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关键词 乙型肝炎 HBsAg携带者 PBMC IL-12
IL-12levels in the serum and PBMC culture supernatant of patients
with HBVinfection and its significance
Jiang Fengpeng，Huang Fen，Dou Xiaoguang.
Department of Infectious Disease，NO.2Affiliated Hospital of China Medical University，Shenyang110004.
【Abstract】 Objective To detect IL-12Levels in the serum and PBMC culture supernatant of patients with acute hepatitis B，chronic hepatitis B，HBsAg carriers and healthy persons and discuss its significance.Methods PBMC was isolated from heparinized blood by centrifugation on a Ficoll Hypaque density gradient.IL-12levels of the serum and PBMC culture supernatant were detected by ELISA method.Results 1.Serum IL-12:Serum IL-12positive rate of patients with acute hepatitis B，chronic hepatitis B，HBsAg carriers and healthy persons was30%，50%，10%，0%respectively，serum IL-12positive rate of patients with chronic hepatitis B（50%）was significantly higher than that of healthy persons（P<0.05），2.PBMC culture supernatant IL-12;IL-12levels in PBMC culture supernatant of patients with acute hepatitis B，chronic hepatitis B，HBsAg carriers and healthy persons were121.09±97.43pg/ml，57.11±40.51pg/ml，25.4±15.86pg/ml and38.35±33.86pg/ml respectively.IL-12levels in PBMC culture supernatant of patients with acute hepatitis B andwith chronic hepatitis B were significantly higher than that of HBsAg carriers（P<0.05）.Conclusion Serum IL-12positive rate of patiets with chronic hepatitis Bwas singnificantly higher than that of healthy persons.IL-12levels in PBMC culture supernatant of patients with acute hepatitis B and chronic hepatitis B were significantly higher than that of HBsAg carriers.IL-12levels in serum and PBMC culture supernatant have relation to liver inflammation.
Key words hepatitis B HBsAg carrier
PBMC IL-12 IL-12是一种前炎症细胞因子 ［1］ ，能专一地促进Th1细胞的生成以及对CTL分化起作用 ［2］ 。关于HBV感染者血清或外周血单个核细胞培养上清液IL-12的检测报道较少，且都限于慢性乙型肝炎及携带者，而关于慢性乙型肝炎及携带者，Rossol报道其血清IL-12水平较健康人显著增高 ［3］ ，JIW等报道慢性乙型肝炎病人血清及PBMC培养上清液IL-12水平较正常对照为低 ［4］ ，两者报道结果不一致。我们的实验包括急性乙型肝炎、慢性乙型肝炎、HBsAg携带者和健康人，同时检测血清及PBMC在HBcAg刺激后培养上清液中IL-12水平，进一步明确各型感染者IL-12产生的情况，并探讨其意义。
