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【摘要】 目的 改进HPLC法测定盐酸克林霉素的含量及有关物质。方法 以磷酸二氢钾溶液-乙腈（600:400）为流动相;检测波长为210nm。结果 含量测定线性范围0.25～2mg/ml，r=0.9999。加样回收率100.5%，精密度RSD=0.07%。结论 本法准确度高。盐酸克林霉素中的主要杂质:林可霉素、克林霉素B及差向克林霉素能一一分离。
关键词 盐酸克林霉素 含量 有关物质
《中国药典》2000年版二部盐酸克林霉素有关物质及含量测定，采用高效液相色谱法 ［1］ ，标准中有
关物质的检测，未能对盐酸克林霉素中的有关物质:林可霉素、克林霉素B及差向克林霉素等一一分离;且含量测定主峰的对称性差，峰的理论板数低。我们经试验采用下列方法测定，可改善并克服上述不足之处，使分析结果更准确。
1 仪器与试药
（1）Agilent1100液相色谱仪;HM-202型电子天平。（2）磷酸二氢钾（AR）;乙腈（色谱纯）。
2 测定方法与结果
2.1 含量测定
2.1.1 色谱条件 色谱柱:ZORBA ODS，4.6×250mm，5μm;流动相:磷酸二氢钾溶液（取磷酸二氢钾6.8g，加水溶解并稀释成1000ml，用8mol/L的氢氧化钠溶液调节pH值为7.5）—乙腈（600:400）;流速:0.8ml/min;检测波长:210nm;进样量:20μl。
2.1.2 标准曲线的制作 精密称取对照品125mg，置25ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。分别精密量取0.5、1、2、3、4ml，置10ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，进样。所得峰面积Y对浓度X进行线性回归Y=4384.2X+132.4，r=0.9999。盐酸克林霉素在0.25～2.0mg/ml范围内，与峰面积呈良好线性关系。
2.1.3 回收率测定 取已知含量的盐酸克林霉素，精密称定，用流动相稀释成2mg/ml的溶液。精密量取0.5、1、2、3、4ml，置10ml量瓶中，精密加入上述对照品溶液1ml，用流动相稀释至刻度，摇匀，进样。平均回收率为100.5%，RSD=1.0%，见表1。
表1 加样回收率 略
2.1.4 重复性和稳定性 样品（20030623）溶液（1mg/ml）重复进样5次，其RSD=0.07%;另取同一样品于放置0、4、12、24h测定，其RSD=1.2%，结果表明，试验重复性好，样品在24h内稳定。
2.1.5 样品测定 取样品约125mg，精密称定，置25ml量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀;精密量取5.0ml，置25ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，进样。另取克林霉素对照品，同法测定。按外标法以峰面积计算供试品中C 18 H 33 C1N 2 O 5 S的含量。
2.2 有关物质的测定 ［2～4］ 取样品适量，用流动相制成1ml中含5mg的溶液，作为供试品溶液;精密量取适量，用流动相稀释成1ml中含0.1mg的溶液，作为对照溶液。
照含量测定项下的方法试验，取对照溶液10μl注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分峰的峰高约为记录仪满量程的10%～20%;再取供试品溶液和对照溶液各10μl，分别注入液相色谱仪，记录供试品色谱图至主成分峰保留时间的2倍。林可霉素、克林霉素B及差向克林霉素峰的保留时间和克林霉素峰的保留时间之比分别约为0.35、0.65及0.8。
3 结果与讨论
3.1 测定波长的选择 经紫外扫描，盐酸克林霉素在210 nm处有较大的吸收，故选此波长为测定波长。
3.2 盐酸克林霉素的有关物质按《中国药典》2000年版二部的方法，见图谱1，只出现了2个杂质峰。采用新方法，见图谱2，盐酸克林霉素中的有关物质:林可霉素、克林霉素B及差向克林霉素等都被一一分离。
盐酸克林霉素的含量测定，采用《中国药典》2000年版二部的方法含量测定结果和新方法基本相同;但用同一仪器、同一柱子，药典方法得到的图谱（见图谱3），主峰理论板数 2659，其对称性0.3，峰的对称性差;而用新方法测定得到的 图谱（见图谱4），主峰理论板数可达到13384，其对称性1.1，峰的对称性较好。
图谱1 1，2-未知杂质 3-克林霉素 略
图谱2 1-林可霉素 2-克林霉素B 3 差向克林霉素 4-克林霉素 略
图谱3 略
图谱4 略
3.3 本厂样品20030623、20030727、20030804，用《中国药典》 2000二部及本方法的检验结果见表2。
表2 样品测定结果 （略）
由此可见，用新方法测定，使分析结果更准确。
参考文献
1 国家药典委员会.中国药典，北京:化学工业出版社，2000，二部:附录VD.
2 盐酸克林霉素注射液WS 1 -（X-029）-2003Z.
3 夏振华，等.英国药典1993年版测定克林霉素有关物质的探讨.中国药事，1998，12（6）:357-358.
4 应奇才，等.国产盐酸氯洁霉素质量问题的研究.浙江化工，1999，30（4）:47-48.
作者单位:473053河南省南阳普康药业有限公司
（收稿日期:2004-08-22）
（编辑黄 杰）