高效液相色谱测定法测定盐酸精氨酸葡萄糖注射液中盐酸精氨酸的含量

　　【摘要】  目的  研究建立高效液相色谱测定法测定盐酸精氨酸葡萄糖注射液中盐酸精氨酸的含量。方法 以氨基键合硅胶为填充剂，流动相：乙腈-磷酸盐缓冲液(50：50)；检测波长：200nm；流速：1.0ml/min。结果 盐酸精氨酸在0.025～0.5mg/ml范围内与峰面积呈良好线性关系，r＝0.9998，平均回收率为99.64%(n=9，RSD=0.97%)。本方法简便、快速、准确、重现性好，可用于本品的质量控制。

　　【关键词】  高效液相色谱测定法；盐酸精氨酸；含量

　　【Abstract】  Objective  To establish a HPLC method for determination of the content of arginine hydrochloride in arginine hydrochloride and glucose injection.Methods  C-NH2 column;The mobile phase was acetonitrile-water(50：50);The detection wavelength was 200nm.The flow rate was 1.0ml/ml;The colum temperature was 40℃.Results  There was good linearity of arginine hydrochloride in the range of 0.025～0.5mg (r=0.9998 n=6).the average recovery was 99.64% (n=9，RSD=0.97%.)Conclusion  This method is simple，accurate and repeatable，and can be used for quality control of arginine hydrochloride and glucose injection.

　　【Key words】  HPLC;arginine hydrochloride;content

　　盐酸精氨酸葡萄糖注射液是我们研发的一种可直接用于静脉滴注的大容量注射剂，系国家5类新药。在2005年版《中国药典》中采用旋光法测定盐酸精氨酸的含量，由于本品中葡萄糖也具有旋光性，故不能采用旋光法测定盐酸精氨酸的含量，为此研究建立了盐酸精氨酸含量的高效液相色谱测定法。方法学实验表明，该方法可以快速准确地测定盐酸精氨酸葡萄糖注射液中盐酸精氨酸的含量。

　　1  仪器与试剂

　　1.1  仪器  高效液相色谱仪，安捷伦1100，紫外检测器。

　　1.2  试剂  盐酸精氨酸：湖北潜江市四维氨基酸有限公司，批号：050308。精氨酸对照品：中国药品生物制品检定所，批号：140685-200402(供含量测定、鉴别用)。盐酸精氨酸葡萄糖注射液：自制。乙腈：色谱纯。

　　2  方法与结果

　　2.1  色谱条件  氨基键合硅胶填充柱Shim-pack CLC-NH2(M)、NO：4256755；流动相：乙腈-磷酸盐缓冲液(50：50)；检测波长：200nm；流速：1.0ml/min；柱温40℃。理论塔板数按盐酸精氨酸计应大于2000。

　　2.2  供试品溶液制备  精密吸取盐酸精氨酸葡萄糖注射液2.0ml，置100ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀。精密吸取10ml置100ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀。

　　2.3  对照品溶液制备  精密称取经干燥的精氨酸对照品16.0mg、置200ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀。

　　2.4  测定方法  在规定色谱条件下，分别精密吸取供试液和对照品液各10μl注入色谱仪，记录色谱图(见图1)，含量按外标法以峰面积计算，所得结果与1.209相乘，即得。

　　图1  盐酸精氨酸色谱图（略）

　　2.5  线性关系测定  色谱条件：用氨基键合硅胶为填充剂；乙腈-磷酸盐缓冲液(50：50)为流动相；检测波长200nm；流速1.0ml/min。

　　精密称取精氨酸对照品10.34mg(相当于盐酸精氨酸12.50mg)，置25ml量瓶中，加流动相适量，振摇使溶解并稀释至刻度，摇匀，作为贮备液，分别精密吸取贮备液10.0ml、5.0ml、2.0ml、1.0ml、0.5ml，置10ml量瓶中，加流动相稀释至刻度摇匀，作为供试液(含贮备液)。
   
　　测定方法：在上述色谱条件下，分别精密吸取上述5个不同浓度的溶液各10μl注入色谱仪，记录色谱图，以峰面积对浓度(以相当的盐酸精氨酸计)计算回归方程并求得相关系数，见表1。

　　表1  线性关系试验结果（略）

　　试验结果表明：盐酸精氨酸在0.025～0.5mg/ml范围内与峰面积呈良好线性关系，r＝0.9998。

　　2.6  精密度测定  取上述3号样品在同一色谱条件下连续进样5次，进样量10μl，结果见表2。
   
　　试验结果表明：方法精密度良好，RSD＝0.1%

　　2.7  重复性测定  色谱条件：同线性关系测定。

　　供试品溶液制备：精密吸取盐酸精氨酸葡萄糖注射液(批号：050322)2.0ml，置100ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀；精密吸取10ml置100ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得，同法制备6份样品。

　　表2  精密度测定结果（略）

　　测定方法：在规定色谱条件下精取10μl注入色谱仪，记录色谱图，结果见表3。

　　表3  重复性测定结果（略）

　　试验结果表明：方法的重复性良好，RSD＝0.62%。

　　2.8  回收率测定  色谱条件：同线性关系测定。

　　供试品溶液制备：分别精密称取盐酸精氨酸约80mg、100mg、120mg各3份分别置100ml量瓶中，再分别称取葡萄糖约100mg加入上述量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀。精密吸取10ml置100ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀。

　　对照品溶液制备：精密称取经干燥的精氨酸对照品15.99mg置200ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀。

　　测定方法：分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液各10μl，注入色谱仪，记录色谱图，以外标法计算含量，所得结果与1.209相乘即得，结果见表4。

　　表4  回收率测定结果（略）

　　试验结果表明：本方法回收率良好。

　　2.9  溶液稳定性  精密吸取盐酸精氨酸葡萄糖注射液(批号：04111102)2.0ml，置100ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，精密吸取10ml置100ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀。

　　色谱条件：同线性关系测定。

　　测定方法：分别于0、2、3、4、5h精取10μl，注入色谱仪，记录图谱，结果见表5。
   
　　试验结果表明：供试液5h内稳定。

　　表5  稳定性测定结果（略）

　　2.10  样品测定  盐酸精氨酸葡萄糖注射液，批号：050322、050323、050324。

　　分别按“2.2、2.3”项下方法制备供试品溶液和对照品溶液，在“2.1”项色谱条件下分析，结果见表6。

　　表6  含量测定结果（略）

　　3  讨论
 
　　试验表明，高效液相色谱法测定盐酸精氨酸葡萄糖注射液中的盐酸精氨酸含量，其回收率、精密度、重现性、稳定性和线性关系均符合方法学有关要求，该方法可以作为本品质量标准中盐酸精氨酸的含量测定方法。
   
　　本方法的检测波长为200nm，虽为紫外短波长，但只要所用试剂和水的纯度符合要求，在该波长下也能获得较好的色谱图，且不受杂峰干扰的影响。
   
　　试验还表明，若以纯水稀释样品，色谱图中溶剂峰较大且不稳定，以流动相为稀释剂无此干扰。
   
　　因该试验是为国家级新药研究制定的含量测定方法，故样品测定结果未与已有方法进行比较。

　　(编辑：黄  杰)

　　作者单位： 250022 山东济南，济南军区药品检验所