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【摘要】 目的 探讨美国雅培公司的AXSYM全自动免疫分析仪和i2000型全自动免疫分析仪及其配套试剂检测血清CA19-9结果的差异。方法 AXSYM全自动免疫分析仪采用微量子捕捉免疫发光技术(MEIA),i2000型全自动免疫分析仪采用(CMIA)化学发光微粒子免疫分析。结果 200例体检标本采用AXSYM和i2000型分别检测CA19-9结果存在显著差异。结论 (CMIA)化学发光微粒子免疫分析及其配套试剂较微量子捕捉免疫发光技术(MEIA)具有更高的敏感性、特异性和稳定性，所以采用i2000全自动免疫分析仪及其配套试剂检测较AXSYM全自动免疫分析仪敏感性、特异性和稳定性高，对疾病的早期诊断具有更高的价值。
【关键词】 CA19-9;化学发光仪;检测
化学发光免疫分析是继荧光、放射性同位素和酶免疫分析之后发展起来的一项新的免疫分析技术，它具有灵敏度高、重复性好、准确、效期长并安全无污染等优点，成为取代放射免疫分析技术的首选。
CA19-9是一种低聚糖肿瘤相关抗原，在血清中以粘蛋白的形式存在，分子量大于5000KD，是Koprowski等应用人类结肠癌培养细胞株免疫BALB/C鼠而获得的19种抗体中的一种肿廇相关抗原[1]，可作为胃癌、肠癌、胰腺癌和肝癌等早期诊断和预后复查有着重要临床价值的指标。测定其浓度是对肿瘤活性的一种反映，且肿瘤标志物的出现往往比影像诊断早半年之多[2]。正常人血清中CA19-9水平很低，而胰腺癌中明显增高，阳性率高达90.7%，而肝癌的阳性率为72.5%[3]。Mitsuhashi等[4]还认为胰腺癌手术治疗的效果与血清CA19-9关系密切，如症状缓解血清CA19-9持续下降，病情恶化又继续增高，所以CA19-9是对胰腺疾病患者诊断、手术疗效的评定、术后病情和复发转移的有价值的肿瘤监测标志物。
1 材料与方法
1.1 检测对象 本院健康体检人员200例，男100例，女100例;年龄25～60岁，平均45岁。
1.2 方法 美国雅培公司的AXSYM全自动快速免疫分析系统:该系统综合使用了微粒子捕捉酶免疫分析技术(MEIA)、荧光偏振免疫分析技术(FPIA),可测定激素、肿瘤标志物、肝炎、病毒标志物、维生素和各种治疗药物浓度等。i2000型全自动免疫分析仪及其配套的检测试剂是采用化学发光法进行检测，可用于超微量定量或定性测定人类血清。血浆、全血或其他各类体液中病毒抗原、抗体、激素、多肽、肿瘤蛋白等代谢产物的一套系统。
1.3 反应过程 一般在反应的第一阶段，标本与微粒以一定比例混合，标本中被检物质与微粒上包被的抗体进行一定时间的反应。第一反应终了后，利用磁场分离、吸去未反应的被检物质与其他的不要成分。
2 结果
200例健康体检人员均采用美国雅培公司的AXSYM全自动免疫分析仪和i2000型全自动免疫分析仪及其配套试剂分别检测血清CA19-9，结果均值分别39.30U/ml和69.05U/ml，差异有显著性。
3 讨论
CA19-9测定试剂盒由美国雅培公司提供，美国雅培公司的AXSYM全自动免疫分析仪采用微量子捕捉免疫发光技术(MEIA)，酶标抗体采用碱性磷酸酶作为标记物，碱性磷酸酶是一种最稳定的酶标记物，而基质液采用极稳定的4-甲基磷酸伞形酮。抗体包被采用微粒子技术，大大增加反应面积和提高特异性。待测CA19-9浓度与荧光发光强度成正比。
