多重耐药鲍曼不动杆菌流行的耐药及同源性分析

【摘要】 目的  了解重症监护病房暴发流行的多重耐药鲍曼不动杆菌感染的耐药谱特征及其同源性，为临床防治提供依据。 方法  4株多重耐药鲍曼不动杆菌分离自外科重症监护病房的感染患者，采用E-TEST检测药物的MIC值，肠杆菌科基因组内重复一致序列聚合酶链反应（ERIC-PCR）进行克隆株的DNA分型。 结果  4株菌除对头孢哌酮/舒巴坦复合制剂的MIC值较低外，对头孢菌素类、氨基糖苷类和氟喹喏酮类等抗生素均显示出了较高水平的多重耐药性;DNA分型证实为同一克隆株。 结论  本组鲍曼不动杆菌为多重耐药株，同一克隆株在不同感染个体间的相互传播导致了本次医院内感染的流行。

    关键词  鲍曼不动杆菌 耐药性 医院内感染
    
    Investigation the drug resistance and homology of multresistance-resistant acinetobactor baumannii strains in SICU

    Luo Lan，Nie Xiaoying，Lu Jia，et al.

    The First Affiliated Hospital，Sun Yat-sen university，Guangzhou510080.
   
    【Abstract】 Objective To study the molecular mechanism of the nosocomial outbreak and the drug resis-tance.Methods From August2002to December2002，Multresistance-resistant acinetobacter baumannii strains from4nosocomial inpatients at surgery intensive care unit（SCU）were collected and tested for drug susceptibility and MIC determination.ERIC-PCR was carried out for DNA typing of clonal strains.Results 4multresistance-resis-tant strains are multiresistant to beta-lactams，aminoglycosides，and fluoroquinolones，but sensitive to Cefoperazone-Sulbactam combinations.Chromosomal DNA homologous analysis indicated that they were the identical clonal strains.Conclusion These Multresistance-resistant acinetobacter baumannii isolates are also multiresistance strains.One clonal epidemic strain transmitted among inpatients at SICU caused this nosocomial outbreak.

    Key words Acinetobacter baumannii drug resistance Nosocomial infection

    近年来，多重耐药鲍曼不动杆菌已成为引起的院内感染的重要病原菌，给临床诊治带来困难 ［1，2］ 。2002年8月～2002年12月间，我院重症监护病房相继发生了数起多重耐药鲍曼不动杆菌所致的医院内感染，为了了解多重耐药鲍曼不动杆菌株的耐药特点及医院内感染流行的分子机制，我们从抗菌药物的耐药性和流行株克隆分型方面入手进行了研究，现报道如下。

    1 材料和方法

    1.1 材料 （1）菌株:临床分离株为2002年8月～2002年12月间，我院外科重症监护病房分离的多重耐药鲍曼不动杆菌（ABA）4株，标本编号为ABA-1、ABA-2、ABA-3和ABA-4，分别来源于不同病人的痰标本、创口和腹腔感染灶脓性分泌物。（2）试剂:E-试验条为瑞典AB BIODISK公司产品;菌株基因组DNA提取试剂盒E.Z.N.A Bacterial DNA Kit为美国Omega Bio-Tek公司产品;DNA分子量标准、限制性内切酶、PCR反应试剂、PCR产物凝胶回收试剂盒、pMD18-T载体及DNA Ligation试剂盒购自TaKaRa公司。

    1.2 方法 （1）菌株采用VITEK-32（BioMérieux，法国）全自动微生物分析仪，GNI鉴定卡进行鉴定。（2）药物最低抑菌浓度（MIC）测定:采用E-TEST进行药物敏感性试验及MIC值检测，结果判读按照NCCLS文件M100-S11（2001年版）推荐的标准进行。质控菌株为铜绿假单胞菌ATCC25783。（3）菌株DNA的同源性分析:采用E.Z.N.A Bacterial DNA Kit试剂盒提取细菌染色体DNA，肠杆菌科基因组内重复一致序列聚合酶链反应（ERIC-PCR）进行菌株克隆的DNA分型，引物为ERIC-2:5'-AAGTAAGT-GACTGGGGTGA-GCG-3'。反应体积为50μl，含1×PCR反应缓冲液，3.0mmol/L MgCl 2 ，200mmol/L dNTPs，引物浓度为50pmol/L，Taq DNA聚合酶2.0U，10ng染色体DNA为模板。PCR反应条件为:94℃预变性3min;94℃变性1min，36℃退火1min，72℃延伸2min，共30个循环;最后72℃延伸5min。1.2%琼脂糖电泳进行分析。DNA同源性分析:PCR扩增条带位置完全相同，为同一基因型;主条带位置相同，副带相差1～2条者为基因型相似或密切相关;不满足上述条件者为不同的基因型。

