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Cao Xiaofang，Fan Shuyan，Liu Shuping，et al.
School of Pharmacy，Hebei Medical University，Shijiazhuang050017.
【Abstract】 Objective To select the optimum extracting procedure for total flavone from Flos Puerariae.Methods The optimum extracting procedure was selected with the content of total flavone from Flos Puerariae by orˉthogonal test design.Results The optimum extracting procedure was determined with40times of50%ethanol exˉtracting1.5h at80℃.Conclusion The optimum extracting procedure can extract the total flavone in Flos Puerariae effectively with a good reproducibility.
Key words flos puerariae flavone orthogonal test
葛花也称条花，为豆科植物葛（Puerariae）的干燥花，始载于《名医别录》，是历代医家常用的解酒方药，现代药理学研究发现，葛花的主要成分是黄酮类，对脂肪肝、糖尿病以及增强脑及冠脉血管血流量并改善脑循环 ［1～3］ 等方面有作用。到目前为止，未见报道葛花的提取方法，本文通过正交设计考察了葛花中黄酮类成分的提取条件，并对其进行了含量测定，为更好地开发和利用葛花这一资源提供了参考。
1 材料及仪器
葛花购于河北省药材公司，经河北医科大学生药教研室聂凤老师鉴定，符合《中国人民共和国药典》规定，为豆科植物葛的干燥花。芦丁对照品购自中国药品生物制品检定所，所用试剂均为分析纯。
TG328A电光分析天平（上海天平仪器厂）;TDA-8002型电热恒温水浴槽（余姚市东方电工仪器厂）;UV-2201紫外可见分光光度计（日本岛津）;254nm紫外分析仪（上海科艺光学仪器厂）。
2 方法与结果
2.1 总黄酮含量测定方法 ［4］
2.1.1 标准溶液的配制 精密称取120℃真空干燥至恒重的芦丁对照品50mg，置于25ml量瓶中，用70%乙醇溶解并定容;再精密吸取10ml，置于100ml量瓶中，用水定容，备用。
2.1.2 测定波长的选择 精密量取标准液2ml置于25ml量瓶中，依次加入pH4.5的醋酸-醋酸钠缓冲液5ml，2.5%的三氯化铝溶液3ml，用70%的乙醇定容，在350～500nm间扫图，在405nm处有最大吸收度，故选定405nm为测定波长。
2.1.3 标准曲线的绘制 精密吸取上述标准溶液0.5、1、2、2.5、3ml至25ml量瓶中，加pH4.5的醋酸—醋酸钠缓冲液5ml，2.5%三氯化铝溶液3ml，用70%的乙醇定容，摇匀，在405nm波长处测定吸收度，得标准曲线回归方程为:A=0.0244×C-0.0006（r=0.9996），线性范围为3.0～32.0μg/ml。
2.1.4 总黄酮含量测定 精密称取葛花粉末（过60目筛）1g，石油醚回流提取1h，滤过，药渣以表6中提取条件回流提取，滤过，滤液按2.1.3项下方法测定，并计算总黄酮的含量。
2.1.5 精密度试验 精密称取葛花适量，按2.1.4项下操作，平行测定5次，结果见表1。
表1 精密度试验 （略）
2.1.6 重现性试验 精密称取葛花适量，5份，按2.1.4项下方法操作，每份测定3次，结果见表2。
表2 重现性试验 （略）
2.1.7 稳定性试验 精密称取葛花适量，按2.1.4项下方法操作，测定其在1h内的吸光度值，结果表明样品液在1h内稳定，结果见表3。
表3 稳定性试验 （略）
2.1.8 回收率试验 精密量取已知含量的样品适量，加入一定量的芦丁对照品溶液，按2.1.4项下方法操作，计算其回收率，结果见表4。
表4 回收率试验 （略）
2.2 提取溶剂的选择
2.2.1 贮备液的制备 精密称取葛花适量，分别用水、乙醇、甲醇为溶剂，以1:40固液比充分浸润，称定重量，于沸点回流3h，放冷，补足重量，备用。
2.2.2 薄层鉴别 将上述三种贮备液各10μl点于GF 254 薄层板上，以氯仿-甲醇-水（5:2:0.1）为展开剂展开，自然晾干，置紫外灯（λ=254nm）下观察，水提液的斑点荧光较弱，甲醇提取液和乙醇提取液几无差别，以此粗略判断醇提液提取效率较高。考虑到经济、安全性，初步确定以乙醇为提取溶剂。
2.2.3 紫外鉴别 将上述三种贮备液在190～500nm内扫描，结果显示醇提液相应各峰的吸收度均比水提液高，甲醇提取液和乙醇提取液几无差别，因此选择乙醇为提取溶剂。
2.3 正交试验设计 由经验得知影响黄酮提取的因素主要是醇的浓度、溶剂的用量以及提取时间，因此我们选用以上三个因素进行考察，每个因素设立三个水平（表5），采用L 9 （3 4 ）正交设计，在80℃进行试验，以提取液中葛花总黄酮的含量为指标，优选葛花总黄酮的提取方法，试验安排见表6，对表6进行方差分析，结果见表7。
2.4 结果分析 从表6中R值的大小可以看出，各因素对试验结果的影响顺序为A>B>C。A因素、B因素与C因素对指标无显著性影响（P>0.05）。优选出的最佳提取条件为A 1 B 3 C 3 ，即50%乙醇40ml，在80℃提取1.5h。
表5 因素与水平（略）
表6 试验设计及结果（略）
表7 方差分析（略）
2.5 验证试验 按照正交试验优选出的最佳提取方法制备3批样品，测定产品总黄酮含量分别为:A 1 =1.12%（n=5），A 2 =1.14%（n=5），A 3 =1.10%（n=5）。
3 讨论
通过正交试验方法确定试验条件，可以减少试验次数，节省溶剂、材料，科学有效地优选出葛花中黄酮类成分的最佳提取条件，即50%乙醇40ml，80℃浸取1.5h，为提取葛花中有效部位提供了一个科学、可靠的方法。
参考文献
1 庞涛，刘素英，宋在鑫.复方葛蓟饮解酒作用的基础研究及临床观察.蚌埠医学院学报，1997，22（6）:417-417.
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作者单位:050017河北医科大学药学院分析化学教研室（△通讯作者）