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【关键词】 银杏叶 微乳 TLCS 指纹图谱
Study of microemulsion TLC detection of ginkgoleaves extractand injection solution
Liu Zhen，Liang Bing，Zhao Zhigang，et al.
Chemical School，Sichuan University，Chengdu610065.
【Abstract】 Objective To built a microemulsion-TLC detection method for Ginkgoleaves extract and injec-tion.Methods We used microemulsion as an eluent on a polyamide film，took photos of TLC by a digital camera，then got chromatographicprofiles by a digital-imaging software，and scanned the developed TLC film by CAMAGTLC3scanner.Results Compared with a general mobile phase，a microemulsion improved obviously separation efficacy.Chromatographic profiles obtained by a digital imaging software were much similar to those obtained by CAMAG TLC3scanner.Conclusion The microemulsion TLC of Ginkgoleaves could reveal the relation between the herb and its in-jection，with good separation and reliability，gave reference to the construction of fingerprint in quality control.
【Key words】 ginkgoleaves microemulsion TLC fingerprint
薄层色谱的展开剂多为有机溶剂，而微乳液作为新的展开剂，分离效果好，斑点多而清晰、不拖尾、Rf大于0.8的组分斑点不扩散，Rf小于0.2的组分仍能清楚辨认 ［1］ 。微乳液还能增强斑点的荧光强度，提高灵敏度。已应用于氨基酸 ［1］ 及黄酮类成分分析 ［2］ 。
经典的薄层色谱靠目视进行半定量分析，或刮下斑点，用溶剂溶出组分，再作定量测定，操作繁琐，误差大。薄层扫描色谱解决了上述问题，定量的准确度、精密度明显提高。但专业薄层扫描色谱仪昂贵，国内还未能普及。而性能良好、价廉的办公扫描仪和数码相机，结合数字图像技术，就可解决平面图像的数字化。我们基于数字图像技术、开发了利用办公扫描仪或数码相机进行平面色谱定性、定量分析的数字图像软件 ［3］ ，已为实际应用证明 ［4～6］ ;改进后的软件 ［7，8］ 还能进行中药平面色谱指纹图谱相似度的计算与评价、点阵图像测定。
银杏叶提取物具有扩张血管，增加血流量，改善微循环，清除自由基，拮抗血小板活化因子的作用。目前报导的银杏叶注射剂指纹图谱均采用HPLC方法，未见薄层色谱指纹图谱的报导。本文研究建立银杏叶及其注射剂的微乳薄层色谱分析法，探讨其应用于指纹图谱的可能性，考察使用数字图像软件与CAMAG薄层色谱扫描仪所得扫描结果的吻合程度。
1 仪器和药品
层析缸（25×20cm 2 ）;ZF—Ⅱ型四用紫外分析仪（上海顾村电光仪器厂）;KQ2200B型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）;微量进样器（上海医用激光仪器厂）;色谱用聚酰胺薄膜（台州四青生化材料厂）;OLYMPUS-X-200数码相机，300万像素;CAMAG TLC SCANNER3薄层色谱扫描仪;银杏叶注射剂（黑龙江珍宝岛制药有限公司）;芦丁（中国药品生物制品检定所）;十二烷基磺酸钠（SDS），分析纯;所用溶剂均为分析纯。
2 方法
2.1 供试品的制备 银杏叶提取液供试液:参照文献 ［9］ ，1g银杏叶粉末，用50%乙醇10ml室温下超声浴提取2h，定量滤纸过滤后备用。银杏叶注射剂供试液:取银杏叶注射剂加甲醇适量备用。
