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【摘要】 目的 观察使用3种中草药牙膏刷牙对口臭病原菌-厌氧菌生长的影响。 方法 40名受试者按照所用牙膏的不同分成3个中草药组、普通牙膏组和不使用牙膏组，分别收集他们刷牙前后的唾液进行细菌学培养，比较厌氧菌数量（CFU读数）的变化情况。 结果 3个中草药组和普通牙膏组刷牙后的CFU读数均显著降低（P<0.05），且中草药组与普通牙膏组之间差异有显著性（P<0.05）。 结论 中草药牙膏的抑菌作用使口腔内厌氧菌的生长受到一定抑制，提示今后将中草药牙膏作为口臭治疗方法之一具有可行性。
【关键词】 口臭;牙膏;厌氧菌
The effect of Chinese herb toothpaste on pathogenic bacteria of halitosis
YE Wei，FENG Xi-ping，PANYing.
Department of Preventive Dentistry，Ninth People's Hospital，Shanghai Sec-ond Medical University，Shanghai200011，China.
【Abstract】 Objective To evaluate the effect of three Chinese herb dentifrices on the growth of pathogenic bacteria of halitosis.Methods 40subjects were divided into5groups，including3test groups and2control groups.Saliva was collected before and after brushing and incubated in anaerobic cabinet.After cultivation，bacteria were counted.Results The reduction of anaerobic bacteria growth between test and control groups was significantly different.Brushing with dentifrice made a significant reduction.Chinese herb dentifrices have a greater effect than normal denti-frice.Conclusion The antibacterial ability of Chinese herb dentifrices inhibited the growth of anaerobic bacteria in oral cavity，so these Chinese herb dentifrices can be adopted in halitosis therapy.
【Key words】 halitosis;toothpaste;anaerobic bacteria
口臭又称口气，是一种令人精神痛苦的常见疾病，严重影响患者的日常交际，导致生活质量下降。除了患一些系统性疾病或感染时可以引起口臭外，大部分情况下其产生是由口腔内细菌的蛋白质腐败作用所致 ［1］:存在于牙菌斑、唾液及舌面等处的细菌分解蛋白质，代谢氨基酸产生挥发性硫化物（volatile sulfur compounds，VSC），形成难闻的口腔异味。细菌生化学实验揭示，口腔中的革兰阴性厌氧菌主要参与了这一过程，蛋白质经细菌水解后，释放多种含硫氨基酸（包括半胱氨酸、胱氨酸、蛋氨酸等），进一步分解成为VSC。因此，通过采取措施来减少口腔内细菌特别是厌氧菌的数量，能有效地减轻口臭症状，这一点已得到许多实验的证实 ［2，3］ 。本试验的目的在于观察使用几种中草药牙膏刷牙前后，口臭病原菌-厌氧菌生长的变化情况，从而了解中草药牙膏在今后口臭临床治疗方面的应用前景。
1 材料与方法
1.1 试剂 SDA（Sulfide Detection Agar）培养基，主要成分为CDC厌氧血琼脂、硫酸亚铁、硫代硫酸钠。
1.2 仪器 超净工作台（SDB-2型，上海净化设备厂），厌氧培养箱（bug box dual，UK）。
1.3 试验对象 40名试验对象由22位男性及18位女性组成，均为在校大学生，随机分成5组，每组8人。其中3组为试验组，分别使用3种中草药牙膏（草珊瑚牙膏、合芳草牙膏、洁银牙膏，以下简称中草药A、B、C组），2组对照组中一组用普通牙膏（留兰香牙膏），另一组只用清水刷牙而不用牙膏（空白对照）。
试验对象研究期间不参与其他临床研究试验，并推迟任何口腔治疗活动。研究期间不能使用漱口液、药物。
1.4 细菌采集及培养 受试者被要求于试验当天早晨起床后（7点左右），不能刷牙、漱口及进食，用3ml生理盐水仰头含漱30s后吐在消毒平板内，接着吃早饭和用指定的牙膏、牙刷刷牙，中午11点再收集一次漱口液。
取100μl受试者漱口液，稀释10 5 倍后吸取50μl接种在SDA培养基上，37℃厌氧条件下培养72h后读取细菌菌落数（colony forming units，以下简称CFU）。
1.5 统计学方法 所有数据输入SAS软件数据库进行处理分析，受试者自身刷牙前后厌氧菌CFU读数的变化情况用配对t检验进行比较，各组之间有无差异采用方差分析统计。
2 结果
2.1 刷牙前、后各组的厌氧菌CFU读数结果见表1，试验前各组CFU值经方差统计无显著差异，说明基线可比。刷牙后除了不用牙膏的一组外，其余各组刷牙后CFU值均有所下降，并与刷牙前相比差异有显著性（P<0.05）。
