高效液相色谱法测定麦冬和红参中糖的含量

   【摘要】 目的 采用高效液相色谱法测定麦冬、红参中糖的含量。方法 常用ZorbaxNH2柱（4.6mm×250mm，5μm）为色谱柱，乙晴-水（70∶30）为流动液，流速1.0ml/min，柱温30℃的色谱条件进行分析。结果 平均加样回收率为99.81%RSD=3.29%，符合分析要求。重复性实验的RSD分别为:D-Fru1.10%，D-Glu0.65%。结论 采用HPLC法测定葡萄糖、果糖含量，是一个灵敏、准确、快速的测定方法，可以评价麦冬、红参及其制剂的质量，指导工艺研究，控制药品质量。

 　　关键词 葡萄糖 果糖 麦冬 红参 HPLC

 　　红参、麦冬是参麦冻干粉针的两味主药，其主要成分是皂甙类占5.0%～7.0%，糖类占70%～80%，是质量控制的重要指标。红参、麦冬的多糖具有增强免疫功能等活性，单糖既是红参、麦冬的活性成分之一，又与皂甙、多糖的组成有关，这两味药所含重要单糖有:葡萄糖、果糖、麦芽糖、半乳糖等 ［1］ ，其中葡萄糖、果糖是红参、麦冬及参麦冻干粉针中均含有的两种主要单糖，因此，采用HPLC法测定葡萄糖、果糖含量，准确、快速、重现性好，是质量标准研究的主要检测项目，可以指导工艺研究，控制药品质量。

 　　1 仪器与试药

 　　美国惠普HP1100高效液相色谱仪;G2170AAPC化学工作站;G1362A示差折光检测器（RID）;As5150A超声波清洗 器（天津奥特赛恩斯公司）;AZ-200型电子天平（天津、METTLER）;对照品:D-果糖（D-Fructose）、D-葡萄糖（D-Glucose anhydrous）由中国药品生物制品检定所提供。药材:红参（吉林长白山）、麦冬（四川绵阳）;供试品:麦冬水溶液，红参总皂甙均为本室制备;甲醇、乙晴均为色谱纯，水为二次重蒸水。

 　　2 方法与结果

 　　2.1 色谱条件 色谱柱:Zorbax NH2柱（4.6mm×250mm，5μm）;流动相:乙晴-水（70∶30）;流速:1.0ml/min;柱温:30℃，进样量:20μl。外标法。保留时间:D-Fru为7.73min，D-Glu为8.74min。对照品、样品、阴性样品色谱图见图1。图1 红参、麦冬HPLC色谱图注:a.对照品 b.麦冬样品 c.红参样品 d.阴性样品 1.果糖D-Fru 2.葡萄糖D-Glu 2.1.1 对照品溶液:精密称定D-果糖4.0mg，D-葡萄糖6.7mg，用乙晴-水（80∶20）溶解，定容于5ml容量瓶中，配成浓度为0.80μg/μl的D-Fru和1.34μg/μl的D-Glu对照品液。

 　　2.1.2 供试品溶液 ①麦冬:取麦冬水溶液（1∶1）1.0ml，加于D101大孔树脂柱中（Φ0.5×10cm），用蒸馏水洗脱，收集洗脱液100ml，水浴上浓缩、定容至50ml，临床用前用0.4μm滤膜过滤。②红参:称取红参总皂甙提取物41.90mg，用适量蒸馏水溶解，加于D101大孔树脂柱中（Φ0.5×10cm），用蒸馏水洗脱，收集洗脱液50ml，置水浴上浓缩定容至10ml。滤过。

 　　2.2 测定方法 精密吸取上述供试品溶液各20μl，注入高效液相色谱仪，量取峰面积，以外标法计算样品含量。

 　　2.3 标准曲线制备 精密吸取对照品溶液4，6，8，10，12，14μl，注入高效液相色谱仪中，每个点重复进样3针，按上述色谱条件测定峰面积，取平均值。以峰面积为纵坐标，浓度C（μg/μl）为横坐标，绘制标准曲线，回归统计，结果如下。D-果糖的线性回归方程为:Y=9.4760×10 3 X-8.5622×10 3 ;相关系数γ=0.9992D-Fru在3.20～11.20μg范围内呈线性关系。D-葡萄糖的线性回归方程为:Y=8.7538×10 3 X-1.2603×10 3 ;相关系数γ=0.9997D-Glu在5.36～18.76μg范围内，呈线性关系。其中: X为对照品的浓度，Y为对照品的峰面积。

 　　2.4 稳定性考察 取供试品溶液分别为0，2，4，6，8h进样，测得峰面积的RSD为0.63%，表明样品溶液在8h内稳定。

 　　2.5 精密度实验 取供试样品溶液20μl，注入色谱仪，连续进样5次，测得D-Fru和D-Glu的峰面积的RSD分别为0.76%和0.40%，表明进样精密度良好。

 　　2.6 重现性实验 取5份红参总皂甙提取物样品，按“2.1.2”项下方法制备供试品，各取20μl进样，测含量。D-Fru和D-Glu含量的RSD分别为1.10%和0.65%，表明重现性好。

 　　2.7 加样回收率实验 取已知含量的麦冬水溶液样品5 份，分别加入一定量的葡萄糖对照品，再分别加入D101大孔树脂中（Φ0.5×10cm），用蒸馏水洗脱，收集洗脱液100ml，置水浴上浓缩，定容至50ml。临用前用针筒式滤膜滤过，取20μl进样，测含量。见表1。表1 加样回收率实验结果样品(略）?

 　　2.8 样品含量测定结果 按“2.1.2”项下方法制备供试品，取20μl进样，测定结果见表2、表3。表2 红参总皂甙提取物中糖的含量 （略）

 　　3 讨论

 　　3.1 红参总皂甙总提取物、麦冬水溶液为配制参麦冻干粉针的中间体，其糖的含量对成品的成型及质量有重要影响，因此需要检测。

 　　3.2 糖类在紫外光区基本无吸收，无法用紫外检测器检测，而在示差中有较强吸收，因此选用示差折光检测仪。色谱柱经C18柱与NH2柱比较，NH2柱分离效果好，选用 ［2，3］ 。

 　　3.3 样品前处理采用醋酸铅沉淀和大孔树脂分离两种方法，经实验比较，发现醋酸铅处理后，杂质不易除净，杂质峰较多，干扰大，而大孔树脂分离方法，净化效果好，杂质峰几乎无，故选用大孔树脂分离作前处理方法。

 　　3.4 从测定结果可看出，红参总皂甙中Glu与Fru相差不多，而在麦冬中Fru是Glu的10倍量。

 　　3.5 采用高效液相色谱测定红参、麦冬中糖的含量，回收率、线性、精密度均符合分析要求，方法准确、简便、快速、重现性好。

 　　参考文献

 　　1 苗明三，李振国.现代实用中药控制技术，北京:人民卫生出版社，2000，482.

 　　2 王桂有.含丹参葡萄糖注射液中葡萄糖含量测定方法研究.现代中药研究与实践，2003，17（5）:44.

 　　3 崔秀明.三七糖类成分的含量及其量化.现代中药研究与实践，2003，增刊，21.