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首页合作平台在线期刊中华实用医药杂志2004年第4卷第15期药物临床

五加双参片对正常小鼠白细胞介素2生成的影响

来源:INTERNET
摘要:【摘要】目的探讨五加双参片对小鼠白细胞介素2生成的影响。方法将小鼠随机分为对照组、五加双参片(4。6ml/次,灌胃,2次/d,两组均连续给药4周后摘除眼球放血,断颈处死小鼠,小鼠脾脏制成悬液,测定白细胞介素2的含量。结果五加双参片组白细胞介素2的含量均高于对照组(P0。...

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  【摘要】 目的 探讨五加双参片对小鼠白细胞介素2生成的影响。方法 将小鼠随机分为对照组、五加双参片(4.5g/kg)组。将五加双参片研碎制成混悬液,治疗组0.6ml/次,灌胃,2次/d;对照组给生理盐水0.6ml/次,灌胃,2次/d,两组均连续给药4周后摘除眼球放血,断颈处死小鼠,小鼠脾脏制成悬液,测定白细胞介素2的含量。结果 五加双参片组白细胞介素2的含量均高于对照组(P<0.01)。结论 五加双参片对白细胞介素2的生成有促进作用。

  关键词 五加双参片 白细胞介素2(IL-2) 3 H-TdR掺入法

  五加双参片为临床应用多年的纯中药制剂,由刺五加、当归、党参、玄参等组成。具有扶正固本、益气补血、健脾补肾、补脑安神、增强体力之功效。主要用于治疗各种原因引起的白细胞和血小板减少症、肿瘤放、化疗的辅助治疗等。研究表明,本品可促进造血干细胞的增殖和向红系与粒系细胞分化。其中,五加双参片能使辐射损伤的脾脏组织结构明显恢复。对环磷酰胺(CY)与 60 Co辐射引起的外周血液白细胞减少有明显升高作用 [1,2] 。本文就五加双参片对小鼠白细胞介素2生成的影响进行研究。

  1 实验材料

  1.1 试剂与药物 五加双参片,由西安中药厂生产,批号:030901。每片相当生药材0.69g。Hank’s液、二甲苯、2,5-二甲苯唑(PPO)、刀豆蛋白A(ConA)、 3 H-胸腺嘧啶核苷(3 H -TdR)均购于宝鸡市化玻站。

  1.2 动物 Balb/c雄性小鼠,由西安医科大学实验动物中心提供,实验动物合格证号:医动字第08-004号。

  1.3 主要仪器 CO 2 培养箱:ThermoForma(美国)SeriesⅡWater Cabinet Jacketed CO 2 Incubator;Olympus倒置显微镜CK40(日本)。

  2 实验方法

  2.1 五加双参片对小鼠白细胞介素2生成的影响 [3] 以3个月龄健康雄性小鼠20只,随机分为生理盐水对照组、五加双参片(4.5g/kg)组,将五加双参片研碎制成混悬液,0.6ml/次,2次/d,连续灌胃给药4周后,摘除眼球放血,断颈处死,用75%酒精浸泡消毒5min。无菌打开腹腔取出脾脏,放入含5%小牛血清1%Hank’s液平皿中,在100目不锈钢网上研磨,以单层尼龙网过滤后获得脾细胞悬液,用5%小牛血清Hank’s液洗2次,100r/min离心10min,作活细胞计数。再次离心后弃去上清液,用RPMI-1640液配成5×10 6 /ml脾细胞悬液,加入ConA,使其最终浓度为5μg/ml,放入细胞培养瓶,置37℃5%CO 2 培养箱中培育24h,取出离心(2500r/min)20min,收上清液,再以0.22μm滤器除菌后置-20℃冰箱内保存,作为样品液。

  2.2 白细胞介素2(IL-2)活性检测(1)小鼠胸腺细胞悬液的制备 取6~8周雄性小鼠,摘眼球放血处死,无菌条件下开胸取出胸腺,用含5%小牛血清的Hank’s清洗,移入含少量5%小牛血清Hank’s液的平皿内,在不锈钢网上研磨胸腺,用单层尼龙网过滤后得胸腺细胞混悬液。悬液用5%小牛血清Hank’s液洗2次,1000r/min离心10min,作活细胞计数液。弃去上清液,用RPMI-1640培养液配制1.0 ×10 7 /ml的胸腺细胞混悬液。(2)细胞培养:将IL-2样品液按1/2、1/4、1/8、1/16、1/32配成5个稀释度,分别放入96孔平底培养板中,每孔100μl,每个稀释度作3个平行孔。每孔中加入胸腺细胞悬液100μl及30μg/ml ConA液20μl。同时设相应浓度的ConA对照及培养液对照。将培养板置于37℃5%CO 2 培养箱中孵育72h。于66h时每孔加入 3 H-TdR20μl,继续培养6h。用多吸头细胞样品收集器将细胞收集于玻璃纤维滤纸片上,用冷蒸馏水淋洗后,80℃烘干,置于测量瓶中,加入5ml闪烁液,用液体闪烁计数仪测定每分钟冲数(cpm)。

  3 结果

  五加双参片可明显诱导小鼠胸腺细胞增殖,与相应对照组比较有显著差异(P<0.01),说明五加双参片可明显促进小鼠脾脏淋巴细胞IL-2的生成。结果见表1。

  表1 五加双参片对正常小鼠白细胞介素-2的影响

  4 讨论

  五加双参片为中医验方,实验研究表明,该药对机体免疫功能特别是T细胞功能有明显的促进作用。T细胞功能增强可表现在许多方面,其中白细胞介素2(IL-2)的生成增加是其重要标志之一,IL-2是参与免疫应答和免疫调节的重要细胞因子。IL-2在致有丝分裂原存在的条件下,可作用于小鼠的胸腺细胞,诱导胸腺细胞的增殖,因此,可根据胸腺细胞增殖过程中 3 H-TdR掺入量来反映IL-2的活性。

  参考文献

  1 林昱,李新田,等.五加双参片对环磷酰胺损害动物造血机能的保护作用.中华医药学杂志,2003,2(8):81.

  2 李新田,林昱,等.五加双参片对辐射损伤动物机体造血功能的影响.中华医药杂志,2003,3(11):988.

  3 陈奇.中药药理研究方法学,北京:人民卫生出版社,1993,774.

  作者单位:721004陕西宝鸡解放军第三医院

作者: 林 昱 李新田 朱学莉等 2005-8-2
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