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首页合作平台在线期刊中华实用医药杂志2005年第5卷第8期论著

多沙唑嗪控释片对高血脂兔腹主动脉球囊损伤后血管狭窄的影响

来源:INTERNET
摘要:【摘要】目的经皮冠状动脉成形术(PTCA)术后再狭窄问题是目前冠心病介入治疗领域中最亟待解决的问题。有研究表明多沙唑嗪可能具有抑制再狭窄的作用。本研究旨在探讨多沙唑嗪控释片对血管PTCA后再狭窄的影响,并试图探索其机制。方法23只兔随机分为3组,正常对照组5只,球囊损伤组9只,多沙唑嗪组9只。...

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   【摘要】 目的  经皮冠状动脉成形术(PTCA)术后再狭窄问题是目前冠心病介入治疗领域中最亟待解决的问题。有研究表明多沙唑嗪可能具有抑制再狭窄的作用。本研究旨在探讨多沙唑嗪控释片对血管PTCA后再狭窄的影响,并试图探索其机制。 方法  23只兔随机分为3组,正常对照组5只,球囊损伤组9只,多沙唑嗪组9只。其中正常对照组用普通饲料喂养,另外两组用高脂饲料喂养并行腹主动脉球囊损伤术,多沙唑嗪组加用多沙唑嗪控释片4mg/d,术后28天处死。测定血脂、血清NO含量和血管内膜厚度、中膜厚度、外膜厚度、内弹力层包围面积、外弹力层包围面积、中膜面积、新生内膜面积、管腔面积。并对PCNA阳性反应产物进行半定量检测分析。比较3组手术前后血脂,一氧化氮,球囊损伤处血管狭窄和PCNA的变化情况。 结果  多沙唑嗪组血浆总胆固醇较球囊损伤组明显降低,而高密度脂蛋白明显增高,血清一氧化氮含量明显增高,血管内膜增生明显低于球囊损伤组,外膜增生明显低于球囊损伤组,管腔面积明显大于球囊损伤组,新生内膜面积明显低于球囊损伤组,内弹力层包围面积明显大于球囊损伤组,外弹力层包围面积明显大于球囊损伤组,PCNA阳性平均灰度明显比球囊损伤组减低。 结论  多沙唑嗪控释片能明显抑制球囊损伤后血管的狭窄,其机制可能与降低血脂,抑制动脉粥样硬化进展,增加一氧化氮含量,抑制平滑肌细胞增殖,改善血管重塑等有关。

    【关键词】  再狭窄 多沙唑嗪控释片 一氧化氮 血脂 平滑肌细胞增殖
    
    Effects of doxazosin controlled release tablets on vascular restenosis after balloon angioplasty of atherosclerotic abdominal arteries

    in the hyperlipidemic model of rabbits  Lu Jingqian,Cao Jingming,Fu Minglong,et al.

    Department of Cardiology,First Affiliated Hospital of Kunming Medical College,Kunming650031.
   
    【Abstract】 Objective Restenosis which occurs after percutaneous transluminal coronaryAngioplasty(PTCA)is the major problem unsolved in coronary interventional therapy,there was information indicated that doxazosin per-haps can effective restenosis,the aim of this present study was to elucidate this problem,and try to find its reason.Methods 23New Zealand rabbits was random divided into3groups,normal contral group(n=5)was feed with nor-mal diet,the other two groups was feed with high cholesterol diet,and their abdominal arteries was injured by bal-loon,doxazosin group was feed with doxazosin controlled release tablets4mg/d,they were killed after28days later.serum lipid,nitric oxide production was determined.The neointimal thickness,media thinkness,adventitia thinkness,intimal elastic lamina,extral elastic lamina,medial area,neointima area,lumen area and PCNA positive cells in the intima and media was analyzed.in3groups,serum lipid,nitric oxide,vascular restenosis and PCNA compared with each other before and after balloon injure.Results The serum lipid in doxazosin group was significantly lower com-pared with balloon injure group,HDLD was significantly higher.The nitric oxide in doxazosin group was significantly higher,and the intima proliferation in doxazosin group was inhibited,adventitia thinkness also was inhibited,lumen area was increased,intimal elastic lamina was increased,extral elastic lamina was increased.PCNA positive cells in the intima and media was inhibited.Conclusion Doxazosin controll release tablets can significantly inhibit lumen restenosis,perhaps by reduce serum lipid,inhibited atherosclerotic progress,increase serum nitric oxide,inhibit vascu-lar smooth muscle cell proliferation and favor vascular remodule after PTCA in rabbits.

