高效液相色谱手性固定相法分离布洛芬对映体

    【摘要】 目的  探寻一种简单经济而有效的分离布洛芬对映体的方法。 方法  采用在实验室制备的十四-（2，6-二-O-戊基）-β-CD硅胶键合固定相色谱柱（250mm×4.6mm），直接分离布洛芬对映体。考察不同流动相、pH值等因素对布洛芬对映体分离的影响。 结果  分离布洛芬对映体的最佳HPLC条件为:流动相:乙腈:0.05mmol/L、磷酸二氢钾=50∶50（0∶0），pH=4.0，流速ml/min，进样体积10μl进样温度25℃。 结论  高效液相色谱手性固定相法分离布洛芬对映体快速、简单、经济、效果好，可为分离、制备单旋体布洛芬提供良好借鉴。

    【关键词】  高效液相色谱 手性固定相 布洛芬 对映体
  
    Enantiomeric separation of ibuprofen by chiral high performance liquid chromatography

    Ye Weimin，Luo Aiqin，Hou Aijun，et al.

    School of Life Science and Technology，Beijing Institute of Technology，Beijing100081.

    【Abstract】 Chiral stationary high performance liquid chromatography method was developed in enantiomeric separation of ibuprofen.The stationary phase in the column（250mm×4.6mm）was tetradeca-（2，6-dioxyamyl）-β-cyclodextrin bonded with silica.The mobile phase was CH 3 CN and0.05mol/L KH 2 PO 4 （50∶50，V∶V），pH val-ue was adjusted to4.0with phosphoric acid.The different mobile phase and pH value were studied in the separation of ibuprofen enantiomers.

    【Key words】 HPLC chiral stationary phase ibuprofen enantiomer

    布洛芬（Ibuprofen）是常用的非甾体类消炎镇痛剂 ［1，2］ ，其化学名为（R，S）-2-（4-异丁基苯基）丙酸，合成产物为外消旋体，研究表明，布洛芬手性对映体的药效存在很大差别，右旋布洛芬的活性是左旋体的160倍，是消旋布洛芬的1.6倍 ［3］ 。因此，探寻一种简单经济而有效的分离布洛芬对映体的方法具有重要的意义。国内已有一些关于对映体药物分离方法的报道，但多用间接拆分的衍生化色谱方法，不但过程复杂、操作繁琐、方法的适用范围窄，而且在衍生化的过程中容易使对映体互相转化，或衍生化反应不完全等，从而导致测定结果的不准确 ［4～6］ 。国外已有用环糊精手性固定相直接测定此类药物对映体含量的报道 ［7］ 。但在国内用此类固定相分离布洛芬对映体的方法报道不多。本文采用实验室合成制备的十四-（2，6-二-O-戊基）-β-CD硅胶键合固定相色谱柱，直接分离了布洛芬对映体。该方法操作简单迅速，分离效果明显，较之其它方法有明显的优势。

    1 实验部分

    1.1 仪器与试剂 实验仪器:Waters515-717-996色谱系统，包括515二元泵、717自动进样器、996二极管阵列检测器、Milliennium 32 色谱工作站，PHS-3B型精密pH计（上海精密科学仪器有限公司雷磁仪器厂），Hangping FA1004电子天平（上海天平厂），Branson2200超声清洗器（Branson Ultrason-ics Corporation USA）。实验试剂:甲醇（Caledon，HPLC），乙腈（Fisher，HPLC），磷酸（北京益利精细化学品有限公司，AR），磷酸二氢钾（北京化学试剂公司，AR），布洛芬外消旋样品（北京市药物检验所），超纯水（北京理工大学）。

