高效液相色谱法测定注射用灯盏花素中野黄芩苷的含量

    【摘要】 目的  为注射用灯盏花素提供质量控制方法。 方法  采用Nova-Pak C 18 柱，流动相醋酸溶液（1→100）∶甲醇（60:40），检测波长320nm。反相高效液相色谱法测定灯盏花素注射剂中灯盏花素含量。 结果  线性范围1～10μg/ml（r=0.9995），加样回收率99.25%（RSD=0.95%，n=6）。 结论  采用反相高效液相色谱法测定注射用灯盏花素中野黄芩苷的含量，具有测定准确、重现性好、操作简便等优点。据本品3批测定数据，规定其含量限度应为标示量的90.0%～10.0%。

    【关键词】  注射用灯盏花素;野黄芩苷;反相高效液相色谱
      
    【Abstract】Objective To establish a RP-HPLC method to determine breviscapine injection.Method Breviscapine injection was determined by WATERS HPLC instrument on a Nova-Pak C18column with a mobile phase of acetic acid（1→100）of methanol-aqueous solution（60:40）.Detection wavelength was320nm.Flow rate was1.0ml/min.Results The calibration curve was linear（r=0.9995）within the range of1～10μg/ml，the average recovery was99.25%（RSD=0.95%，n=6）.Conclusion The RP-HPLC method is simple reliable and accurate，suitable for the quantity control of the breviscapine injection.

    【Key words】 breviscapine injection;scutellarin;RP-HPLC（high-performance liquid chromatography）

　　注射用灯盏花素为中药注射用粉针制剂，具有活血、祛瘀、通络止痛、扩张血管作用及对抗脑垂体后叶素所致缺血缺氧。主要用于治疗脑梗死、中风、风湿痛、冠心病及心绞痛等。其主要有效成分为野黄芩苷。部颁标准中其有关物质采用HPLC法，含量采用测定紫外分光光度法。本实验采用HPLC法，对灯盏花素注射液进行野黄芩苷的含量测定。现报告如下。

　　1 材料

    样品和试剂:注射用灯盏花素（昆明龙津药业有限公司制）。所用甲醇为色谱纯。醋酸为分析纯。对照品:野黄芩苷（中国药品生物检定所，批号842-200102，含量96.4%）;仪器:Waters2695Separations Module高效液相色谱仪;Waters photodiode Array Detection紫外检测器。

    2 方法和结果 ［1～4］

　　2.1 色谱条件 色谱柱:Nova-Pak C 18 柱（3.9×150mm）。流动相:醋酸溶液（1→100）∶甲醇（60:40），流速1ml/min，柱温30℃，检测波长320nm。进样量20μl。

    2.2 系统适用性 取野黄芩苷对照品溶液，进样5次，浓度分别为0.96μg/ml、2.4μg/ml、4.8μg/ml、7.2μg/ml、9.6μg/ml，分别计算理论板数。理论板数按野黄芩苷峰计算、不得低于2000（RSD=2.89%.n=5）。

　　2.3 样品制备

    2.3.1 对照品贮备液的制备 精密称取野黄芩苷对照品2.5mg，置25ml量瓶中，加甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，即得（含2.41mg野黄芩苷），备用。

    2.3.2 对照品溶液的制备 精密吸取对照品贮备液50μl，置50ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。

    2.3.3 供试品贮备液的制备 精密称取注射用灯盏花素一定量，置100ml容量瓶中，加入甲醇1ml溶解并稀释至刻度，摇匀.供试品溶液的制备:精密吸取对照品贮备液50μl，置5ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。

    2.4 线性试验 取上述野黄芩苷对照品溶液，分别进样10、25、50、75、100μl，结果表明在1～10μg/ml范围内。具有良好线性关系。回归方程:Y（峰面积）=27746.4196X（μg/ml）+1670.0732，r=0.9995，n=5。

    2.5 空白试验 对不加入注射用灯盏花素的空白试液.依反相高效液相色谱法测定，结果未见干扰。

    2.6 精密度 取样品（20041014），依反相高效液相色谱法测定5次，结果平均含量为99.75%（n=5，RSD=1.71%）。

　　2.7 重复性试验 取样品（20041014）6份，依反相高效液相色谱法重复测定6次，结果平均含量为99.67（n=6，RSD=2.31%）

    2.8 加样回收试验 精密吸取样品（20041214），共9份，其中3份测定样品本底，6份各加入野黄芩苷对照品溶液（0.96μg/ml）1ml，依反相高效液相色语法测定。结果平均加样回收率为99.25%，RSD=0.95%。见表1。表1 注射用灯盏花素加样回收率试验结果（略）
  
    3 讨论

　　（1）注射用灯盏花素中除了主成分野黄芩苷外，还含有多种其他物质，从中分离纯野黄芩苷较为困难，本实验表明反相高效液相色谱法可有效地排除制剂中其他成分的干扰，保留时间在6～7min，峰型对称，方法简便，准确度高，重现性好，可作为制剂质量控制的方法之一。

　　（2）对3批注射用灯盏花素测定结果表明，本品野黄芩苷含量在96.16%～102.27%之间，均落于标示量（100±10.0）%幅度之内，故本品的含量测定限度暂订为标示量的90.0%～110.0%为宜，见表2（略）。

    （3）反相高效液相色谱法是间接测定灯盏花素的方法，其最大特点是所用对照品大多数从实验室易得，便于开展工作。但经吸潮和公式换算结果易产生一定偏差。

　　【参考文献】

    1 彭金香，赵爱华.高效液相色谱法测定灯盏花素注射液含量.天津药学，2004，16（1）:24.

    2 桂双英，周亚球.反相高效液相色谱法测定灯盏花素滴九中灯盏乙素的含量.中国中药杂志，2004，29（4）:378.

    3 张世轩，牛玉娟.HPLC法测定灯盏花素注射液中野黄芩苷.中成药，2002，24（2）:95.

    4 冯绍华，卢鹏伟.HPLC法测定灯盏花片中灯盏花乙素的含量.实用医药杂志，2004，21（10）:924.

　　作者单位:310053浙江杭州，浙江医学高等专科学校药学系

   （编辑:若 木）