点击显示 收起
【摘要】 目的 简化黄芩苷提取纯化工艺，建立胃肠康颗粒剂中黄芩苷的含量测定方法。方法 通过超声提取酸沉、调节水溶液碱酸度除杂、甲醇超声助溶重结晶纯化工艺，获得黄芩苷对照品;并通过薄层层析、紫外光谱、红外光谱对其定性，HPLC法定量:色谱柱为Symmetry十八烷基键合硅胶柱，4.6mm×75mm，HPLC Column（Waters公司）;甲醇-水-磷酸（47:53:0.2）作流动相，检测波长278nm。结果 得到的黄芩苷对照品理化性质与标准品一致，含量达99.25%，得率4.12%。在0.058～0.58μg范围，样品含量与色谱峰面积线性关系良好（r=0.9950），加样回收率为98.80%～102.80%。结论 含量测定方法简便、快速，可用于胃肠康颗粒剂和相关中药颗粒剂产品中黄芩苷的含量测定。超声提取工艺简单，在中药活性成分提取方面有良好的应用前景。
关键词 黄芩苷 制备 胃肠康颗粒 HPLC法 含量测定
Preparation of baicalin and content determination in weichangkang granula by HPLC
Li Qinglu，He Haibin，Cai Biqiong，et al.
College of Life Science，Fujian Agriculture and Forestry University，Fujian350002.
【Abstract】 Objective To simplify the process of extraction and purification for baicalin in traditional Chinese medicine，and establish a determination method of the content of baicalin in weichangkang granula.Methods The baicalin was extracted from the powder of scutellaria baicalensis georgi in ethanol with ultrasonic，precipitated in acid，the precipitation was dissolved in water and precipitated by adjusting pH，the deposid was dissolved with ultrasonic and recrystallized in methanol，then qualitative analysis by TLC，UV，IR，quantitative analysis by HPLC:Symmetry C 18 ，3.5μm，4.6mm×75mm column;Mobile phase:CH 3 OHl-H 2 O-H 3 PO 4（47:53:0.2）;Flow rate:1ml·min -1 .Detectionwavelength:278nm.Results The physical chemistry characters of baicalin contrast sample were consistent with the baicalin standard sample.The rate of product of baicalin was4.12%，higher than the reference;The content of baicali was99.25%.The baicalin was determined，the standard curve was linear within the range of0.058～0.58μg（r=0.9980）.The recoveries were within98.80%～102.80%.Conclusion The determination method of content by HPLC is simple，quick，accurate and suitalbe for quantitative determination of baicalin in weichangkang granula and other reˉlated products.The extraction process with ultrasonic is easier and faster，has a potential application to the extraction of active components from traditional Chinese medicine.
Key words baicalin preparation weichangkang granula HPLC content determination
