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【摘要】 目的 研究桃红四物汤对小鼠脑缺血缺氧的保护作用及抗血栓作用。 方法 采用胶原蛋白-肾上腺素诱发小鼠体内血栓形成实验法、脑毛细血管通透性实验法及结扎双侧带迷走神经的颈总动脉法，观察桃红四物汤对血栓形成的抑制作用及对脑缺血缺氧小鼠存活时间和脑毛细血管通透性的影响。 结果 桃红四物汤在偏瘫发生率上比对照组分别低18.2%和33.3%;恢复率分别高17.8%和23.3%;死亡率分别低10.9%和8.9%，能明显延长急性脑缺血模型小鼠的存活时间（P<0.01），可显著降低急性脑缺血模型小鼠脑毛细血管伊文思蓝的渗出量（P<0.01）。 结论 桃红四物汤对小鼠脑缺血缺氧有一定的保护作用。
【关键词】 桃红四物汤;脑缺血缺氧;小白鼠
桃红四物汤源自《医宗金鉴》，由桃仁、红花、当归、川芎、赤芍、生地组成，其功效为养血活血，临床多应用于血瘀证的治疗，具有较好的疗效，已为中医临床广泛使用的活血化瘀方剂之一。为了进一步探讨该方的药理作用，我们进行了该方药对小鼠急性脑缺血缺氧的保护作用及抗血栓作用的实验研究，现报告如下。
1 材料与方法
1.1 实验动物 NIH小白鼠，由广州中医药大学实验动物中心提供。
1.2 实验药品 （1）盐酸Adr注射液，批号:960405，规格:1mg/ml。（2）胶原蛋白，批号:9007-34-5，规格:1g/瓶，SIGMA CHEMCALCO。（3）甲酰胺，批号:971013，规格:500ml/瓶。（4）伊文思兰，批号:87-04-01，FLUKa进口分装，上海化学试剂采购供应站分装厂产品。（5）肾上腺素，批号03030441，规格1mg/ml，北京市永康药业有限公司。（6）桃红四物汤（桃仁9g，红花6g，当归9g，川芎9g，生地9g，赤芍9g，均购自广州中医药大学第一附属医院药房），用水煎煮成200%浓度。实验用量为临床日用量的4、2个等效量（按体表面积计算）。高剂量组为原方剂量（设人体重60公斤）的32倍，即每27.2g生药/kg体重，中剂量组为原方剂量的16倍，即每13.6g生药/kg体重。实验时用蒸馏水稀释成所需浓度。
1.3 实验仪器 （1）7200型分光光度计，产品标准号:Q/TKEI-04，龙尼柯（上海）仪器有限公司。（2）电热恒温水温箱，型号:HH·W21·600，上海医用恒温设备厂。（3）医用离心机，型号:LDZ5-2，北京医用离心机厂。
1.4 实验方法
1.4.1 对胶原蛋白-Adr诱发小鼠体内血栓形成的抑制作用 选用25～35gNIH雄小鼠33只，随机分为3组:生理盐水组、桃红四物汤高剂量组以及中剂量组。按20ml/kg体重灌胃给药，每天1次，连续10天，末次药后12h，按胶原蛋白-Adr诱发小鼠体内血栓形成实验法 ［1］ ，给各组小鼠尾静脉注射胶原蛋白（225μg/只）与Adr（9μg/只）的混合诱导剂，注射后立即观察15min内小鼠的偏瘫发生率、恢复率及死亡率。
1.4.2 对急性脑缺血性模型小鼠脑毛细血管通透性的影响 选用25～35gNIH雄小鼠40只，随机分为4组:生理盐水组（假手术组）、模型组、桃红四物汤高剂量组以及中剂量组。按20ml/kg体重灌胃给药，每天1次，连续10天，末次药后12h，按脑毛细血管通透性实验法 ［2］ ，用戊巴比妥腹腔注射麻醉，分离双侧颈总动脉，其中3组用丝线结扎双侧带迷走神经的颈总动脉造成急性脑缺血性模型，在结扎前5min给各组小鼠尾静脉注射伊文思兰50mg/kg。假手术组操作与模型组相同，但不结扎双侧颈总动脉，整个手术过程把小鼠置于36℃环境中。术后1h断头处死动物，解剖取出脑组织，分别浸泡于甲酰胺溶液中，于45°恒温箱中温育72h，离心，取上清液于620nm进行比色。
1.4.3 对急性脑缺血模型小鼠存活时间的影响 选用25～35gNIH雄小鼠40只，随机分为4组:生理盐水组（假手术组）、模型组、桃红四物汤高剂量组以及中剂量组。按20ml/kg体重灌胃给药，每天1次，连续10天，末次药后12h，按结扎双侧带迷走神经的颈总动脉法 ［3］ ，戊巴比妥腹腔注射麻醉，分离双侧颈总动脉，其中3组用丝线结扎双侧带迷走神经的颈总动脉造成急性脑缺血性模型，在结扎前5min给各组小鼠尾静脉注射伊文思兰50mg/kg。假手术组操作与模型组相同，但不结扎双侧颈总动脉，整个手术过程把小鼠置于36℃环境中。然后逐一观察小鼠的存活时间。
