点击显示 收起
【摘要】 目的 研究牡荆子提取物（NCE）的保肝利用胆作用。方法 给动物灌胃（ig）给药，用四氯化碳（CCl 4 ）、醋氨酚（AAP）及消旋乙硫氨酸（DL-En）建立急性肝损模型，测定血清谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）水平及肝中丙二醛（MDA）及甘油三酯（TG）含量;采用离体胆囊实验和胆管插管法，观察NCE对肝分泌胆汁的影响。结果 ig NCE后能明显降低由CCl 4 、AAP、DL-En引起的血清ALT、AST水平及肝组织MDA、TG含量;明显降低Ach、His等化学物质对豚鼠胆囊平滑肌的收缩性;增加大鼠胆流量。结论 NCE具有明显保肝、利胆作用。 关键词 牡荆子提取物 保肝 利胆作用
Experimental study on liver-protective and choleretic action of negundo chastetree extract（NCE）
Luo Qifu，Zhou Dixian，Zhu Bingyang，et al.
Department of pharmacology of Nanhua University，Hengyang421001.
【Abstract】 Objective To study the liver-protection and choleretic action of negundo chastetree extract（NCE）in rats，mice and guinea pig.Methods NCE was administrated into the animal with liver injury induced by CCl 4 ，AAP and DL-En.ALT，AST level in serum and MDA，TG content in liver were examined.The isolated gallˉbladder smooth muscles model is used gathered the volume of bile by common bile duct intubation in different times.Compared the quantity of bile after given drugs.Results There were singnificant differences on model group compared with control group and NCE group（P<0.01）.NCE could obviously reduce the level of ALT，AST in serum and the content of MDA，TG in liver induced by CCl 4 ，AAP and DL-En.NCE also could increase the bile flow and in a dose-dependent manner.Conclusion NCE have the protective effect on hepatic injury induced by toxicant chemicals（CCl 4 ，AAP and DL-En）and cholagogic action and deserve deeper investigation.
Key words negundo chastetree extract liver-protective choleretic action
牡荆子提取物（negundo chastetree extract，NCE）系由马鞭草科牡荆植物干燥成熟果实，经水提取浓缩制备而成的。在一些炎热地区，民间用其茎、叶、花作为夏令常规饮料用于清暑、止渴、利尿及利气 ［1］ 。为进一步证实其药理作用，探讨其作用机制，本文采用多种药理模型观察NCE的保肝、利胆作用。
1 实验材料
1.1 动物实验所用的昆明小鼠，Wister大鼠和豚鼠均由南华大学实验动物中心提供。