    【Key words】 restenosis doxazosin controll release tablets nitric oxide blood lipid smooth muscle cell pro-liferation

    (经皮冠状动脉成形术)PTCA术是目前治疗冠心病的重要方法,但术后半年内约有30%~50%的病人发生原病变部位的再狭窄 [1] 。PTCA术后再狭窄的原因包括血管的弹性回缩、血栓形成、生物活性因子的释放、血管平滑肌细胞(VSMC)的迁移、新生内膜形成、内皮修复、细胞外基质的形成及血管重塑等。多沙唑嗪控释片(doxazosin controlled release tablets)是一种采用激光打孔缓释技术的新型α 1 肾上腺素能受体阻滞剂,已有研究表明多沙唑嗪可能具有抑制PTCA术后血管狭窄的作用。本研究继续这一方面的努力,应用多沙唑嗪控释片对PTCA术后的高血脂兔治疗4周,观察多沙唑嗪控释片能否减轻血管损伤后的狭窄,并试图探索其机制,为以后临床防治再狭窄提供理论依据。

    1 材料与方法

    1.1 动物分组 2.0~2.5kg新西兰兔23只,由昆明医学院动物科提供。实验前适应性饲养2周,排除饮食异常者,稳定血脂水平和代谢状况。随机分为3组:正常对照组5只,给予普通饲料。球囊损伤组9只,用1%胆固醇(购于昆明杰辉公司)高脂饲料100g/d喂养,并行腹主动脉PTCA术。多沙唑嗪组9只,用1%胆固醇高脂饲料100g/d+多沙唑嗪控释片4mg/d(大连辉瑞制药有限公司)喂养,行腹主动脉PTCA术。动脉PTCA术前5天开始喂养至实验结束。

    1.2 动物PTCA术后血管狭窄模型的建立 用氯氨酮注射液(25mg/kg)和氯丙嗪注射液(12.5mg/kg)肌肉注射麻醉兔,沿髂动脉方向做一纵切口,逆行钝性分离并游离髂动脉。在髂动脉上剪一切口,沿切口将3.5×23mm球囊(强生-Cordis产品)送入腹主动脉20cm,用压力泵以8个大气压充盈球囊,回抽球囊,直至有阻力为止,反复抽拉3次,每次30s,间隔1min,术后即刻通过耳缘静脉注射肝素钠5000U并注射庆大霉素8万U预防感染,局部缝合包扎。4周后经耳缘静脉注入50ml空气处死兔,迅速取出腹主动脉,放入4%多聚甲醛中固定,石蜡包埋。

    1.3 组织形态学观察及计算机图像分析 切片常规HE染色,利用Hias-1000计算机图像分析系统(湖北同济医科大学研制)分别测出血管内膜厚度、中膜厚度、外膜厚度、内弹力层包围面积、外弹力层包围面积、中膜面积、新生内膜面积、管腔面积。

    1.4 免疫组化标记增殖细胞 使用单克隆增殖细胞核抗原(proliferation cell nuclei antigen,PCNA)试剂盒(福州迈新公司)进行常规免疫组化染色,各组免疫组化切片应用Hias-1000图像分析系统对阳性反应产物进行半定量检测分析。PCNA阳性表达为细胞核呈棕黄色。每张切片随机选取3个视野,在400倍放大下,测量内膜、中膜免疫组化染色灰度值,然后取其平均值。灰度值从0到255共分为256个等级,灰度值越大表示免疫组化染色越深。

    1.5 血脂和血清一氧化氮测定 三组分别于喂养5天时经耳缘静脉抽血5ml,球囊损伤组和多沙唑嗪组在实验结束时再经耳缘静脉抽血5ml。胆固醇测定应用CHOP-PAP法,甘油三酯测定应用GPO-POD法,高密度脂蛋白测定应用磷钨酸-镁法,低密度脂蛋白测定采用聚乙烯硫酸沉淀法。一氧化氮测定采用硝酸还原酶法,严格按一氧化氮试剂测定盒(购于南京建成公司)说明操作。

    1.6 统计学处理 数据以均数±标准差表示,用SPSS11.5统计软件包进行单因素方差分析,以P<0.05为结果有统计学意义。

    2 实验结果

    2.1 三组血管形态学结果 在正常对照组,内皮细胞、内弹力板完整,内弹力板内有极少量结缔组织,无平滑肌存在。球囊损伤组内膜有程度不等的增厚,内膜下有大量泡沫细胞存在,管腔明显狭窄。多沙唑嗪组内膜未见明显增厚,亦未见泡沫细胞的堆积,平滑肌细胞增生不明显,管腔亦无明显狭窄。如表1所示,球囊损伤组损伤部位血管内膜增生、外膜增生明显高于正常对照组(P<0.001)。多沙唑嗪组其损伤部位血管内膜增生、外膜增生明显低于球囊损伤组(P<0.01)。 