黄芩苷（Baicalin）是中药黄芩（Scutellaria baicalensis Georgi）中具有杀菌抗病毒作用的主要成分［1］，是黄芩素G位羟基与葡萄糖醛酸结合而成的苷［2］，具有很高的药用价值［3，4］。黄芩苷的提取方法已有不少报道［5～9］，但工艺都很繁琐，得率低，制取标准品就更为困难、因而黄芩苷标准品且价格昂贵，生产应用上要将其作为对照品进行质量控制就受到很大的限制。笔者试图寻找一种操作简单、得率高、纯度高的提取黄芩苷新工艺，以期能批量生产黄芩苷对照品。胃肠康颗粒的前身是中药散剂，由黄芩、黄柏、秦皮等药材组成，主要成分为黄芩苷和盐酸小檗碱，对细菌、病毒单独或混合感染产生的急、慢性肠炎等有效，主要用于水产养殖中鱼类肠溃疡、消化不良、胃肠不适或各种肠炎。该制 ˇ 剂是将多种中药原料，经粉碎过筛后直接混合而成，由于原料取材不一，有效成分含量不确定，影响疗效。此外，由于鱼类肠道细而短，药物在体内停留时间短，直接影响有效成分的吸收。因此，中药散剂用于鱼病的治疗效果欠佳。所以将其主要成分提取出来，并加入适当的赋形剂，制成颗粒剂，可大大提高其疗效，但由于各种药材的产地、品种、提取工艺等不同，直接影响样品质量，所以建立行之有效的监测方法，对生产工艺的确定和样品质量的控制具有重要指导意义。HPLC法测定黄芩苷含量已有不少报道［10～15］，但由于不同的中药制剂，成为差异很大，对其主成分的测定方法也差异较大，笔者在前人工作的基础上，对HPLC法测定复方中成药中黄芩苷含量进行了进一步探索，并用于测定复方纯中药制剂—胃肠康颗粒中黄芩苷的含量，效果良好，可作为胃肠康颗粒剂产品质量控制的检测方法。
1 仪器与试剂
1.1 仪器 Waters高效液相色谱仪:Waters1525二元泵;Waters2487紫外检测器;色谱柱:Symmetry十八烷基键合硅胶柱，4.6mm×75mm，HPLC Column（Waters公司）;IR谱用AˉVATA R360傅里叶红外光谱仪（NicoLet），波长范围400～4600cm -1 ，KBr压片;7051型紫外分光光度计，波长范围52632～11111cm -1 （上海天美科学仪器有限司）;BS201S电子天平（北京塞多利斯天平有限公司）;ShLOA快速水分测定仪（上海第二天平仪器厂）;数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）;三用紫外分析仪（2F-I型）;X4型显微熔点测定仪（北京光电设备厂，温度未校正）。
1.2 试剂 乙醇，甲醇，甲酸，磷酸等均为分析纯试剂;薄层层析硅胶G（中国青岛海洋化工集团公司）;甲醇（色谱纯）;黄芩苷标准品（中国药品生物制品检定所）;胃肠康颗粒剂（福建金谷科技开发有限公司）。
2 方法与结果
2.1 黄芩苷对照品的制备
2.1.1 黄芩苷粗品的提取
称取已干燥黄芩粉末100g2份，分别以70%乙醇50℃超声提取2次，每次1h，滤过，将提取液减压回收乙醇至尽后，加蒸馏水100ml，用浓HCl调pH值为3～4，静置约0.5h，滤过，滤液在40℃用浓HCl调pH值至2.0，保温30min，静置12h后抽滤。将沉淀分别用水和95%乙醇洗涤2遍，干燥即得黄芩苷粗品。
2.1.2 黄芩苷的纯化
将上述黄芩苷粗品研碎于烧杯中，加150ml蒸馏水加热至80℃时用40%NaOH调pH值为7.5使粗品完全溶解，再用浓HCl调节pH值至6.0，加95%乙醇260ml，静置后过滤。滤液再用浓HCl调pH值为2.0，静置冷却至黄芩苷完全沉淀，过滤后将沉淀用水洗涤至pH 值为7左右，再用95%乙醇洗涤，抽干即得较纯的黄芩苷样品。将此黄芩苷样品用300ml甲醇在50℃超声波下溶解，冷却沉淀，静置，过滤，弃去滤液。将沉淀在室温超声波下溶于甲醇中，5℃下静置逐渐析出淡黄色细针状结晶物，依此再重结晶1次，干燥即得纯化的黄芩苷样品。产率为4.12%。
2.2 黄芩苷样品的定性分析
2.2.1 黄芩苷样品溶液的配制精密称取黄芩苷样品6.10mg，用甲醇溶解并定容至100ml容量瓶中。
2.2.2 黄芩苷标准品溶液的配制精密称取干燥至恒重的黄芩苷标准品5.80mg，用甲醇溶解并定容至100ml容量瓶中，即得标准溶液。
2.2.3 薄层层析
以硅胶G作固定相，以105℃烘箱活化30min，分别吸取黄芩苷样品溶液和标准品溶液各6μl，点样于已活化的硅胶G薄层板上，以正丁醇-冰醋酸-水（7:1:2）为展开剂进行展开，结果标准品与样品的R f 值相等，都为5.5/8.6，在365nm紫外灯下观察，只有一个荧光点，在硅胶板上喷1%FeCl 3 乙醇溶液只有一点显示深兰色，初步判断样品为黄芩苷，且不含杂质。
2.2.4 电子光谱
用黄芩苷样品溶液和标准品溶液进行UV谱扫描。得到两个谱图的结构完全一致，样品溶液无杂质峰，说明本试验得到的样品为黄芩苷且基本无杂质。
2.2.5 红外光谱
黄芩苷样品和黄芩苷标准品的IR谱如图1、2（略）所示。两个谱图的结构完全一致，可确认得到的样品为黄芩苷。图1 黄芩苷标准品IR谱图2 黄芩苷对照品IR谱2.2.6 熔点 测定黄芩苷标准品、本法得到的样品以及本样品与标准品混合物的熔点均为223℃～224℃，说明本法精制的样品纯度较高。
2.3 HPLC法测定黄芩苷含量