2.2 对照品溶液制备 TLC芦丁对照溶液（1mg/ml）制备:用万分之一电子天平精密称取10mg芦丁标准对照品，以甲醇溶解，10ml容量瓶定容。
2.3 薄层色谱实验
2.3.1 微乳液展开剂的配制 按SDS、正丁醇、正庚烷的质量比为3.9∶5.2∶0.9称取各种试剂共10g，混合后加30g水搅拌溶解，静置24h制得微乳液，再加体积百分比8%的甲酸配成展开剂。
2.3.2 点样及展开 用微量注射器将2μl银杏叶提取液、2μl注射剂供试液及1μl芦丁对照溶液带状点样于聚酰胺薄膜上，用微乳展开剂展开8cm，1%AlCl 3 显色、晾干。
2.3.3 获取积分轮廓 参照中药注射剂指纹图谱研究的技术指南（试行），在365nm紫外灯下用300万像素数码相机照相，用积分软件获得荧光色谱轮廓图;或用CAMAG TLC SCANNER3扫描仪获取色谱轮廓，365nm检测波长，荧光方式，反射式直线扫描，狭缝宽5mm。
3 结果与讨论
3.1 流动相的选择 对文献报导的硅胶，传统有机展开剂的薄层色谱方法作优化，最多仅得到6个斑点。以微乳液作流动相在聚酰胺薄膜上展开，经优化最多获得了15个斑点。分离效果显著提高，斑点清晰集中，不拖尾。微乳液展开剂挥发性小，不需预饱和。微乳液结构与含水量有关。含10%和30%水时，形成水/油（W/O）型微乳液;含50%水时，为W/O型和油/水（O/W）型的混合物;含水70%以上时，为O/W型结构 ［10］ 。加入甲酸可改变展开剂的酸度及极性，试验了含水15%～90%的微乳液中分别加入体积比5%、8%、10%、15%的甲酸，发现含水75%的微乳液加入8%甲酸配成的展开剂所得的色谱展开斑点清晰集中。故选取含水75%的微乳液加入8%甲酸为展开剂。
3.2 斑点积分轮廓方法比较 银杏叶提取液荧光色谱积分轮廓如图1所示，CAMAG薄层扫描仪扫描得到15个峰（曲线a），其中11号峰为芦丁，7号峰为肩峰;软件积分所得轮廓（曲线b）及峰数与CAMAG的基本一致、仅7号肩峰未显现。银杏叶注射液荧光色谱积分轮廓如图2，CAMAG扫描仪扫描得到13个峰（曲线a），其中9号峰为芦丁;数字图像软件积分所得轮廓（曲线b）及峰数与CAMAG的非常接近，仅6号肩峰未显现、13号峰极弱。银杏叶提取液色谱包括了注射液所有峰，注射剂在Rf0.08和0.23处的峰比提取液弱，说明银杏叶药材与制剂间的相关性。与薄层扫描仪相比，软件法的分辨率和灵敏度略低，可能是因紫外灯单色性及强度有限。但软件法更便捷，所需设备廉价。改善灯性能便可能提高分辨率和灵敏度（图3）。
3.3 共有峰信息 选取分离清晰，峰高稳定的峰作为银杏叶药材和注射剂的共有峰10个（如图4）。以参照物芦丁的峰高作为1，以CAMAG扫描仪积分结果计算各共有峰的相对峰高，结果如表1。表1 银杏叶药材、注射剂共有峰参数
3.4 方法学考察 在10℃、15℃及20℃下色谱展开，所得结果各峰Rf值相一致，表明本法对温度稳定。银杏叶提取液和注射液供试液各在同一张薄膜上点6个样，荧光色谱用薄层色谱扫描仪积分，所得峰的Rf值及峰高RSD<5%。银杏叶提取液和注射液供试液各在6张薄膜上点样，用薄层色谱扫描仪积分所得峰的Rf值及峰高RSD<5%。取银杏叶同法6次制备提取液供试液，其荧光色谱用薄层色谱扫描仪积分所得峰的Rf值及峰高RSD<5%。本实验未能收集到不同批次的药材和制剂作评价，仅作为方法学讨论。本方法分离效率、精密度和稳定性良好，可作为建立指纹图谱的方法参考。（本文图片见附页1）
参考文献
1 田大听.一种新的展开剂用于氨基酸的薄层色谱分析.色谱，2003，21（1）:91.
2 康纯.微乳薄层色谱用于黄酮类成分分离鉴定的研究.药物分析杂志，2000，20（2）:121.
3 何瑾.办公用扫描仪在分析化学中应用的基础研究.四川大学学报，2003，35（2）:68.
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5 毛雪华.含朱砂中成药中锌、镉、钴、镍的薄层扫描色谱.西南民族学院学报自然科学版，2004，（3）:299.
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7 敬小丽.数字图像处理技术在平面色谱中应用的研究.西南民族学院学报自然科学版，2004，（3）:295.
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10 梁淑芳.山楂黄酮的薄层色谱分离鉴定研究.林产化学与工业，2003，23（4）:86.
作者单位:610065四川大学化工学院（通讯作者）
610041西南民族大学化学与环境保护工程学院