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【摘要】 目的 通过比较几种试剂测定粪隐血，以便寻找更方便、快捷、价廉准确的检测方法。方法 采用化学法（试纸法、联苯胺法）、胶体金法（按试剂说明书操作）和蚕丝蛋白膜法（按自制方法操作）比较。结果 化学法敏感度高，但特异性低。化学法和胶体金法与蚕丝蛋白膜比较在两组试验组差异均有显著性（P<0.01）。结论 化学法对粪隐血试验只能起初筛作用，进口免疫试剂价格过高，蚕丝蛋白膜法可代替免疫法，在临床应用是理想的免疫方法。
【关键词】 隐血试验；方法；评价
粪隐血试验在病人消化道少量出血和肠道肿瘤的诊断中有极其重要的价值［1］。由于化学法检测隐血原理是因Hb有类似过氧化物酶的作用原理，易受动物血、食物、药物及其他还原性物质干扰，而进口金标免疫法胶体金法虽特异好但试剂价格昂贵。为此，我科根据免疫学原理研制出蚕丝蛋白膜试剂，对508例住院病人的粪隐血以胶体金纸条法为标准对联苯胺法、贝索纸条法、蚕丝蛋白膜法在临床应用的效果进行初步评价。
1 材料与方法
1.1 标本来源 随机收集我院各科患者粪便459份为试验组，遵医嘱食用动物血20～50g和含铁高的蔬菜及有还原性的药物，其中有4例吞服自己2ml鲜血的自愿者。进食48h后收集的49份粪便标本，称对照组。
1.2 试剂 胶体金法为美国进口试剂，批号0404711。贝索粪隐血2号为珠海贝索公司的产品，批号031125。联苯胺试剂（按朱忠勇《实用医学检验》）新鲜配置［2］。蚕丝蛋白膜法试剂为自行研制。
1.3 操作方法 化学、免疫3种方法分别按各自操作规程操作。蚕丝蛋白膜法操作程序：（1）取修饰好的蚕丝膜片塑料条4条（按照以下4组做好标记编号），放室温3min，然后分别滴加待检患者粪便悬液，即试验条片、阳性对照条片、阴性对照条片、空白对照条片各组相应的标本20μl。（2）将以上各组加有粪便悬液的受体膜，置微波炉（市售）（LOW档）反应2min使粪便悬液种的Hb与蚕丝膜上的抗人Hb抗体结合。（3）以PBS-Tween 20 0.1mol/L、pH7.4冲洗膜4～5次，然后于每片丝膜上覆盖一片酶标抗体聚脂膜，使丝膜上形成抗体HbAb-Hb-HRP-抗人HbAb的复合物。（4）再次放微波炉反应2min后立即取弃酶标抗体聚脂膜片，同时以PBS-Tween 20 0.1mol/L、pH7.4冲洗蚕丝蛋白复合膜4～5次。（5）吸干后滴加H2O2与TMB显色剂各1滴置微波炉中1min，取出片膜可见蚕丝膜上阳性对照呈蓝色。（6）观察结果。阳性即可见丝膜上呈现鲜明的蓝色，阴性对照和空白对照条片均为无色。
2 结果
以胶体金法的测定结果为标准，分别计算并比较两组样本的3种方法各自的敏感性、特异度及胶体金法的一致性。结果见表1～4。 表1 无指引组4种方法的测定结果表2 指引组4种方法的测定结果表3 试验组3种方法的敏感度、特异度比较表4 两组样本3种方法测定结果与胶体金法结果之间的配对χ2检验P值
3 讨论
胶体金免疫法是被世界卫生组织和世界胃镜检查协会推荐作为粪便隐血试验的一种较为确认的方法［2］。但因其成本偏高，在某种程度上限制了其推广应用。在临床应用中，研发更为方便、快捷、准确，且成本低廉的新的粪便隐血检验方法将成为免疫学试验研究的课题。
单克隆抗体胶体金试验法特异地针对人血红蛋白抗原表位［3］。因此，本文以胶体金免疫法的测定结果为标准，分别对联苯胺法、贝索试纸法、蚕丝蛋白膜法。在临床应用中进行对比，其结果：在试验组和对照组，联苯胺法、贝索试纸法虽然敏感度较高，但特异度不高，在试验组中分别是76.3%、79.1%；在对照组中特异度更低，分别是31.8%、36.4%；与胶体金法缺乏明显的一致性（P<0.01)，而蚕丝蛋白膜法敏感性高达100%，特异度也高达100%，具有很好的特异性、灵敏性与胶体金法均表现高度的一致性（P<0.05)，基本上能排除饮食及药物等居多还原剂的干扰。
由此可见，两组中联苯胺法、贝索试纸法与胶体金法其结果存在明显差异（P<0.01)，而蚕丝蛋白膜法与胶体金法差异无显著性，均表现高度的一致性（P>0.05)。故在临床应用中，蚕丝蛋白膜法无疑是一种经济、便捷、精确的粪便隐血检测新方法。
【参考文献】
1 王莉.胶体金试纸与联苯胺法检测隐血的比较.临床检验杂志，2002，20（3）：144.
2 朱忠勇，陈之航.临床医学检验.上海：上海科学技术出版社，1978，202.
3 Young GP,St John DJ,Winawer SJ,et al.Choice of fecel occult blood tests for colorectal cancer screehing.Yecommendations based on performance characteristics in population studies.a WHO(World Health Organization) and OMED(World Organization for Digestive Endoscopy)report.Am J Gastroenterol,2002,97(10):2499-2507.
4 李林海，黄晓雁，张云龙，等.三种粪便隐血试剂实验效果观察.临床检验杂志，2004，22（2）：113.
作者单位：435000 湖北黄石，黄石市中医医院检验科