    2 结果

    2.1 耐药谱分析 E-试验检测结果显示，4株多重耐药鲍曼不动杆菌均显示出了对半合成青霉素、第2～4代头孢菌素、氨曲南、头霉素、氯霉素、磺胺甲氧苄啶、利福平、链霉素和阿米卡星的多重耐药性;对3代头孢菌素与酶抑制剂复合制剂的MIC值稍降低，对头孢哌酮/舒巴坦复合制剂显示出了一定的敏感性，呈现出ESBLs表型特征。ABA-3号菌对3～4代头孢菌素的耐药性低于另外3株菌。检测 结果见表1。

    表1 多重耐药鲍曼不动杆菌临床分离株的耐药谱（略）
 
    2.2 菌株DNA的同源性分析 采用ERIC-PCR对4株多重耐药鲍曼不动杆菌进行DNA的同源性分析，结果显示为同一基因型，见图1。提示本研究多重耐药鲍曼不动杆菌医院内感染的流行为同一克隆菌株在不同感染个体之间相互传播的结果。

    图1 多重耐药鲍曼不动杆菌的同源性分析结果

    3 讨论

    随着碳青霉烯类、头孢菌素类以及酶抑制剂复合制剂类抗生素在临床治疗中的广泛应用，这类目前控制革兰阴性菌感染较为有效的抗菌药物的耐药率逐年增加，其临床应用前景正面临着严峻的挑战 ［1～3］ ，给临床抗菌药物的选择带来困难 ［2，3］ 。本研究分析了一组导致医院内感染多重耐药鲍曼不动杆菌的耐药谱，结果显示，除对头孢哌酮/舒巴坦复合制剂具有一定程度的敏感性，对几乎所有半合成青霉素、头孢菌素以及氨曲南、头霉素、氯霉素、磺胺甲氧苄啶、利福平、链霉素和阿米卡星均具有较高水平的抗药性，对其它酶抑制剂复合制剂亦不敏感。本组患者根据药敏检测结果选用头孢哌酮/舒巴坦复合制剂进行抗菌治疗，并配合积极的外科治疗措施，除外科疾病本身所导致的1例死亡，另3例患者的感染得到有效控制。可能是舒巴坦对不动杆菌属细菌有独特的杀菌作用，可作为这部分菌株感染治疗的选择 ［4，5］ 。采用ERIC-PCR对4例患者感染的多重耐药鲍曼不动杆菌进行DNA克隆株的分型，证实为同一基因型。提示多重耐药不动杆菌在我院外科重症监护病房患者间的相互传播是导致本次医院内感染暴发的重要原因，应相应加强医院内感染传播的控制和预防措施。本研究4株菌的DNA分型为同一基因型，且耐药谱特征也较为相似;但耐药水平存在一定程度的差异，可能与该克隆株在不同感染个体所受到的抗生素选择压力的差异有关，使其能自行启动某些抗药机制以适应其生存的环境。

    参考文献

    1 陆坚，唐英春.碳青霉烯酶研究进展.国外医学流行病学传染病学分册，2003，30:14-18.

    2 Bergogne-Berezin E，Towner KJ.Acinetobacter spp.as nosocomial pathogens:microbiological，clinical，and epidemiological features.Clin Microbiol Rev，1996，9:148-165.

    3 Bellais S，Mimoz O，Leotard S，et al.Efficacy of beta-lactams for treating experimentally induced pneumonia due to a multresistance-hy-drolyzing metallo-beta-lactamase-producing strain of Pseudomonas aeruginosa.Antimicrob Agents Chemother，2002，46:2032-2034.

    4 Levin AS，Levy CE，Manrique AE，et al.Severe nosocomial infections with Imipenem resistance Acinetobacter baumannii treated with ampi-cillin/sulbactam Int Antimicrob Agents，2003，21:58-62.

    5 Bou G，Cervero G，DominguezMA，et al.Characterization of a nosoco-mial outbreak caused by a multiresistant Acinetobacter baumannii strain with a carbapenem-hydrolyzing enzyme:high-level carbapenem re-sistance in A.baumannii is not due solely to the presence of beta-lac-tamases.J Clin Microbiol，2000，38:3299-3305. 

    基金项目:广东省医学科学技术研究基金资助（A2001165）
    作者单位:510080中山大学附属第一医院
    510080广州呼吸病研究所