    表1 多沙唑嗪对血管各层厚度的影响(略) 组别 外膜厚度 中膜厚度 内膜厚度
   
    同时我们还观察到球囊损伤组血管管腔面积明显减小(与正常对照组相比,P<0.001),新生内膜面积明显增加(与正常对照组相比,P<0.001),多沙唑嗪组血管管腔面积增大(与球囊损伤组相比,P<0.001),新生内膜面积明显减小(与球囊损伤组相比,P<0.001),三组中膜面积差异无显著性(P>0.05),见表2。

    表2 多沙唑嗪对动脉管腔面积、新生内膜面积、中膜面积的影响 (略)
 
    此外球囊损伤组内弹力层包围面积和外弹力层包围面积减小(与正常对照组相比,P<0.01),多沙唑嗪组的内弹力层包围面积和外弹力层包围面积增加均有显著性(与球囊损伤组相比,P<0.05),见表3。

    表3 多沙唑嗪对动脉内弹力层包围面积和外弹力层包围面积的影响 (略)
 
    2.2 三组血脂结果 由表4可以看出,正常情况下兔血脂不高,经高胆固醇饲料喂养后5天胆固醇、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白就显著增高(与正常对照组比,P<0.05)。实验结束时兔胆固醇、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白进一步增高(与术前时比,P<0.001)。甘油三酯也较前显著增高(与术前时比,P<0.05)。与球囊损伤组相比,多沙唑嗪治疗能显著降低胆固醇(P<0.05),增高高密度脂蛋白(P<0.05),同时甘油三酯、低密度脂蛋白差异虽无显著性(P>0.05),但都有降低的趋势。

    2.3 三组血清NO结果 正常对照组NO含量为93.72±7.71μmol/L,球囊损伤组术前NO含量为94.58±18.0μmol/L,多沙唑嗪组术前为89.94±18.01μmol/L,三组间无显著性差异(P>0.05)。球囊损伤组术后28天时NO为21.63±13.56μmol/L,与球囊损伤组术前比较明显降低(P<0.001)。多沙唑嗪组术后28天时NO为62.57±17.33μmol/L,与多沙唑嗪组术前相比明显降低(P<0.001)。但是多沙唑嗪组术后28天时NO明显比球囊损伤组术后28天时增加(P<0.001)。

    表4 三组血脂变化情况 (略)

    2.4 三组PCNA免疫组化结果 正常对照组PCNA平均灰度为3.4±0.9。球囊损伤组内膜中膜可见大量平滑肌细胞增生,PCNA平均灰度112.8±23.4(与正常对照组比较,P=0.000)。多沙唑嗪组内膜中膜少量平滑肌细胞增生,PCNA平均灰度9.5±1.3(与正常对照组比较,P<0.05)。多沙唑嗪组内膜中膜PCNA阳性颗粒明显较球囊损伤组低(与球囊损伤组比较,P<0.001)。