1.2 试剂及药品 四氯化碳（CCl 4 ）（湖南化学试剂厂生产）;消旋乙硫氨酸（DL-ethionine，DL-En）（上海化学试剂供应站提供，系进口分装）;谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）试剂盒（上海生物制品研究所提供）;丙二醛（MDA）试剂盒（南京聚力生物医学工程研究所提供）。氯贝丁酯（clofibrate）（北京制药厂提供）;联苯双酯滴丸（biphenyldimethy dicarboxylate，BDD）（广州群星药厂生产），醋氨酚acetaminophen，AAP）（山东新华药厂提供）。
1.3 牡荆子提取物（NCE）的制备 取干燥成熟牡荆果实 捣碎，加水10倍浸泡，置控温动态（80℃）提2h，过滤后，浓缩为生药1g/ml，所得橙色透明液体置冰箱备用。
2 方法与结果
2.1 NCE对急性肝损伤的影响
2.1.1 对CCl 4 肝损模型的影响 取♀♂各半，体重20±2g小鼠50只，随机分为正常组（normal）、CCl 4 模型（model）组、联苯双酯阳性对照组（control）、NCE5及10g生药组。正常组和模型组ig等容量生理盐水，其余各组按表1所示剂量ig给药，每日1次，连续5次。末次给药后2h，正常组ip10ml/kg花生油，其余各组ip0.15%CCl 4 花生油10ml/kg、眼眶取血，离心10min（3000r/min）分离血清，用赖氏法测定ALT和AST水平;另取血后，断头处死小鼠，取小块肝组织，用冰生理盐水制成5%肝匀浆，3000r/min离心10min，取上清液按试剂盒（TBA）比色法，测定每克肝组织中丙二醛（MDA）含量。实验数据用ˉx±s表示，组间比较用F检验。结果见表1（略）。结果显示，NCE对CCl 4 引起的小鼠血清ALT、AST升高和肝脏MDA升高均有显著的降低作用，且与剂量呈依赖关系。提示NCE有显著的抗脂质氧化作用。表1（略） NCE对CCl 4 致小鼠血清ALT、AST和肝MDA的影响
注:NCE设5、10g生药/kg，对照组给予联苯双酯（0.15g/kg）ig，正常组和模型组ig等理生理盐水，每日1次，连续5次;末次ig后2h，除正常组外，各鼠ip0.15%CCl 4 ，在18h后，取血或处死动物，测定血清ALT、AST水平和肝MDA含量。与模型组比较， ˇ P<0.05， ˇˇ P<0.01， ˇˇˇ P<0.001
2.1.2 对醋氨酚（AAP）肝损模型的影响 ［2］ 在体重20±2g，♂小鼠50只，随机分为正常组、AAP模型组、联苯双酯阳性对照组、NCE（5及10g生药）治疗组。正常组及模型组等容量NS灌胃，对照组及NCE组按表2剂量灌胃给药，每 天1次，连续10天。末次灌胃后2h，除正常组外，各鼠AAP0.2g/kg灌胃，3h后断头取血分离血清，测定ALT、AST;并立即取小块肝，置低温速冻待测MDA;测定ALT、AST及MDA的方法、步骤及统计处理，同2.1.1项，结果见表2。表2（略） NCE对醋氨酚致小鼠血清ALT、AST和肝MDA的影响
注:NCE按5、10g生药/kg，对照组按联苯双酯（0.15g/kg）ig，正常组和模型组ig等量生理盐水，每日1次，连续10次;末次ig2h，各鼠ip醋氨酚（0.2g/kg）。余同表1。
2.1.3 对DL-乙硫氨酸（DL-En）致大鼠脂肪肝模型的影响 取♀♂各半，体重170～230g，Wistar大鼠40只，随机均分为5组。各鼠给药按表3所示剂量灌胃，正常组和模型组等容量NS灌胃。对照组给予氯贝丁酯，以第1次灌胃为0h，再分别于第2、8、16、24、32及40h灌胃各1次，共7次。在给药过程中，除正常组外，其余各组于第1h用DL-En按30mg/kg，灌胃1次，再于第15h按150mg/kg强化1次。各鼠于停药后8h处死，取出肝脏，称重后匀浆，离心后取上清液用酶法测定，每克肝组织甘油三酯（TG）的含量［3］，统计学处理同2.1.1项，结果见表3。（略）结果显示，正常组与模型组比较差异有显著性（P<0.001），表示DL-En诱发大鼠脂肪肝模型是成功的;阳性对照组（clofibrate）与NCE10g生药/kg组之间无统计学意义，但与模型组比较差异有非常显著性（P<0.01）;NCE5、10g生药/kg之间差异有显著性（P<0.05），呈剂量依赖关系。实验结果表明，NCE有抑制DL-En诱发大鼠脂肪肝的作用。
2.2 NCE对动物胆汁的影响
