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Home医源资料库在线期刊中华医学实践杂志2006年第5卷第11期

试论酶促反应过程中非线性发生的原因及处理方法

来源:中华医学实践杂志
摘要:酶这一生物催化剂在正常机体代谢中起着重要作用,在病理情况下,尤其一些细胞内酶,当细胞损伤时会释放到体液中造成体液中酶量或酶活性的改变,酶可作为诊断指标的依据,在我们临床检验实际工作中常常由于种种原因反应速率不尽相同,或多或少都存在着非线性,影响测定结果的准确性。我们在工作中反复论证,总结出导致非线......

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  酶这一生物催化剂在正常机体代谢中起着重要作用,在病理情况下,尤其一些细胞内酶,当细胞损伤时会释放到体液中造成体液中酶量或酶活性的改变,酶可作为诊断指标的依据,在我们临床检验实际工作中常常由于种种原因反应速率不尽相同,或多或少都存在着非线性,影响测定结果的准确性。我们在工作中反复论证,总结出导致非线性发生的原因有以下几种:

  (1)测量时间设置不当:如果测量时间设置靠前,延迟时间太短,实际化学反应延迟期还没结束就开始测量,导致非线性,由延迟期非线性因素引起;如果测量时间靠后,即延迟时间太长,于非线性期测量导致非线性,由非线性期的非线性因素引起,对于同一实验、同一试剂盒的不同测定标本来说,虽然设计的延迟时间相同,但因待测物浓度不同,实际化学反应的延迟期并不相同,线性期、非线性期也不同,因此完全利用同一延迟时间是不恰当的。

  (2)不同厂家试剂盒组成成分不同,延迟期、线性期也有差异,线性时间太长,反应速度必然缓慢,AA/At过大不易控制,也易引起非线性。在线性期的测量时间内,反应速度与被测物浓度必须成正比,即呈一级反应或拟零级反应,而对另一些物质或反应未知酶活性测定中的底物及酶试剂方法中的酶必须呈零级反应即酶或底物的用量必须恰到好处,才能更好地抑制非线性。

  (3)酶活动测定或酶试剂方法,实际上都是酶促反应,只不过前者酶是待测物,后者底物是待测物。酶促反应的影响因素很多,除底物浓度、酶试剂浓度外,温度、pH值、离子强度、介质等均可影响化学反应过程。

  (4)仪器引起的误差,波长精密度、滤光片受潮、发霉、比色杯不清洁、电压控制不稳、室温太高等对仪器的线性功能都有影响。

  (5)待测酶活力高或基质耗尽可引起非线性。因酶活力特别高,在延迟时间内已大量消耗了基质,以至在测量时间内,化学反应已进入非线性期。

  (6)试剂变质会影响线性关系。

  (7)溶血标本、黄疸血清、乳糜血等有引起非线性的可能。

  有些引起非线性的原因一时尚不能查清,甚至难以找到真实原因,将待测酶高活力血清做不同倍数的稀释,测定各稀释度的酶活性,可观察非线性情况。为了计算非线性度,按最小二乘法的计算要求,读数次数应不少于4次,读数间隔按一般仪器要求30s即可,线性期在2min以上即可。

  (编辑:若  木)

  作者单位: 432600 湖北安陆,安陆市第二人民医院检验科

        444300 湖北巴东,巴东县人民医院

作者: 卓泉芳,谭晓宇
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