1.5 统计学方法 所有实验数据用SPSS10.0统计学软件进行分析。
2 结果
2.1 对胶原蛋白-Adr诱发小鼠体内血栓形成的抑制作用 结果显示，与对照组相比，虽差异无显著性（P>0.05），但高、中剂量组在偏瘫发生率上比对照组分别低18.2%和33.3%;恢复率分别高17.8%和23.3%;死亡率分别低10.2%和8.9%。表明桃红四物汤对胶原蛋白-肾上腺素诱发小鼠体内血栓有一定抑制作用。结果见表1。
2.2 对急性脑缺血模型小鼠存活时间的影响 结果显示，与对照组相比，模型组存活时间差异有显著性（P<0.01），显示造模成功;与模型组相比，桃红四物汤高、中剂量组均能明显延长急性脑缺血模型小鼠的存活时间（P<0.05～0.01），结果见表2。表1 对胶原蛋白-Adr诱发小鼠体内血栓形成的抑制作用 （略）表2 对急性脑缺血模型小鼠存活时间的影响 （略注:与对照组比较， ** P<0.01;与模型组比较， △ P<0.05， △△ P<0.01
2.3 对急性脑缺血模型小鼠脑毛细血管通透性的影响 结果显示，桃红四物汤高、中剂量组均可显著降低急性脑缺血模型小鼠脑毛细血管伊文思蓝的渗出量，与模型组比较P<0.01。表明桃红四物汤能降低急性脑缺血模型小鼠脑毛细血管的通透性。结果见表3表3 对急性脑缺血模型小鼠脑毛细血管通透性的影响 （略）
注:与对照组比较， * P<0.05;同剂量组比较， ## P<0.01;与模型组比较， △△ P<0.01
3 讨论
本实验研究表明桃红四物汤能明显抑制小鼠体内血栓形成，并对小鼠脑缺血缺氧有显著的保护作用。
胶原蛋白-Adr是一种混合诱导剂，该药能降低血管活性物质的释放，促进红细胞及血小板的聚集，减缓血流速度，使血液处于粘滞状态，从而形成血栓。实验结果表明桃红四物汤能拮抗胶原蛋白-Adr诱导血栓形成的作用，起到抗血栓的药理作用。现代药理研究发现，川芎内含川芎嗪，赤芍含赤芍苷，这些成分均能降低血液粘稠度，促进纤溶酶系统的活性 ［4］ ，而红花及桃仁中含有黄酮类多聚体成分，能延长凝血酶原时间，使出血时间延长 ［5］ ，起到抗凝血作用，这与全方有抗栓作用相符。 小鼠颅内脑血管之间有吻合支，单独结扎双侧颈总动脉不出现明显脑缺血症状，当将迷走神经和颈总动脉一起结扎时，则迷走神经受到刺激引起血压下降，使脑供血中断，脑血流量明显减少，可加重脑缺血，形成急性脑缺血模型 ［6］ ，此时脑中原有的血液和营养物质只能使脑功能维持短时间直至死亡。表2结果发现桃红四物汤能明显延长小鼠的存活时间，表明该方可能通过提高脑微血管内皮细胞及星形神经胶质细胞等神经细胞的耐氧性，降低脑耗氧量，抑制脑毛细血管通透性，减轻神经功能的缺损，起到保护脑功能的作用。
据相关文献报道 ［7］ ，脑缺血再灌注后可通过多种途径激活补体系统，补体活化裂解后产生单片段C5a是强烈的白细胞趋化因子，激活白细胞，导致其浸润聚集，产生大量的蛋白水解酶、氧自由基和其他效应分子，破坏脑毛细血管内皮细胞及其基底膜，使血脑屏障通透性发生明显改变。伊文思蓝是一反映脑血管通透性的指示剂，正常情况下不易通过血脑屏障，但一旦血脑屏障受到破坏时，易于进入脑组织。表3结果发现桃红四物汤中高剂量组的伊文思兰含量比模型组明显减少，提示该方能降低脑微血管的通透性，表明该活血化瘀药方可能通过调节激活补体系统和抑制自由基的释放及损害作用，有拮抗脑缺血脑屏障损伤的作用，起到具有保护血脑屏障的作用。
在临床应用中，桃红四物汤对于脑部疾病主要用于偏头痛 ［8］ 、血管性头痛等头痛疾病 ［9］ ，但对急性脑血管疾病的报道较少，希望通过本次实验能为该方的临床应用提供实验依据。
【参考文献】
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6 汪宁，刘青云，彭代银，等.通窍活血汤对小鼠脑缺血缺氧保护作用的研究.中国中医药科技，2003，10（6）:339-340.
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8 陆克勤，杨燕敏.桃红四物汤加减治疗偏头痛临床观察.河北中医，2000，22（12）:890-891.
9 王兴权，郭卫东，高士云.桃红四物汤加减治疗血管性头痛30例.山东中医杂志，1997，16
（6）:250-251.
作者单位:1510405广东广州，广州中医药大学一院七年制2000级
2广东广州，广州中医药大学药理教研室（指导老师）
（编辑:罗 彬）