点击显示 收起
【摘要】 目的 探讨急性淋巴细胞白血病（ALL）复发与P16蛋白缺失的关系。方法 采用APAAP法测P16蛋白表达。结果 在ALL中，P16蛋白缺失率，ALL初诊组和复发组显著高于正常对照组(P<0.01);而ALL 缓解组与正常人比较无差异。初诊或复发组患者P16蛋白缺失率显著高于缓解组(P<0.01);动态观察20例完全缓解患者发现,70%（14/20）患者病情复发时P16蛋白缺失率显著上升(P<0.01)，P16蛋白缺失率上升出现在骨髓细胞形态学确诊之前1个月左右。结论 P16蛋白缺失在ALL复发机制中起重要作用，动态检测完全缓解后患者P16蛋白缺失率，有利于早期诊断急淋白血病复发。
【关键词】 急性淋巴细胞白血病；P16蛋白缺失；复发；早期诊断
The study of the relation between the frequency of P16 protein inactivation and the relapse in patients with acute lymphoblastic leukemia
LU Wen-ling,WU Jia,FAN Ai-fei,et al.
Department of Hematology,Hospital of Shenzhen,University of Beijing 518036,China
【Abstract】 Objective To explore the relation of the frequency of P16 protein inactivation with relapse in patients with acute lymphoblastic leukemia(ALL).Methods With APAAP,we determined P16 protein inactivation.Results The frequency of P16 protein inactivationis higher in the relapse group and new diagnosed group than control, P＜0.01. However,the difference between CR1 and control have no statistic significance. When we determined the frequency of P16 protein inactivation in patients after complete remission , before one month of hematological relapse, P16 protein inactivation increase. Conclusion Monitor of inactivation of P16 protein can predict impending relapse of patients with ALL and profit early diagnosis of relapse.
【Key words】 acute lymphoblastic leukemia；P16 protein inactivation； relapse；early diagnosis
成人急性淋巴细胞白血病（ALL）是造血系统的恶性肿瘤，虽然完全缓解率较高，但长期生存率低，主要死亡原因是复发，因此，对ALL复发机制及预测的研究，仍然是临床上急需进行探讨的课题。P16是抑癌基因，与人类多种恶性肿瘤的发生、发展关系密切。我们检测48例ALL患者P16蛋白表达水平，旨在探讨其与ALL复发的关系及其临床意义。
1 资料与方法
1.1 一般资料 ALL组：48例系2000年1月～2004年6月北京大学深圳医院和湘雅医院血液科收治ALL患者，男30例，女18例，中位年龄31岁。均按FAB分型确诊。按初诊未治疗时WBC分组WBC>20×109/L组26例，WBC<20×109/L组22例；36例CR患者，随访了2～34个月（中位随访时间13个月），复发20例。按疾病状态分组：初诊组48例，CR组36例，复发组20例。正常组：28例为正常志愿者，男12例，女16例，中位年龄28.3岁。
1.2 方法
1.2.1 P16蛋白表达测定 取骨髓样品，用淋巴细胞分离液分离单个核细胞，用1640液洗涤并制成细胞悬液，滴片后-20℃保持备用。免疫组化方法检测P16蛋白。免疫组化试剂盒(武汉博士德生物制品公司生产)，按说明操作。阳性表达以细胞内出现明显的棕色颗粒为判断标准。P16蛋白阳性率<25%为表达缺失。
1.2.2 统计学处理 P16蛋白阳性率测定值以x±s表示，根据方差齐或不齐分别用t或t′检验。
2 结果
2.1 正常人和ALL不同病期患者P16蛋白缺失 正常人组P16蛋白无缺失，ALL患者P16蛋白缺失率，初诊、复发、完全缓解组，分别为30%、76%、11%。初诊及复发组显著高于正常人组(P＜0.01)。初诊及复发组显著高于缓解组(P＜0.01)，缓解组与正常人组比较，差异无显著性(P＞0.05)。
2.2 初诊、复发未治患者部分临床特征与P16蛋白表达 WBC>20×109/L组与<20×109/L组；肝脾肿大组与无肿大组，P16蛋白缺失率分别为：74%与28.4%;76.3%与29.6%,WBC>20×109/L组、肝脾肿大组显著增高(P＜0.05)。
2.3 20例ALL患者动态检测P16蛋白缺失率结果 动态监察了20例ALL患者从缓解到复发的演变过程中P16蛋白缺失变化。20例 P16蛋白缺失率，完全缓解时和复发时分别为10.1%、80.2%,二组比较P＜0.01,复发组显著升高，70%（14/20）在骨髓细胞形态学确诊复发之前1个月左右开始出现不同程度持续升高，在临床确诊复发时达到高峰，20例患者复发之前1个月P16蛋白缺失率(70%)，已显著高于完全缓解(10.1%)，P＜0.05。
3 讨论
虽然特异的遗传学标记指示体内的白血病细胞属于同一恶性细胞克隆，但各个细胞在分化程度和增殖周期状态均存在差别。P16基因是重要的抑癌基因，位于染色体的9P21。P16蛋白抑制细胞周期蛋白依赖性激酶（CDK）4和6，是细胞G1/S期转换的关键调控基因，它的失活引起G1期缩短，细胞周期加速，特别是DNA在没有修复前过早地进入S期，可能是细胞恶性转化的关键［3］。P16基因失活的患者骨髓细胞凋亡与无P16失活者比较明显延缓，其凋亡指数比无P16基因失活者明显降低［1］。本组结果显示，P16蛋白缺失率，ALL初诊组和复发组显著高于正常对照组, P＜0.01.WBC>20×109/L组、肝脾肿大组显著增高，提示P16缺失在ALL发病机制中起重要作用,可作为ALL预后差的重要指标。
研究表明，CML急淋变前3个月就已发生P16基因失活，检测P16基因缺失可预测CML急淋变［2］。动态监察了20例ALL患者从缓解到复发的演变过程中P16蛋白缺失变化,发现70%（14/20）患者病情复发时P16蛋白缺失率显著上升(P＜0.05)，P16蛋白缺失率上升出现在骨髓细胞形态学确诊之前1个月左右。提示P16蛋白缺失在ALL复发机制中起重要作用，动态检测完全缓解后患者P16蛋白缺失率，有利于早期诊断急淋白血病复发, 便于复发早期采取有效治疗措施，以提高治愈率。
检测P16蛋白操作简便，临床容易开展，动态检测ALL完全缓解患者P16蛋白缺失率，有利于早期诊断急淋白血病复发,但需临床更多病例进一步验证。
【参考文献】
1 陈文明，张文艺，朱嘉芷，等.急性白血病患者P16及P15基因纯合子缺失及甲基化研究.中华血液学杂志，1999，20（9）：474-476.
2 许多荣，洪文德，童秀珍，等.P16基因异常与慢性粒细胞白血病关系的研究.中华血液学杂志，1999，20（11）：602-603.
3 Tutor O,Diaz MA,Ramirez M,et al.Loss of heterozygosity of p16 correlates with minimal residual disease at the end of the induction therapy in non-high risk childhood B-cell precursor acute lymphoblastic leukemia.Leuk Res，2002，26(9):817-820.
基金项目：深圳市科技局科研基金资助（编号20004093）
作者单位：1 518036 广东深圳，北京大学深圳临床医学院内科
2 中南大学湘雅医学院血液科
(编辑：卉 梅)