    3 讨论

    本研究发现多沙唑嗪控释片治疗28天能明显增加PT-CA术后血管管腔面积,抑制动脉内膜、外膜的增生,同时增加内弹力层包围的面积和外弹力层包围的面积。表明多沙唑嗪控释片能减轻血管狭窄,对血管重塑产生正性调节作用。PCNA位于细胞核内,且仅在S期出现,S期结束时又消失,所以又称细胞周期蛋白,是S期的特异性标记,被作为平滑肌细胞增殖的指标。本研究发现,多沙唑嗪组动脉内膜中膜PCNA染色阳性颗粒明显少于球囊损伤组,表明多沙唑嗪在动物体内明显抑制了VSMC的增殖。前的研究表明,多沙唑嗪对再狭窄的治疗作用与抑制VSMC的增殖有关,而且多沙唑嗪能抑制血管平滑肌的多条有丝分裂信号途径,并与α 1 受体拮抗无关。Kintscher U等 [2] 发现多沙唑嗪可抑制血管平滑肌细胞G 1 期至S期的转换,这种作用与多沙唑嗪阻止Rb蛋白的磷酸化有关,多沙唑嗪能抑制细胞周期依赖性激酶抑剂P 27 蛋白降解,使血管平滑肌细胞中P 27 蛋白始终处于较高水平,即阻止P 27 下调而增加P 27 的表达。Ulrich等也证明,多沙唑嗪通过增加P 27 的表达,抑制Rb的磷酸化,使VSMC的有丝分裂停止在G 1 期,抑制细胞的增殖。P 27 属于细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂家族,主要通过抑制G 1 ~S限制点中的各种周期蛋白及周期蛋白依赖性激酶而使细胞停滞于G 0 /G 1 期,雷帕霉素就是通过调节P 27 和Rb蛋白的浓度而影响血管平滑肌细胞的增殖,故多沙唑嗪有可能成为预防PTCA术后再狭窄的另一种有效的治疗药物。 流行病学调查发现 [3] ,血浆TC浓度与冠心病的进展及病死率有明确相关性。降脂治疗试验证明在降低TC,TG,LDL-C的同时,可使心肌梗死发生率降低,TC降低10%,心肌梗死发生率降低17%,心脏事件发生率降低23%,说明控制TC浓度可延缓冠心病的发生。同时再狭窄与血脂有关也已在动物实验中被证实 [4] 。本研究结果发现多沙唑嗪能明显降低胆固醇,增高高密度脂蛋白,并对低密度脂蛋白产生有利影响。同时还发现多沙唑嗪组血管内膜下脂质堆积亦明显减少,提示多沙唑嗪抑制了动脉粥样硬化的进一步发展。这说明除了能够降低血脂以外,多沙唑嗪还通过抑制脂质在内膜下堆积,减缓动脉粥样硬化而预防再狭窄。本研究发现多沙唑嗪治疗28天可以使血清中的一氧化氮含量明显增高。NO是近年发现的新型血管活性物质,主要由内皮细胞和VSMC分泌,由左旋-精氨酸经一氧化氮合酶的作用而生成。具有舒张血管,抑制VSMC增殖的作用。有关多沙唑嗪对一氧化氮的影响的研究尚不多见。Tojo等 [5] 在研究中发现,多沙唑嗪在降压过程中可以增强肾脏组织切片中的NOS活性,增加NO的产生。杨君等 [6] 研究发现高血压患者的肠系膜动脉VSMC具有分泌NO的功能,服用多沙唑嗪的患者其肠系膜动脉VSMC分泌的NO明显增加。本研究结果与国内外的报道相符。现有研究已经证实NO能对再狭窄有防治作用。NO主要通过抑制VSMC增殖、抑制血小板粘附和聚集、抑制白细胞粘附和影响血管重塑而起作用 [7] 。Sato等 [8] 研究发现NO供体药是通过上调细胞周期蛋白依赖性抑制剂p27和p21,延长细胞周期而抑制SMC增生的。NO能直接抑制VSMC增殖是通过cGMP依赖性途径实现的。NO通过cGMP途径激活依赖性蛋白激酶,抑制有丝分裂活化蛋白激酶(MAPK)途径,或抑制Raf21的活化,从而干预表皮生长因子(EGF)激活的信号转导途径,使细胞周期依赖性蛋白激酶抑制剂p27和p21的表达上调,抑制Rb蛋白磷酸化,使VSMC停滞在G 0 期,使细胞周期在G 1 期受阻,从而导致SMC增殖受抑。综上所述,本研究表明多沙唑嗪控释片可以减轻PTCA术后的血管狭窄,改善血管重塑。其机制可能与降低血浆总胆固醇,升高血浆高密度脂蛋白,抑制血管动脉粥样硬化的进展,增高血清一氧化氮含量,通过cGMP依赖性途径上调p27和p21的表达,抑制Rb蛋白磷酸化,使VSMC在G 1 期受阻,抑制血管平滑肌细胞增殖有关。

    参考文献

    1 Gottsauner W,Moliterno DJ,Lincoffam AM,et al.Restenosis-An open file.Clin Cardiol,1996,19(3):347-356.

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    3 Kannel WB.Serum cholesterol lipoproteins and the risk of coronary heart disease.Frammimghan study.Ann Inter Med,1997,74(5):1-6.

    4 李俊峡.降血脂药的预防再狭窄作用.日本医学介绍,1997,18(7):317.

    5 Tojo A,Kobayashi N,Kimura K,et al.Effects of antihypertensive drugs on nitric oxide synthase activity in rat kidney.Kidney Int Suppl,1996,55(1):138-140.

    6 杨君,秦永文.多沙唑嗪对高血压患者动脉血管平滑肌细胞NO产生的影响.山东医药,2001,41(22):15-16.

    7 Kintscher U,Kon D,Wakino S,et al.Doxazosin inhibits monocyte chemotactic protein1-directed migration of human monocytes.J Car-diovasc Pharmacol,2001,37(5):532-539.

    8 Sato J,Nair K,Hiddinga J,et al.eNOS gene transfer to vascular smooth muscle cellsinhibits cell proliferation via upregulation of p27and p21and not apoptosis.Cardiovasc Res,2000,47(4):697-706.

    作者单位:650031昆明医学院第一附属医院心内科

作者: 卢竞前 曹晶茗 符明龙等 2005-8-4
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