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【摘要】 目的 建立一种敏感、快速临床检测免疫球蛋白重链基因重排的方法，用于多发性骨髓瘤的临床诊断及愈后监测。方法 采用多聚酶链反应（PCR）技术，选择免疫球蛋白重链（IgH）基因重排，对18例均经临床，实验室、骨髓细胞形态学和组织化学分型诊断的多发性骨髓瘤患者，分别在初诊、化疗缓解期进行监测。结果 18例初诊患者IgH阳性12例（阳性率66%），其中IgG型阳性8例（66%），IgM型阳性3例（25%），IgA型阳性1例（8%）。12例阳性患者化疗1年IgH阳性3例，阳性率25%。结论 多发性骨髓瘤是单一浆细胞株异常增生的一种恶性肿瘤 ［1］ 。近年经免疫学及分子生物学研究表明，瘤细胞起源于早期前B细胞的恶变，其表Ig及Ig重链（IgH）基因的重排与瘤细胞相同 ［2］ 。所以IgH作为骨髓瘤的检测标记用于预后监测有一定的临床意义。
关键词 基因重排 骨髓瘤 PCR
采用多聚酶链反应（PCR）技术，选择免疫球蛋白重链（IgH）基因重排，对18例多发性骨髓瘤患者，分别在初诊、化疗缓解期进行监测。目的建立一种敏感、快速诊断与监测骨髓瘤检测方法，提高患者的生存期。
1 材料与方法
1.1 标本来源 18例患者均来自本院门诊及住院病人。年龄38～73岁，其中男10例，女8例。所有患者均经临床，实验室、骨髓细胞形态学和组织化学分型诊断。每位患者抽取骨髓1ml或固定的骨髓涂片2张进行基因重排的检测。
1.2 骨髓液或骨髓涂片的DNA提取 ［3］ 用Ficoll细胞分离液分离出单个核细胞（或TE洗脱骨髓涂片上的细胞液，洗3次，取沉淀）加入核裂解缓冲液裂解，饱和NaCl沉淀，提取DNA，TE溶解紫外分光光度计测出DNA含量，用聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定效果。引物由上海生物工程技术服务有限公司合成，IgH序列为:5′-ACACGGCCGTGTATTACTGT-3′，5′-GTGACCAGAGTACCTTGGCCCCAG-3′，扩增产物110bp。阳性模板选择经酶切确定的IgH，确定bp片段用标准分子量做聚丙烯酰胺凝胶电泳。
1.3 PCR方法 25μl反应缓冲液中含模板DNA0.5μg，10mmol/L trisHCl（pH8.0），50mmol/L KCl，1.5mmol/L MgCl 2 ，2mmol/L d
NTP，引物各30pmol/L，95℃变性5min，加入TaqDˉNA聚合酶1.5U，覆盖石蜡油20μL，于美国PE公司480型扩增仪中，按93℃60s，55℃60s，72℃60s，30个循环，72℃延伸5min。取扩增产物10μl，2.5%琼脂糖凝胶电泳，EB染色，紫外灯下观察结果。扩增产物与模板平行者为阳性标本。
2 结果
2.1 18例初诊患者，IgH阳性12例（66%），其中IgG型阳性8例（66%），IgM型阳性3例（25%），IgA型阳性1例（8%）。12例阳性患者化疗1年后有3例存在IgH，9例化疗1年达完全缓解。有1例持续缓解已达7年。
2.2 一般实验室结果 18例中RBC出现缗钱状排列16例，ESR均>60mm/h，18例均进行骨髓穿刺涂片检查，瘤细胞在13%～45%范围，形态异常。有5例伴肾功能损害;尿本周氏蛋白阳性4例;血清蛋白电泳出现M带者6例;其中IgG型10例、IgM型5例，IgA型3例。有骨质破坏者15例。
3 讨论
多发性骨髓瘤是单一浆细胞株异常增生的一种恶性肿瘤。我国发病率占血液系统的10% ［2］ 。以往根据细胞形态及分泌Ig的特点，认为瘤细胞源于浆细胞的恶变，近年来，经免疫学及分子生物学研究表明，瘤细胞起源于早期前B细胞的恶变。其根据是多发性骨髓瘤患者除有瘤细胞外，尚有单克隆性B淋巴细胞，后者表面Ig及Ig重链（IgH）基因的重排与瘤细胞相同 ［2］ 。本研究检测18例，IgH阳性12例;有6例阴性患者可能是瘤细胞含量较少而影响结果。PCR方法敏感、简便、实用、易于推广。所需标本量较少，易获取，特别是骨髓涂片染色的标本易保存、送检，所以 适用于基层单位标本送检。骨髓瘤的诊断除骨髓象及一般 的实验室检查外，IgH基因重排的检测，可用于多发性骨髓瘤的诊断和预后监测，指导临床治疗，提高缓解率。
参考文献
1 谭齐肾.临床血液学和血液检验，第3版，北京:人民卫生出版社，2003，237.
2 王淑娟，朱立华.多发性骨髓瘤及其实验室诊断.中华检验医学杂志，2004，27（4）:255.
3 陈晓丹.急性非淋巴细胞白血病IgH、TCRr基因重排的检测.海南医学，1998，2:76.
（收稿日期:2004-05-24） （编辑清 泉）
作者单位:570102海南医学院附属医院检验科