点击显示 收起
【摘要】 目的 建立新雪颗粒剂中栀子苷的含量测定方法。 方法 采用Diamonsil C 18 （250×4.6mm5μm）为色谱柱，流动相为乙腈—水（15:85，V:V），检测波长为240nm，柱温为30℃，流速为0.8ml/min。 结果 栀子苷在0.6～24.0μg/ml（r=0.9997）范围内线性关系良好;样品平均回收率为99.79%，RSD为0.91%。 结论 该方法测定新雪颗粒剂中栀子苷含量，结果准确，可用于新雪颗粒剂中栀子苷的含量测定。
【关键词】 新雪颗粒 栀子苷 高效液相色谱法
HPLC determination of geniposide in xinxue keli
Jia Xiaodong，Wang Weijie
Sunstone Pharmaceutical CO，LTD Hebei Tangshan063020.
【Abstract】 Objective To establish a newHPLC method for the assay of Geniposide in Xinxue Keli.Methods Geniposide can separated on the column of Diamonsil Cl 8 （250×4.6mm，5μm）with the mobile phase acetonitrile-water（15:85，V:V），UV detection wavelength was240nm.The flow rate was0.8ml/min.Results The standard curve was linear in the concentration range0.6～24.0μg/ml（r=0.9997）and the correlation coefficient was0.9997.The average recovery and the relative standard deviation was99.79%and0.91%respectively.Conclusion The method was able to evaluate the quality of Xinxue Keli.
【Key words】 Xinxue Keli Geniposide HPLC
新雪颗粒剂是由栀子、磁石、石膏、滑石、寒水石、硝石、芒硝、竹叶卷心、广升麻、穿心莲、珍珠层粉、沉香、牛黄、冰片14味中药组成。具有清热解毒和镇惊作用。适用于感冒、肺炎、急性扁桃体炎等呼吸道感染性疾病引起的发热及各种热性病发热。2003年被列入可明显改善非典（SARS）症状的中成药之一，为国家指定的全国中医急诊科（室）必备中成药。栀子为新雪颗粒剂中主要成分，本文以栀子苷为主要检测指标，试用高效液相色谱法测定其含量，该方法灵敏准确，可用于新雪颗粒剂的质量控制。
1 仪器与试药
高效液相色谱仪:日立HITACHI型高效液相色谱仪（L-7110输液泵，L-7420紫外可见检测器），Anastar色谱工作站;超声仪（上海之信仪器有限公司）。栀子苷对照品（中国药品生物制品检定所提供）。新雪颗粒剂（广州奇星药业有限公司，批号20030701，20030702，20030703）。
2 方法与结果
2.1 色谱条件 色谱柱:Diamonsil C 18 （250×4.6mm，5μm）;流动相:乙腈-水（15:85）;流速:0.8ml/min;检测波长:240nm;柱温为30℃。
2.2 溶液的制备
2.2.1 样品溶液 取本品适量，研细，精密称取0.5g，加50%甲醇25ml，冷浸30min，超声90min，放冷，静置，精密吸取上清液5.00ml注入已处理好的大孔树脂柱（r=1.2cm，L=13cm），先用200ml的蒸馏水冲洗，再用70%的乙醇溶液冲洗，收集70%的乙醇洗脱液于100ml容量瓶内，摇匀，滤过，即得。
2.2.2 对照品溶液 精密称取栀子苷对照品适量，加流动相制成每1ml中含栀子苷2μg的溶液。
2.2.3 阴性对照液 按处方配比投入无栀子的其他药材和辅料，制成空白制剂，按样品溶液制备的方法制备。
2.3 系统适用性试验 在2.1色谱条件下，分别取对照品溶液、阴性对照液、样品溶液各20μl注入色谱仪，记录色谱图，见图1。结果表明在本试验条件下，新雪颗粒剂中各组分分离度效果良好，其他组分不干扰栀子苷的测定。理论塔板数以栀子苷计，不低于2000，分离度为2.8。
图1 HPLC色谱图（略）
2.4 线性曲线的观察 精密称取栀子苷对照品10mg置50ml容量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，制成每1ml含0.2mg的溶液。分别精密吸取上述溶液配制成0.6、1.0、3.0、6.0、10.0、16.0、20.0、24.0μg/ml系列浓度的溶液，取20μl溶液注入液相色谱仪，记录峰面积。以对照品的峰面积为纵坐标，以浓度为横坐标进行线性回归，得回归方程为Y=46217X+3405.7，r=0.9997。结果表明栀子苷在0.6～24.0μg/ml范围内线性关系良好。
2.5 精密度考察 精密吸取同一供试品溶液，注入高效液相色谱仪，重复进样6次。结果，测定栀子苷含量的RSD为0.17%，该方法精密度高。
2.6 稳定性试验 精密吸取同一样品溶液，分别于0，2，4，6，8h注入高效液相色谱仪测定栀子苷含量，测得结果的RSD为0.50%，表明样品溶液在8h内基本稳定。
2.7 重现性试验 精密称取同一批号新雪颗粒剂6份，按2.2.1样品溶液制备方法制备，按以上色谱条件测试，所测栀子苷含量的RSD为0.18%（n=6）。
2.8 回收率试验 取已知含量的新雪颗粒剂适量，精密称定，精密加入栀子苷对照品适量，按供试品溶液制备方法制备，并按以上色谱条件测试，平均回收率为99.79%，RSD为0.91%。测得结果见表1。
表1 回收率测定结果 （略）
2.9 样品的含量测定 分别精密称取不同批号的新雪颗粒剂0.5g，按供试品制备方法制备，精密吸取对照品溶液及样品溶液，注入高效液相色谱仪，按以上色谱条件测定栀子苷含量，结果见表2。
表2 新雪颗粒剂中栀子苷含量测定结果 （略）
3 讨论
新雪颗粒剂由14味中药材组成，成分复杂，采用《药典》测定栀子苷的条件无法达到主峰与杂质峰的基线分离，依据参考文献 ［1～3］ ，采用大孔树脂对样品进行过柱处理，先用水冲去水溶性杂质，再用70%的乙醇液将树脂上的栀子苷洗脱下来，分离效果良好。
曾选用中性氧化铝柱对样品进行处理，但由于中性氧化铝密度较大，在过柱方面不如大孔树脂方便，故选用大孔树脂柱。
参考文献
1 黄雪梅，孔晓龙，蒋伟哲，等.RP-HPLC法测定功劳去火片中栀子苷的含量.药物分析杂志，2003，23（6）:79-80.
2 聂仁强，钱孟，冉启文.大孔吸收树脂在中药提取工艺中的应用.基层中药杂志，2002，16（6）:59.
3 范吕林.高效液相色谱法测定清火栀麦胶囊中栀子苷的含量. 中国药业，2001，10（8）:11-12.
（编辑黄 杰）
作者单位:063020河北唐山太阳石（唐山）药业有限公司
063009河北唐山河北理工大学