1 材料与方法
1.1 标本来源 选取急性乙型肝炎10例、慢性乙型肝炎10例，HBsAg携带者10例作为研究对象，10例正常人作为对照组。10例急性乙型肝炎、10例慢性乙型肝炎及10例HBsAg携带者均为2001年2月～2003年6月在中国医科大学第二临床医院感染科病房住院患者及感染科门诊就诊患者，年龄18～50岁，其中男19例，女11例。诊断均符合2000年全国病毒性肝炎会议制定的诊断标准，并除外其它肝炎病毒重叠感染。本试验选择的10例急性乙型肝炎患者均为在住院期间出现HBsAg阴转的患者。10例正常人为中心血站健康献血者，年龄20～49岁，其中男6例，女4例。HBV感染者及正常人均抽取7ml外周静脉血，2ml分离血清，置-20℃冰箱中保存待检。5ml血肝素抗凝之后分离PBMC，PBMC用Ficoll Hypaque密度梯度离心方法从肝素化血中分离。收集细胞并用PBS洗两次。然后将细胞加入24孔培养板中，浓度为1×10 6 细胞/孔，加入HBcAg（0.5μg/ml），然后加入RPMI至1ml，在5%CO 2 湿润条件下培养72h，之后取其上清液放-20℃冰箱中保存待检。用ELISA方法检测血清及PBMC培养上清液IL-12水平。血清IL-12水平，高于检测最低值，定为阳性;在检测最低值以下，定为阴性。
2 结果
2.1 慢性乙型肝炎患者血清IL-12阳性率（50%）明显高于正常人（P<0.05），也高于急性乙型肝炎（30%），且两者均高于HBsAg携带者（10%），但血清IL-12阳性率在急性乙型肝炎、慢性乙型肝炎及HBsAg携带者之间无统计学差异（P>0.05）;且在急性乙型肝炎、HBsAg携带者及正常人之间也无统计学差异（P>0.05），见表1。
表1 各组中血清IL-12检测结果
2.2 急性乙型肝炎和慢性乙型肝炎患者PBMC培养上清液IL-12水平显著高于HBsAg携带者（P<0.05），且从平均值来看，急性乙型肝炎患者PBMC培养上清液IL-12平均值>慢性乙型肝炎>正常人>HBsAg携带者（见表2）。
表2 各组PBMC培养上清液IL-12检测结果
注:与HBsAg携带者相比差异具有显著性 ˇ P<0.05
3 讨论
IL-12对非特异性免疫和特异性免疫都发挥重要作用，IL-12架起非特异性免疫与特异性免疫之间的桥梁，是一种前炎症细胞因子。IL-12能强有力地诱导T细胞和自然杀伤细胞产生细胞因子，尤其是IFN-γ;它是未激活的T细胞和NK细胞的生长因子;而且能增强CTL及NK细胞的细胞毒性;最重要的是，IL-12能专一地促进Th1细胞的生成以及对CTL分化起作用。
本实验急性乙型肝炎和慢性乙型肝炎PBMC培养上清液IL-12水平高于HBsAg携带者，考虑到急性乙型肝炎及慢性乙型肝炎均有肝脏炎症活动，HBsAg携带者肝功正常，肝脏无炎症活动或炎症活动轻，故我们认为PBMC培养上清液中的IL-12水平与HBV感染者肝脏炎症活动密切相关。因为IL-12能专一地促进Th1细胞分化并对CTL分化起作用，所以，在急性肝炎及慢性肝炎均有Th1细胞分化及CTL分化，CTL在清除病毒同时造成肝细胞坏死，而引起肝脏炎症活动。HBsAg携带者IL-12含量低，不能诱导或者只出现弱的Th1反应，并且主要存在Th2型细胞反应，从而抑制Th1反应，因此，可能没有CTL细胞分化，从而不产生炎症反应，也不能清除病毒，造成病毒持续感染。
急性乙型肝炎、慢性乙型肝炎及HBsAg携带者PBMC 培养上清液IL-12水平与正常人相比差异均无显著性。但从平均值来看，急性乙型肝炎平均值高于慢性乙型肝炎，且两者的平均值均高于正常人，因此其比较无统计学差异可能与实验例数较少有关，有待进一步研究。正常人因为没有肝脏炎症活动，所以正常人PBMC培养上清液IL-12水平与HBsAg携带者比较差异无显著性。JIW报道慢性乙型肝炎PBMC培养上清液IL-12水平低于正常人，与本实验结果不一致［4］ 。
我们的研究，血清IL-12大多数阴性，少数呈阳性。慢性乙型肝炎血清IL-12阳性率（50%）显著高于正常人（0），可能与慢性乙型肝炎肝脏有炎症活动;而正常人肝脏无炎症活动有关，提示血清IL-12阳性率与肝脏炎症活动有密切关系。慢性乙型肝炎血清IL-12阳性率（50%）高于急性乙型肝炎（30%），且两者均高于HBsAg携带者（10%），但血清IL-12阳性率在急性乙型肝炎、慢性乙型肝炎及HBsAg携带者之间差异无统计学意义（P>0.05）;且在急性乙型肝炎、HBsAg携带者及正常人之间也无统计学差异，可能与实验例数较少有关，有待于进一步研究。Rossol报道 ［3］ 慢性乙型肝炎血清IL-12高于正常人，与本实验结果相一致。
参考文献