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首页合作平台在线期刊中华实用医药杂志2004年第4卷第16期论著

天然药物影响粘性放线菌在唾液获得性膜粘附的研究

来源:INTERNET
摘要:【摘要】目的研究大黄、槟榔、白芷、川芎、三七和儿茶6种天然药物对粘性放线菌(以下简称粘放)在唾液获得性膜粘附的影响,为今后筛选出能有效抗龋的药物奠定基础。方法采用唾液包被的羟磷灰石(S-HA)形成实验性膜的体外模式,用天然药物分别处理S-HA和粘放,观察粘放在S-HA粘附的情况。结果6种天然药物粗提物对粘放......

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    【摘要】 目的 研究大黄、槟榔、白芷、川芎、三七和儿茶6种天然药物对粘性放线菌(以下简称粘放)在唾液获得性膜粘附的影响,为今后筛选出能有效抗龋的药物奠定基础。方法 采用唾液包被的羟磷灰石(S-HA)形成实验性膜的体外模式,用天然药物分别处理S-HA和粘放,观察粘放在S-HA粘附的情况。结果 6种天然药物粗提物对粘放在S-HA的粘附有不同程度是抑制能力,4.0mg/ml的各粗提物溶液都能显著减少粘放的粘附量。其中,以白芷和大黄的抑制作用较强。结论 大黄、槟榔、白芷、川芎、三七和儿茶对粘放在唾液获得性膜的粘附都有一定的抑制作用。

  Xiao Yue,Liu Tianjia,Huang Zhengwei,et al.
   
  The Second People’s Hospital of Shenzhen,Guangdong,Shenzhen,518035.
   
  【Abstract】 Objective To investigate the effects of6kinds of natural medicine such as Radix et Rhizoma Rhei on the adherence of actinomyces viscosus to salivary acquired pellicle,in order to screen effective natural medicines to prevent caries.Methods In-vitro model of experimental pellicle was saliva-coated hydroxyapatites(S-HA).Actinomyces viscosus and S-HA were treated by natural medicines respectively,and then the adherence of bacteria was tested.Results Extract s
olution of all the natural medicine,the concentration of which was4.0mg/ml could decrease the attachment of actinomyces viscosus to S-HA and Radix Angelicae Pubescentis and Radix et Rhiˉzoma Rhei were the most effective ones.Conclusion Radix et Rhizoma Rhei,Semen Arecae,Rhizoma Chuanxiong,Radix Angelicae Pubescentis,Radix Notoginseng and Catechu could inhibit the adherence of Actinomyces viscosus to salivary acquired pellicle effectively.
   
  Key words natural medicine actinomyces viscosus salivary acquired pellicle adherence  

  近年来国内外许多学者致力于龋病药物治疗学方面的研究,从天然药物中分离天然抗菌斑成分,观察它们对致龋菌的影响,但这些研究多是着重于对细菌生长、产酸及产胞外多糖的影响,而对细菌在牙面粘附的影响方面研究较少。由于粘性放线菌(Actinomyces viscosus)是口腔主要的致龋菌之一,对牙面有很强的粘附能力,因此本实验选用了大黄、槟榔、白芷、川芎、三七和儿茶6种天然药物,研究它们对粘放在唾液获得性膜粘附的影响。

  1 材料与方法
   
  1.1 实验菌株及试剂 粘性放线菌(A.viscosus)标准株ATCC19246,由四川大学华西口腔医学院口腔生物工程重点实验室提供。
   
  球形羟磷灰石微珠(英国普尔化学制品有限公司),同位素 3 H-胸腺嘧啶核苷( 3 H-TdR,中国科学院上海核技术开发公司),闪烁液(四川大学同位素室),牛血清白蛋白(BSA,Sigma分装)。
   
  1.2 天然药物的粗提 各药物粗提物由四川大学药学院天然药化教研室制备,其中大黄、槟榔、白芷、三七和川芎以 80%乙醇回流提取3h后,过滤减压浓缩而得浸膏状提取物。儿茶以丙酮浸渍30h后,过滤并减压浓缩而得浸膏状提取物。
   
  1.3 试剂配制 取各粗提物适量,溶于KCl缓冲液中,配成浓度分别为0.5、1.0、2.0、4.0mg/ml的溶液备用。在40孔酶标板中,每孔加入羟磷灰石4.0mg,以200μl KCl缓冲液浸泡过夜备用。由一健康成人,进食2h后,清水漱口,不加任何刺激物收集唾液,置于离心管中,10000r/min,4℃离心10min,取上清液备用 [1]  。
   
  1.4 菌液的准备 将复苏48h的粘放ATCC19246接种于4ml含370kBq/ml 3 H-TdR的TPY培养基中,80%N 2 ,20%CO 2 ,37℃厌氧培养1h。涂片检查为纯培养后将菌液转入离心管,室温下2500r/min离心15min,收集细菌。用KCl缓冲液洗菌2次,悬浮于含5mg/ml牛血清蛋白(BSA)的KCl缓冲液中 [1]  。调整菌液浓度为A 540nm  =0.20 [2]  。
   
  1.5 天然药物粗提物处理S-HA的粘附抑制实验 [1]   每种粗提物的粘附抑制实验均分为6组,即阳性对照、阴性对照及药物粗提物溶液浓度分别为0.5、1.0、2.0、4.0mg/ml的实验组,都采用双管法。实验步骤见图1。
   
  1.6 天然药物粗提物处理的粘放对S-HA的粘附 实验分组同上,实验步骤见图2。

  2 结果

    2.1 粘放对天然药物粗提物处理的S-HA的粘附

  各粗提物处理S-HA对粘放粘附的影响结果见表1。粘附相对百分比的计算公式为: 粘附相对百分比= 实验组cpm-阴性对照组cpm  阳性对照组cpm-阴性对照组cpm ×100%  当实验组cpm小于对照组cpm时,令粘附相对百分比为0 [1]  。
   