i2000型全自动免疫分析仪采用(CMIA)化学发光微粒子免疫分析是雅培公司的专利技术之一，主要用于测定蛋白质、病毒抗原等大分子物质。采用此方法生产的试剂具有极高的灵敏度、特异性和稳定性。试剂特点：抗原/抗体包被的微粒子：采用类磁颗粒，增加了反应的表面积，提高了反应的灵敏度，缩短了反应的时间，应用磁力吸附分离，冲洗彻底干净，提高了反应的特异性。标记抗体：采用专利技术的吖啶类(N-磺酰基)羧基氨基化合物作为标记物，由于其分子结构特性和增加的光自量，使得其在非竞争免疫分析模式中有极好的测试灵敏度和极宽的线性范围。更主要的是，此复合物所结合的特色硫磺丙烷基，提供了极佳的水溶性，使得背景噪音极大降低，从而检测灵敏度值大大提高。并且，该复合物还有极好的稳定性，有更长的试剂效期，极长的标准曲线保存和全面的极好的试剂表现。基质液：采用H2O2作为预激发液, 将吖啶酯从反应复合物中脱离下来,采用NaOH作为激发液, 吖啶酯在过氧化物和碱性溶液中发生氧化反应，这引起化学发光反应的发生。N-methylacridone形成并释放能量(光发射)，并返回到基态。
雅培所用的CA19-9检测试剂都使用相同的单克隆抗体。然而，在试剂的组成上存在着非常重要的差异。笔者认为就是这些差异造成了同一样品检测结果的不同。
差异之一在于i2000型全自动免疫分析仪上的ARCHITECT CA19-9试剂中的标记抗体使用F(Ab')2 抗体片断取代原有的完整分子抗体。抗体片段中所包含的结合位点与全分子一致，却减少了分子中会造成检测干扰及由于与血清蛋白非特异性结合而增加背景噪音的部分。使用ARCHITECT CA 19-9XR试剂进行检测，由于F(Ab')2抗体片断非特异性结合的减少会使背景信号降低，从而致使在检测范围低端的检测值会更低。
差异之二在于ARCHITECT CA19-9XR试剂中微粒子包被的抗体浓度获得优化，反应环境更趋于酸性。内部研究显示，ARCHITECT CA19-9XR中微粒子上包被的抗体数量与样品产生的信号量有直接关系。更酸化的反应环境及更优化的抗体包被微粒子会使得更多的抗原结合上微粒子。CA19-9抗原是一个拥有众多重复的抗原决定簇大分子糖蛋白。标记抗体由于使用了F(Ab')2抗体片断而非全分子，而变得更小，因此在当众多标记抗体分子与众多抗原决定簇发生结合反应时立体位阻就减小了。这种结合更多标记抗体的能力会使得具有大量抗原决定簇患者标本的检测值有显著上升。这也是造成方法学间对于同一标本的检测结果存在差异的主要原因。
标本中抗原的本质会引起方法学间不同的检测结果。CA19-9是一类复杂的异质性分子, 因此会在不同方法学的检测间获得不同的结果。胰腺癌细胞株中抗原的表达异常已有所报道，例如sialyl-Lewisa抗原会发生表达增强。如果标本中的细胞株具有大量的抗原决定簇的话，那么高值的检测结果就会因为试剂组成的差异而凸现出来。
因此i2000型全自动免疫分析仪采用(CMIA)化学发光微粒子免疫分析及其配套试剂较AXSYM全自动免疫分析仪采用微量子捕捉免疫发光技术(MEIA)具有更高的敏感性、特异性和稳定性，所以采用i2000全自动免疫分析仪及其配套试剂检测较AXSYM全自动免疫分析仪敏感性、特异性和稳定性高，对疾病的早期诊断具有更高的价值。
在使用i2000型全自动免疫分析仪采用ARCHITECT CA19-9XR 以连续监测时，实验室必须重新确立基线水平。37U/ml并非是一个绝对的截断值，大于或小于此值的检测结果并不意味着癌症的存在或者不存在。此检测应作为病情与治疗效果的长时间监测工具。
【参考文献】
1 潘中允.临床核医学. 北京：原子能出版社，1994，521-522.
2 王宝昌，范跃祖.血清CA19-9对胰腺癌诊断的临床评价.中国肿廇临床与康复,1997，(2)：1.
3 袁秀荣.肿瘤生物标志物的临床应用. 国外医学·肿瘤学分册，1997,24:83.
4 Mitsuhashi N,Niibe H，Yamakawa M,et al. The clinical evaluation of Serum CA19-9 and CA-125 levels in patients with malignant tumes comparison with serum CEA levels.Jpn Nucl Med,1985,22(1):835.