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【摘要】 目的 建立快速、简便的RP-HPLC法测定人血浆中美托洛尔浓度。方法 采用高效液相色谱法,用Hypersil ODS C18柱 (150mm×4.6mm, 5μm)；流动相：乙腈-磷酸氢二铵缓冲液(30:70 v/v); 柱温:室温; 荧光检测，流速1.0ml/min。结果 美托洛尔在1.25～160ng/ml浓度范围线性良好( r=0.9989) ,日内及日间精密度均小于10%,回收率>88%。结论 本方法快速、灵敏,可靠，可较好应用于临床血药浓度检测。
【关键词】 美托洛尔；高效液相色谱法；血药浓度
美托洛尔（Metoprolol）属于2A类即无部分激动活性的β1-受体阻断药(心脏选择性β-受体阻断药)。 它对β1-受体有选择性阻断作用，无部分激动活性，无膜稳定作用。其阻断β-受体的作用约与普萘洛尔（PP）相等，对β1 -受体的选择性稍逊于阿替洛尔。美托洛尔对心脏的作用如减慢心率、抑制心收缩力、降低自律性和延缓房室传导时间等与普萘洛尔、阿替洛尔（AT）相似，其降低运动试验时升高的血压和心率的作用也与PP、AT相似。其对血管和支气管平滑肌的收缩作用较PP为弱，因此对呼吸道的影响也较小，但仍强于AT。美托洛尔也能降低血浆肾素活性，临床应用多年,能有效治疗高血压、心绞痛、心肌梗死、慢性心力衰竭和心律失常等心血管疾病［1，2］ 。美托洛尔口服吸收迅速完全，吸收率大于90%，但肝脏代谢率达95%，首过效应为25%～60%，故生物利用度（F）仅为40%～75%。食物可增加口服本品的血药浓度达空腹时的1倍。口服血浆浓度高峰时间一般在1.5h，最大作用时间为1～2h。血压的降低与血药浓度不平行，而心率的降低则与血药浓度呈直线关系，由于该药物药理作用与血药浓度存在紧密的相关性，因此，本试验参照相关文献［3，4］，建立了一种快速检测人血浆中美托洛尔的方法，使其更好更广泛适用于临床上美托洛尔血药浓度的检测。
1 仪器与试药
1.1 仪器 日本岛津LC-10AT泵, RF-10AXL型荧光检测器, 7725i型手动进样器,N2000色谱工作站;XW-80A旋涡混匀器；Anke大容量多管离心机，乐百氏纯净水，恒温水浴锅。
1.2 试药 酒石酸美托洛尔（倍他乐克），阿斯利康制药有限公司生产，50mg/片；美托洛尔对照品,含量大于99.8%，购自中国药品生物制品检定所。乙腈，正己烷，异丙醇为色谱纯；其余试剂均为市售分析纯。
2 方法与结果
2.1 检测条件 色谱条件：流动相：乙腈-0.01mol/L磷酸氢二铵缓冲液 (30:70 v/v)；流速1.0ml/min，色谱柱Hypersil ODS C18柱(150mm×4.6mm,5μm)；检测波长为275nm/305nm ( Ex/ Em)；柱温:室温。
2.2 血浆样品的处理 取血浆样品1ml,加入内标液(400ng/L比索洛尔) 10μl和1mol/L NaOH 溶液200μl旋涡震荡混匀,再加入正己烷（含5%异丙醇）5ml旋涡振荡5min后, 4000r/min离心10min,取上清液4ml于50℃ 水浴挥干,残渣用100μl甲醇溶解,取40μl进样。
2.3 标准曲线 分别取空白血浆1ml,精密加入美托洛尔标准贮备液,使其含美托洛尔分别为1.25、2.5、5、10、20、40、80、160ng/ml血样，按“2.2”项下操作,浓度(C)对峰面积比(R)作线性回归，得：C=0.00204R+0.0013, r = 0.9987。最低定量下限为1.25ng/ml。
2.4 方法专属性 在本实验条件下, 美托洛尔有较大的响应，并与血浆中内源性杂峰有良好的分离度,不干扰样品峰的测定,基线噪音小, 美托洛尔与内标的保留时间分别为3.5、5.8min (见图1),本方法具有较高的专属性,在此条件下所测得的结果能代表美托洛尔浓度。
A空白血浆；B空白血浆加入美托洛尔及内标；C患者口服5mg酒石酸美托洛尔1.0h后。1-美托洛尔，2-比索洛尔
图1 血浆中美托洛尔色谱图
2.5 精密度与方法回收率 取空白血浆1ml,配制含美托洛尔浓度分别为2.5、10、80ng/ml的血浆样品各5份, 按“2.2”项下处理后进样分析，每日测定5份，连续测定3天，以每1天内测得的各浓度计算日内RSD，不同日内测定的各浓度计算日间RSD，结果表明日内、日间RSD均<10%,见表1，方法学符合测定要求。表1 回收率与精密度试验结果 (n=5，x±s)
3 样品分析及应用
分别选择在我科接受酒石酸美托洛尔（倍他乐克）治疗的10例慢性心力衰竭患者,男7例, 女3例,体重59.6±7.2kg, 年龄62.5±5.3岁,给药前实验室检查肝肾功能均正常,临床用法用量为50mg,每天2次,患者早晨空腹服第1次药后于0.5、1.0、3.0、8.0h抽取患者上肢静脉血,3000转/min离心10min，取上层血浆，按“2.2”项操作,进样测得美托洛尔浓度分别为结果测得: 0.5h为20.1±10.88ng/ml, 1.0h为62.53±28.67ng/ml, 3h为60.35 ±42.53ng/ml,8h为19.28±10.39ng/ml,结果表明，患者服用美托洛尔一定时间内在人体内药代动力学参数与文献报道结果基本相符。
4 讨论
美托洛尔是临床应用非常广泛的用于治疗慢性心力衰竭的药物，由于多为老年患者，药物作用存在较大的个体差异，而其体内血药浓度与其药理作用存在较好的相关性，因此对其血药浓度的监测能较好地使药物得到合理应用，并达到较好的治疗效果。美托洛尔的血药浓度RP-HPLC测定通常采用荧光检测器检测,相比于其他采用紫外检测方式对样品本进检测相比，在此色谱检测条件下样品峰有更大的响应，并与血浆中内源性杂峰分离非常完全,不干扰样品峰的测定,基线噪音小。本方法具有较高的灵敏度和专属性，且血样处理简捷方便,样品从处理到分析结果耗时很短，线性关系好,定量准确,能较好地应用于临床大批量样本的分析与血药浓度监测，适宜于在临床心血管病内科治疗中的广泛采用。
【参考文献】
1 Hialmarson A. Effects of beta blockade on sudden cardiac death during acute myocardial infarction and postinfarction period. Am J Cardiol, 1997，80: 35-39.
2 Braunwald E, Antman EM, Beasley JW, et al. ACC /AHA guidelines for the management of patients with unstable angina and non-ST-segment elevation myocardial infarction. JACC, 2000，36: 970-1062.
3 张毕奎,原海燕,郭军平,等. 酒石酸美托洛尔片相对生物利用度及药动学和药效学. 中国医院药学杂志, 2001， 21: 589 - 592.
4 许剑安,陈伟力,徐红蓉，等.酒石酸美托洛尔片在中国健康人体的药代动力学.中国临床药理学杂志, 2005,21(2):136-139.
作者单位：333000 江西景德镇，景德镇市第一人民医院心内科