    1.2 色谱柱的选择 色谱柱规格250mm×4.6mm，填料为十四-（2，6-二-O-戊基）-β-CD键合硅胶固定相，β-环糊精衍生化反应如下 ［8］

    1.3 检测波长的选择 从二极管阵列检测器的三维扫描图可以看到，布洛芬在271.4nm处具有最大紫外吸收，根据吸收最大干扰最小的原则，选取271.4nm作为检测波长。1.4 流动相的选择 分别用甲醇、乙腈、水、磷酸缓冲盐的不同组合做先期的探索性实验，从初步分离色谱图可以得出:选择甲醇和缓冲盐作流动相很难分开布洛芬对映体，且出峰时间长，而在同等条件下选择乙腈（简称A）和0.05mol/L磷酸二氢钾（简称B）则明显有利于布洛芬对映体的分离。为了进一步确定A与B的最佳组成比例，选取多组不同的混合比例作为对比实验，图1表示了A与B不同比例下的分离效果，表1列出了相应的分离参数。

    表1 A与B不同比例下的分离参数（略）

    由图1和表1可以看出，流动相中乙腈的比例减小，将有利于布洛芬对映体的分离，但分离的保留时间明显增大，所以综合考虑选取A∶B=5∶5（V∶V，下同）。pH值影响:在A∶B=5∶5下考察不同pH值的分离情况，如图2所示，相应的分离因子如图3所示:图2和图3显示:当A∶B=5∶5时，分离因子α受pH值的影响呈先增大后减小的趋势。因此，选择用磷酸调节pH值到4.0作为流动相的pH值环境。

    2 结果与讨论

    2.1 最佳HPLC条件 通过考察不同流动相配比、不同pH环境等各种实验条件，最终得到分离布洛芬对映体的最佳HPLC条件:流动相为乙腈∶0.05mol/L磷酸二氢钾=5∶5（V∶V），pH=4.0，流速为1.0ml/min，进样体积10μl，进样器温度25℃。在此条件下，布洛芬对映体已经基本分开，主要色谱参数如下:α=1.13，R=1.22，t  r1 =17.87min，t  r2 =19.64min。

    图1 A与B不同比例下的分离色谱图
   
    图2 A∶B=5∶5下不同pH值的分离色谱图
   
    图3 在A∶B=5∶5下pH值与分离因子α的关系

    2.2 方法的精密度 准确称量5.0mg布洛芬对映体样品，移入5ml容量瓶，加入2.5ml流动相超声溶解，再用流动相定容，制成储备液。取1ml储备液用0.45μm有机滤头过滤至进样瓶，进样量为10μl，在相的条件下连续进样6次考察布洛芬对映体量的变化。结果见表2，相对标准偏差分别为0.38%和0.33%，表明该实验系统具有很好的精密度。

    表2 精密度实验结果（略）

    参考文献

    1 Veltri JC，Rollins DE.A comparison between the frequency and severity of poisoning case for ingestion of acetaminophen，aspirin and ibuprofen. Am J Emerg Med，1988，6:104.

    2 McElwee NE，et al.A prospepective，population based study of acute ibuprofen overdose:Complication are rare and routine serum levels not warranted.Ann Emerg Med，1990，19:657.

    3 Evans AM，Ear J Clin Pharmacol，1992，42（3）:237-256.

    4 Zhao Hua，Mu Zhaode，Li Huizhi et al.China Pharmaceutical Journal，2000，35（3）:194-196.

    5 Liu Yanming，Miao Jianrong.Journal of China Pharmaceutical Universi-ty，1999，30（2）:124-126.

    6 Xie Yuchun，Liu Huizhou，Chen Jiayong.Chinese Journal of Chromatog- raphy，1998，16（1）:56-58.

    7 Healy L O，Murrihy，Tan Aimin，Cocker D，et al.Enantiomeric separa-tion of R，S-naproxen by conventional and nano-liquid chromatogra-phy with methyl-b-cyclodextrin as a mobile phase additive.Journal of Chromatography A，2001，924:459-464.

    8 刘立文.高效液相色谱手性固定相的合成及对映体分离研究，北京:北京理工大学，2004.

    （编辑子 萱）
 
    作者单位:1100081北京理工大学生命科学与技术学院
    中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所
    北京市药品检验所