2.3.1 色谱条件
色谱柱:Symmetry十八烷基键合硅胶 柱，4.6mm×75mm，HPLC Column（Waters公司）;流动相:甲醇-水-磷酸（47:53:0.2）;检测波长:278nm;流速1ml/min。
2.3.2 标准曲线绘制
精密吸取“2.2.2”项上标准液进样，进样体积分别为1、2、4、6、8、10μl，在上述色谱条件下测定峰面积，得到黄芩苷标准曲线，直线方程为:Y=4024667X（Y为黄芩苷含量μg，X为色谱峰面积nm 2 ），回归系数r=0.9980。线性范围为0.058～0.58μg。
2.3.3 进样精密度
精密吸取“2.2.1”项下的黄芩苷样品溶液进样，每次体积为5μl，记录色谱峰面积，进行进样精密度测定（表1），结果表明进样精密度良好。表1（略）进样精密度试验
2.3.4 测定溶液的稳定性试验
精密吸取“2.2.1”项下的样品溶液5μl，每间隔2.5h进样1次。共测定6次，色谱峰面积分别为1205046、1205089、1204847、1208005、1206536、1206889，平均峰面积为1206069，RSD为0.11%，表明测定溶液在15h内稳定。
2.3.5 黄芩苷样品的含量测定
根据“2.2.3”上的试验结果，人分面积的平均值，即1218277，代入标准曲线方程，经计算可得样品中黄芩苷的含量为99.25%。同时还测定了按文献法 ［7］制备芩苷样品，并与本法比较（表2）（略），结果表明，本法得到的黄芩苷样品纯度与文献得到的样品及标准品均很接近，可作为对照品使用。 表2（略） 不同样品测定结果
2.3.6 胃肠舒颗粒中黄芩苷含量的测定
称取5胃肠康颗粒，每份约2.0g，各加入50ml甲醇，50℃下超声波振荡30min，0.44μm滤膜过滤，将滤液用甲醇定容至100ml，得产品溶液。分别精密吸取溶液各5μl进样，按上述色谱条件测定，并计算产品中黄芩苷含量（表3）。（略）
表3（略） 胃肠康颗粒中黄芩苷的含量
表4（略）产品中黄芩苷回收率 （n=5）
3 讨论
3.1 提取与纯化
利用超声波的作用对中草药中的黄芩苷提取和成方制剂中黄芩苷的提取测定，从黄芩苷的得率、产品纯度和成方制剂中黄芩苷含量测定的重现性、精密度及回收率看，超声提取工艺简单快速、提取完全，克服了文献报道中的加热回流、索氏提取等之繁琐工艺;在产品精制纯化过程中不用文献报道中的索氏提取后浓缩重结晶，而直接用超声助溶重结晶，简单快速，分离效率高，纯度符合要求。因此，本方法可代替传统的回流提取、浓缩精制之生产工艺和产品质量检验之前处理方法。可见，超声提取在中药有效成分提取中不失为一种简单快速有效的方法。
3.2 色谱条件
比较各种流动相，发现“甲醇-水-磷酸”体系，不管是分离效果，还是测定重现性均最好，只是不同的仪器，三者的比例必须通过试验来调整。试验还表明，用HPLC法在本实验色谱条件下测定胃肠康颗粒中主成分黄芩苷含量，方法简便、准确、可靠，可作为胃肠康颗粒产品中黄芩苷的含量测定和产品质量控标的测定方法。
参考文献
1 于波涛，张志荣，刘文胜，等.黄芩苷稳定性研究.中草药，2002，33（3）:218-220.
2 王弘，陈济民，张清民.黄芩苷的物化常数测定.沈阳药科大学学报，2000，17（2）:105-106.
3 毛平.芩夏止喘颗粒中黄芩苷的稳定性研究.中国药学杂志，2000，35（8）:533-5354.
4 黎万寿，陈幸.黄芩苷提取工艺研究.中草药，2000，31（2）:107-108.
5 巩喜娇，薛志宏，何刚.黄芩苷生产工艺研究.中医药学报，2000，3:47.
6 黄组良，刘胜娟.黄芩苷标准品制备方法研究.右江民族医学院学报，2001，23（4）:515.
7 冯青燃，王元瑜，马振山，等.中药水煎煮液分离、纯化工艺的比较研究.中国中药杂志，2002，27（1）:28-30.
8 张琦.黄芩浓缩颗粒剂提取工艺优选.时珍国医国药，2000，11（12）:1090-1091.
9 贺祝英，曹佩雪，梁光义，等.HPLC测定黄芩及其不同炮制品中黄芩苷的含量.中国中药杂志，2002，27（4）:258-259.
10 谢萍，王艳华，毕开顺.清热汤剂中黄芩苷的含量测定.中国中药杂志，2002，27（1）:67-68.
11 丘文珍.HPLC测定清泻丸中黄芩苷的含量.中草药，2002，33（6）:512.
12 冯淑华，乔卫.黄芩及其制剂中黄芩甙含量测定方法.中草药，1995，26（7）:381-383.
13 沈嘉，吴秋媚.HPLC法比较不同工艺制备的黄连解毒汤及日本汉方黄连解毒汤中黄芩苷含量.中草药，1999，30（2）:102-104.
14 李守拙，李沈明，范书铎.黄芩茎叶中野黄芩苷含量测定.中草药，2000，31（12）:910.
15 杨立新，刘岱，冯学锋，等.高效液相色谱法测定不同产地黄芩中黄酮化合物的含量.中国中药杂志，2002，27（3）:166-169.
（收稿日期:2004-07-07）
（编辑日 强）
基金项目:福建省教育厅科技项目（项目编号:JB01212）
作者单位:350000福建农林大学生命科学学院