2.2.1 对胆囊平滑肌的影响 ［4］ 取280～320g豚鼠，♀♂兼用，击头放血处死，沿腹壁正中线切开，游离出胆囊及胆总管，置克氏液中固定一端，另一端连接肌张力换能器，浴 槽与恒温水浴锅相连，在37℃操作，并持续向浴槽内液体通95%O 2 和5%CO 2 ，平衡1h，逐加乙酰胆碱（Ach）使浴槽内终浓度为1×10 -6 mol/L，作用20min后用克氏液洗脱;再平衡1h，加Ach使槽内终浓度为1×10 16 mol/L，待稳定后，以此收缩力增强为100%，依次加入不同浓度的NCE，观察对Ach所致胆囊平滑肌收缩力的影响，计算收缩力的降低百分率;与生理盐水组加入等容量克氏液，作用相同时间的活动情况做比较。用同样方法观察，NCE对组胺（histamine）1×10 -6 mol/L致胆囊平滑肌收缩力的影响，结果见表4。（略）表3（略） NCE、DL-乙硫氨酸（DL-En）致大鼠脂肪肝的影响
注:与模型组比较， ˇ P<0.05， ˇ P<0.001， ˇˇˇ P<0.001 表4（略） NCE对豚鼠胆囊平滑肌收缩力的影响 （ˉx±s）
2.2.2 NCE对胆流量的影响 取♂，体重为220±30g大鼠40只，随机分为对照组给予等容量NS。去氢胆酸（dehydroˉcholic acid，DHCA）组，NCE5、10g生药组，分别按10ml/（kg·d），灌胃，连续5天，于末次给药后90min，用20%鸟拉坦麻醉，剖开腹腔，找到胃幽门部，翻转十二指肠，找出总胆管，于总胆管上切一“V”型口，插入聚乙烯管引流胆汁，稳定20min后，收集1、2、3、4h胆汁;计算给药后胆汁流量增加百分率。胆汁流量增加百分率（%）=（给药后胆汁流量-对照组胆汁流量）/对照组胆汁流量×100%。各组数据均以ˉx±s表示，多组数据间比较用双因素方差分析，结果见表5。结果显示，NCE能明显增加胆汁流量，维持时间在4h以上，且与剂量呈依赖关系。表明NCE有一定的利胆作用。表5（略） NCE对大鼠胆流量的影响
3 讨论
中药牡荆子为马鞭草科植物牡荆的种子，有除骨间寒热，消黄肿，通利胃气，止逆下气之功效［5］，药化研究表明牡荆子中含有脂质、黄酮类、强心苷及生物碱等主要成分［6］。本实验采用CCl 4 、AAP及DL-En等化学毒性物造成动物肝损模型，观察牡荆子提取物的作用。普遍认为CCl 4 肝损是经肝P 450 作用产生脂质过氧化物引起生物膜流动性及蛋白质化构改变，形成了弥漫性坏死及脂肪变性，最终导致肝损坏死。AAP引起肝损主要是其中间代谢产物N-乙酰-对苯醌亚氨（NAPQI），耗竭肝细胞还原型谷胱甘肽，降低肝细胞抗氧化能力，而使肝细胞产生氧化应激性损伤。而DL-En直接使肝细胞坏死。本实验结果显示NCE能显著降低CCl 4 、AAP及DL-En肝损动物血清ALT、AST水平及肿中MDA、TG含量，表明NCE具有防止肝细胞坏死及肝脂肪变性的作用，其作用机制可能与抗脂质过氧化有关。实验结果还显示NCE可降低Ach及组胺对胆囊平滑肌的收缩性和促进胆汁分泌，作用时间可持续4h以上，且 呈剂量依赖关系，表明有显著的利胆作用。但其作用机制有待进一步研究。
参考文献
1 湖南中医研究所编·湖南药物志，长沙:湖南科技出版社，1962，671-675.
2 汪晖，彭仁.对乙酰氨基酚对小鼠谷胱甘肽与转氨酶的影响.中国药理学报，1993，14:41-44.
3 梅美珍，徐也鲁，杨永宗.动脉粥样硬化实验技术.衡阳:中国病理生理学会动脉粥样硬化专业委员会.衡阳医学院心血管病研究所，1989，71.
4 Matzkies F，Webs B.Wirkung eines pflanzlichen kombinationspraparats auf die gastrointestinal transitzeit und die gallensauren-ausscheidung.Fortschritte-der-medizin，1983，101（27-28）:1304-1306.
5 宋立人.现代中药学大辞典（上册），北京:人民卫生出版社，2001，1061-1062.
6 樊菊芬.国产牡荆属植物化学成分的研究.中草药，1981，9:9-12.
（收稿日期:2004-07-12）
（编辑日 强）
作者单位:421001湖南衡阳南华大学药理学教研室