2.2 3个试验组与两对照组之间的比较如表2所示，方差分析显示:试验组与对照组的CFU值降低程度之间存在差异显著性，说明使用牙膏同仅用清水刷牙相比能有效地减少口腔内厌氧菌的数量，而中草药牙膏组的效果比普通牙膏更好。
表1 每组刷牙前后厌氧菌CFU值自身比较（略）
表2 试验组与对照组间CFU降低值比较（略）
注:A表示差异无显著性（P>0.05），B表示差异有显著性（P<0.05）
3 讨论
体外实验显示:口腔中的一些革兰阴性厌氧菌能够分解蛋白质产生硫化氢（hydrogen sulfide，H 2 S）和甲硫醇（methyl mercaptan，CH 3 SH）这两种挥发性硫化物。Persson等 ［4］ 的研究发现，消化链球菌属、优杆菌属、新月形单胞菌属、拟杆菌属和梭杆菌属中的部分细菌能利用L-半胱氨酸产生硫化氢，而梭杆菌属、拟杆菌属、卟啉菌属和优杆菌属中的一些细菌可以通过代谢L-甲硫氨酸产生甲硫醇。硫化氢和甲硫醇这两种气体构成了口腔内挥发性硫化物的90%以上，同时也是口臭的主要成分。
体内实验亦证实口臭是一种细菌性疾病。De Boever等 ［5］ 使用洗必泰漱口水治疗口臭取得了良好的效果:16名患口臭病人早晚2次用牙刷蘸洗必泰漱口水刷牙，同时将漱口水含漱60s。1周后再次检测病人的口气值（VSC值）以及进行厌氧菌培养，结果与治疗前基线值相比，厌氧菌菌落数（CFU）由9.4×10 6 减少到2.4×10 6 ，下降了74%，同时口气值均值从309.4ppb下降到82.2ppb，降幅为73.3%，这一结果表明:细菌尤其是厌氧菌在口臭形成过程中起着关键作用，抑制了其生长就能减轻口臭程度。
因此，针对口臭治疗的重点在于直接消灭或减少引起口臭的病原菌，如果病原微生物的数量和菌斑成熟程度得到控制，细菌新陈代谢能力被减弱，口腔中挥发性硫化物的产生量将大为减少。因此，通过加强个人口腔卫生减少病原菌是减轻口臭症状的关键所在。可以采取的措施除了使用漱口水外，还有洁治、舌面清洁、清洁牙间隙、正确刷牙等 ［6］ 。这些措施中刷牙是患者每天都会进行的，同时也是控制菌斑的基本方法，其作用在于清除牙面和牙间隙的菌斑、软垢与食物残屑，减少口腔细菌和其它有害物质，从源头上减轻口臭。在刷牙过程中使用牙膏更能起到物理、化学和 生物学三方面作用 ［7］ :（1）物理作用是指牙膏的摩擦剂在牙刷的配合下，机械地刷除牙齿表面附着物如食物残渣、牙菌斑和软垢。（2）化学作用主要是牙膏中的洁净剂（表面活性剂）在刷牙过程中发泡，乳化、吸附牙齿及口腔内污垢，使粘附物产生溶解、分解、中和等作用而达到洁齿目的。（3）生物学作用主要是抑菌作用，牙膏中的有效成分可抑制口腔细菌尤其是病原菌的生长。例如Niles ［8］ 报道，口臭患者使用含0.3%玉洁纯（triclosan）和2%共聚体的牙膏刷牙后7h早晨口气值可降低65%，并在继续使用期间维持较低的口气值，说明连续使用含抑菌成分的牙膏对口臭有一定的疗效。
本试验结果显示，刷牙后短时间内3个中草药牙膏组和普通牙膏组的厌氧菌CFU值都有明显下降，由此可以推断:经过刷牙动作的机械清除以及牙膏的物理、化学作用，口腔内细菌的数量降低，而所选用的3种中草药牙膏可能因含有具备一定抑菌功效的中草药成分，所以比普通牙膏体现出了更好的抑菌效果。
此次研究从细菌学角度证实了中草药牙膏对引起口臭的病原菌-厌氧菌有一定抑制作用，提示今后将我国传统的中草药药物应用于口臭临床治疗具有可行性。
【参考文献】
1 Nachnani S.Oral malodor:a brief review.CDHA J，1999，14（2）:13-18.
2 Robert W.Breath effects of three marked dentifrices;A comparative study evaluating single and cumulative use.J Clin Dent，1998，9（4）:83-88.
3 Loesche WJ.Microbiology and treatment of halitosis.Microbiology and Treatment of Halitosis.Curr Infect Dis Rep，2003，5（3）:220-226.
4 Persson S，Edlund MB，Claesson R，et al.The formation of hydrogen sulfide and methyl mercaptan by oral bacteria.Oral Microbiol Immunol，1990，5（4）:195-201.
5 De Boever，Loesche W J.Assessing the contribution of anaerobic mi-croflora of the tongue to oral malodor.J Am Dent Assoc，1995，126:1384-1393.
6 Yaegaki K，Coil JM，Kamemizu T，et al.Tongue brushing and mouth rinsing as basic treatment measures for halitosid.Int Dent J，2002，52:192-196.
7 李刚.临床口腔预防学.西安:世界图书出版西安公司，2000，228-229.
8 Niles HP，Vazquez J，Rustogi KN，et al.The clinical effectiveness of a dentifrice containing triclosan and a copolymer for providing long-term control of breath odor measured chromatographically.J Clin Dent，1999，10（4）:135-138.
作者单位:200011上海，上海第二医科大学附属第九人民医院口腔预防科