出版社,1997,922-924.

    2  张思巨,张淑运.中药锁阳的化学成分研究.中国药学杂志,1991,26(11):649-651.

    3  崔树德.中药大全.哈尔滨:黑龙江科学技术出版社,1997,574-5751.

    4  曹文广,杜平.现代癌症生物治疗学.上海:人民军医出版社,1995,98-122.

    5  徐立春,孙振华,陈志琳,等.三棱、莪术提取物修饰的肿瘤细胞疫苗的非特异性抗瘤实验研究.癌症,2001,20(12):1380-1382.

    6  徐立春,卜平,陈平,等.SC提取物修饰肿瘤细胞疫苗对MFC、S180的抗瘤作用.中华现代全科医学杂志,2002,2(6):1-3.

    7  季宇彬.抗癌中药药理与应用.哈尔滨:黑龙江科学技术出版社,1999,995-999.

    8  巴德年.当代免疫学技术与应用.北京:北京医科大学出版社,1998,388-396.

    9  Zheng S,Yang H,Zhang S,et al. Initial study on naturally occurring products from traditional Chinese herbs and vegetables for chemoprevention.Cell Biochem Suppl,1997,27(5):106-108.

    10  Navarro F,Souza MM. Phytochemical analysis and analgesic properties of Curcuma zedoaria grown in Brazil.Phytomedicine,2002,9(5):427-428.

    11  Deng R,Wang M,Li X,et al. In vitro drug release characteristics of glatin mcriphere containin zedary turmeric oil for heptecal arterial embolization.J Chin Pharma Sci,2000,9(3):146-148.

    12  Morikawa T,Matsuda H. Potent protective ffects of sesquiterpenes and curcumin from zedoariae rhizome on liver injury induced by  D-galactosamine/lipopoly saccharide ortumornecrosis factor-alpha.Biol Pharm Bull,2002,25(5):627-629.

    13  Xu LC,Sun ZH,Bo P,et al .Antitumor effect on murine B16 melonoma by tumor cell vaccine modified with SE.Aizheng,2001,20(12):1380-1382.

    14  Linderoth NA,Popwicz A,Aastry S.Identification of the peptidebinding site in theheat shock chaperone/tumor rejection antigen gp96.J Biol Chem,2000,275(8):5472-5477.

    15  齐艳华,苏格尔.锁阳的研究进展.中草药,2000,31(2):146-148.

    16  杨新中.中西医结合防治疗肿瘤的理论基础及必要性.中国医药学报,2003,18(2):76-78.

    17  Amold Schild D,Hanau D,Spehner D,et al .Cutting edge:receptor-med iated endocytosis of heat shock proteins by professional antigen presenting cells. J Immunol,1999,162(7):3757-3760.

     *基金项目:扬州大学科学资金资助项目(编号:210036)

    作者单位: 1 225001 江苏扬州,扬州大学医学院

    2 江苏扬州,江苏省苏北人民医院

    3 江苏南京,南京军事医学研究所 

   (编辑:邓  锋)

作者: 黄谦,汤艳,卞京文,周娟,许祥裕,徐立春 2006-8-20
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