  图1图2表1 粘放在经天然药物粗提物处理的S-HA的粘附相对百分比(%)(略)
  
  注:ˇ表示P<0.05,其余为P>0.05。
     
  表1显示,各粗提物处理S-HA对粘放的粘附均有一定影响。经0.5~4.0mg/ml的大黄和白芷粗提物溶液、2.0~4.0mg/ml的槟榔和儿茶粗提物溶液以及4.0mg/ml的川芎和三七粗提物溶液处理的S-HA表面,粘放粘附量明显减少,说明该浓度范围的药物粗提物对粘放在S-HA 的粘附有显著抑制作用(P<0.05),且抑制作用随药物浓度 的升高而增大。而0.5~2.0mg/ml的川芎和三七粗提物溶液以及0.5~1.0mg/ml的槟榔和儿茶粗提物溶液处理S-HA表面后,粘放的粘附量无明显改变(P>0.05)。

  2.2 天然药物粗提物处理的粘放对S-HA的粘附
   
  各粗提物处理粘放对其在S-HA粘附的影响结果见表2。
   
  表2 经天然药物粗提物处理的粘放在S-HA的粘附相对百分比(%)(略)
   
  注:ˇ表示P<0.05,其余为P>0.05。
     
  表2显示,各粗提物处理粘放对其在S-HA的粘附均有一定影响。粘放经0.5~4.0mg/ml的白芷、川芎和三七粗提物溶液、1.0~4.0mg/ml的大黄和儿茶粗提物溶液以及4.0mg/ml的槟榔粗提物溶液处理后,在S-HA表面的粘附量明显减少,说明该浓度范围的槟榔、儿茶、大黄、川芎和三七粗提物对粘放在S-HA的粘附有显著抑制作用(P<0.05),且抑制作用随药物浓度的升高而增大。而0.5~2.0mg/ml的槟榔粗提物溶液以及0.5mg/ml的大黄和儿茶粗提物溶液对粘放的粘附量无明显改变(P>0.05)。3 讨论根据药典记载,大黄、川芎等多种天然药物都具有较强的抗龋作用。也有研究初步证明,大黄、槟榔和川芎等能抑制口腔致龋菌的生长和产酸,还能抑制葡萄糖基转移酶的活性,减少水不溶性葡聚糖的合成 [3,4]  。因此,本实验选择了大黄、槟榔、白芷、川芎、三七和儿茶6种天然药物,研究其对变形链球菌在唾液获得性膜粘附的影响,为今后筛选出能有效抗龋的药物奠定基础。
   
  致龋菌对牙面的蔗糖非依赖性粘附,实际上是细菌表面的粘结素与获得性膜中受体成分的特异性结合。已有实验证明,唾液中的富脯蛋白和淀粉酶可促进粘性放线菌中某些菌株的粘附。Clark等 [5]  发现I型菌毛可能是粘性放线菌的粘结素之一。
   
  一些研究探讨了茶多酚类物质对细菌粘附的影响。Oˉtake等 [6]  从日本绿茶中提取多酚类物质Sunphenon,分别处理变形链球菌和S-HA,结果显示变形链球菌在S-HA表面的粘附均有明显减少,说明Sunphenon对变形链球菌在S -HA表面粘附有显著的抑制作用。肖悦等 [7]  在体外用茶多酚分别处理S-HA和细菌,结果发现,变链及粘放对S-HA的粘附受到明显抑制。这些实验结果都说明,茶多酚可分别作用于细菌表面的粘结素和获得性膜中的受体成分,减少细菌对S-HA的粘附。本研究结果表明,所选的6种天然药物分别处理S-HA和粘放,都能显著抑制粘放对S-HA的粘附。因此,大黄、槟榔、川芎、三七和儿茶有可能通过抑制粘放的粘附而产生有效的抗龋作用。

  参考文献
    
  1 詹玲,刘天佳,岳松龄,等.变形链球菌对唾液获得性膜粘附机理的研究I.变形链球菌表面粘结素粗提方法的比较.华西口腔医学杂志,1998,16(1):73-74.
   
  2 赵丽娟,刘天佳,岳松龄.粘性放线菌对牙面粘附机理的研究IV.粘性放线菌唾液蛋白受体的研究.华西口腔医学杂志,1997;15(1):58-60.
   
  3 肖悦,刘天佳,黄正蔚,等.天然药物对粘性放线菌生长和产酸影响的体外研究.华西医科大学学报,2002,33(2):253-256.

  4 肖悦,刘天佳,黄正蔚,等.中药大黄对口腔致龋菌影响的体外实验研究.华西药学杂志,2002,17(1):23-25.
   
  5 Clark WB,Wheeler TT,Cisar JO.Specific inhibition of adsorption of Actinomyces viscosus T14V to saliva-treated hydroxyapatite by antiˉbody against type1fimbriae.Infect Immun,1984,43(2):497-501.

  6 Otake S,Makimura M,Kuroki T.Anticaries effect of polyphenolic comˉpounds from Japanese green tea.Caries Res,1991,25(6):438-443.

  7 肖悦,刘天佳,詹玲,等.茶多酚影响致龋菌在唾液获得性膜粘附的研究.华西口腔医学杂志,2000,18(5):336-339.    

  ˇ 基金项目:本课题为联合利华公司英国研究中心资助项目

  作者单位:518035广东省深圳市第二人民医院口腔科
         610041四川大学华西口腔医学院

作者: 肖悦 刘天佳 黄正蔚等 2005-8-3
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