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Home医源资料库在线期刊中华实用医药杂志2006年第6卷第1期

端粒酶活性在宫颈组织标本中的表达及意义

来源:中华实用医药杂志
摘要:【摘要】目的探讨端粒酶活性在宫颈组织标本中的表达及意义。方法应用端粒重复扩增方法对28例慢性宫颈炎、33例宫颈上皮内瘤样变(CIN)、43例宫颈癌标本进行端粒酶活性测定。结果慢性宫颈炎、CIN、宫颈癌标本中端粒酶活性阳性表达率分别为3。CINⅠ-Ⅲ期标本中端粒酶活性阳性表达率分别为18。...

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  【摘要】  目的  探讨端粒酶活性在宫颈组织标本中的表达及意义。方法  应用端粒重复扩增方法对28例慢性宫颈炎、33例宫颈上皮内瘤样变(CIN)、43例宫颈癌标本进行端粒酶活性测定。结果  慢性宫颈炎、CIN、宫颈癌标本中端粒酶活性阳性表达率分别为3.6%、36.4%、88.4%。CINⅠ-Ⅲ期标本中端粒酶活性阳性表达率分别为18.2%、20.0%、75.0%。结论  端粒酶活性可能和宫颈癌的发生有关,与宫颈病变级别呈正相关。

  【关键词】  端粒酶; 宫颈上皮内瘤样变; 宫颈癌
  
  Expression and significance of telomerase activity in uterine cervical tissue samples

  LI Han-mei.

  Department of Obstetrics and Genecology,Women and Children Hospital and Health Institute of Changsha Changsha,Hunan 410000,China

  【Abstract】  Objective  To investigate the expression and significance of telomerase activity in cervical tissue samples. Methods  Telomeric repeat amplification protocol(TRAP)was used to measure telomerase activity in cervical tissue samples.  28 with chronic cervicitis,33 with cervical intraepithelial neoplasia(CIN),43 with cervical cancer. Results  The positive rate of telomerase activity was  3.6%,36.4%,88.4% in chronic cervicitis, CIN and cervical cancer respectively.The positive rate of telomerase activity was 18.2%,20.0%,75.0%in CINⅠ-Ⅲ. Conclusion  Telomerase activity may relate to cervical cancer,which correlates well with the grade of cervical lesions.

  【Key words】  telomerase;  cervical intraepithelial neoplasia;uterine cervical cancer

  端粒酶是近年来生命科学和肿瘤学的研究热点。端粒酶是一种RNA端依赖性DNA聚合酶,其主要功能是延长端粒,而端粒的稳定是维持细胞永生化的分子基础,目前认为端粒酶的高活性在恶性肿瘤的发生发展过程中起着重要作用。端粒酶在恶性肿瘤中的这个特性使端粒酶可能会成为肿瘤诊断及预后的一个标记物,同时也成为治疗肿瘤的新靶点[1,2]。宫颈癌是女性生殖器三大恶性肿瘤之一,发病率及死亡率均较高,是严重威胁妇女生命的恶性肿瘤。本实验应用端粒重复扩增法,检测人类慢性宫颈炎、CINⅠ~Ⅲ、宫颈癌标本中的端粒酶活性的表达,并探讨端粒酶与宫颈癌发生、发展过程中的关系,为临床宫颈癌的筛查、诊断与预后提供实验依据。

  1  材料与方法

  1.1  材料  (1)标本来源于长沙市妇幼保健院妇科2003年7月~2005年2月宫颈组织活检标本。患者年龄22~55岁,经病理切片诊断为慢性宫颈炎28例,CINⅠ~Ⅲ33例(其中CINⅠ11例,CINⅡ10例,CINⅢ12例),宫颈癌43例。(2)端粒酶PCR-ELISA药盒由德国Boehringer Mannheim公司生产。

  1.2  方法

  1.2.1  将离体后的新鲜标本约0.1g剪碎后加入裂解液50ml,充分混匀。离心16000转20min后吸取上清液保存-80℃待检。

  1.2.2  取上清液2μl使用PCR扩增仪(Perkin Elmer 9600)扩增,首先25℃30s使引物TS延伸,90℃5min灭活端粒酶活性,接着按94℃30s变性,50℃30s退火,72℃90s延伸,循环30次。

  1.2.3  取PCR扩增产物5μl经变性并与特异性探针杂交后在酶标板上与抗地高辛—过氧化物酶、TMB底物等共同孵育后其结果用酶标检测仪(Bio-Rad550)测定波长450nm及参考波长630nm处的吸光度,并根据A值=A450-A630计算结果,此即为端粒酶PCR扩增产物的定量分析。在实验中同时设立阳性及阴性对照。

  1.3  统计学方法  所得实验结果经SPSS 10.0统计软件包处理。以χ2检验进行分析,P<0.05为差异有显著性。

  2  结果 

  2.1  宫颈组织活检标本中端粒酶活性的表达  以吸光度OD值>0.2判为阳性。各组间端粒酶活性的表达见表1。

  表1  宫颈组织活检标本中端粒酶活性的表达 (略)

  注:★,▲,●间两两比较P<0.01

  2.2  CIN不同分期端粒酶活性的分析  见表2。

  表2  CIN不同分期端粒酶活性的表达(略)

  注:★,▲与●比较P<0.01,★与▲比较P>0.05

  3  讨论
  
  有实验表明[3],端粒酶活化,端粒则被复制加长,从而永生化,这样恶性增殖的肿瘤细胞便形成了。反之,有实验用人端粒酶的反义核酸[4]抑制体外培养的肿瘤细胞,这些细胞在连续分裂25~26代后死亡,说明端粒酶活化的表达和调控对阐明肿瘤的形成和发展、进而应用于临床诊断和治疗有重要意义。本实验通过28例慢性宫颈炎、33例CIN、43例宫颈癌标本的端粒酶活性检测发现, 慢性宫颈炎组端粒酶活性阳性表达率为3.6%, CIN组端粒酶活性阳性表达率为18.1%,而宫颈癌组中端粒酶活性阳性表达率为79.1%,各组间两两比较P<0.01,差异有显著性。CINⅠ~Ⅲ期标本中端粒酶活性阳性表达率分别为18.2%、20.0%、75.0%、CINⅠ~Ⅱ与CINⅢ比较P<0.01,差异有显著性。与Cheah的报道相一致[5]。表明从慢性宫颈炎通过癌前病变发展成癌的过程中,随着宫颈癌变程度的发展,端粒酶活性阳性表达率呈阶段性升高。端粒酶活性与宫颈癌前病变程度及宫颈癌发生、发展的关系的一致性,说明端粒酶的异常激活可能发生在宫颈癌的早期,随病变进展,端粒酶活性表达增高。提示端粒酶可作为宫颈癌的生物学标志,用于宫颈癌的筛查、早期诊断和判断预后,并为端粒酶抑制剂的临床应用提供实验依据。但作为早期诊断的指标还有待近一步研究,则建立端粒酶活性检测体系将会更有意义。
  
  本实验检测的43例宫颈癌组织标本中,有5例端粒酶表达呈阴性。最近研究结果也表明部分肿瘤中端粒较长,随着细胞增殖端粒长度不变,而端粒酶呈阴性,说明在人类肿瘤中可能存在维持端粒长度的其他机制,值得我们进一步研究。

  【参考文献】

  1  Niiyama H,Mizumoto K,Kusumoto M,et al.Activation of telomerase and its diagnostic application in biosy     specimens from biliary tract neoplasma.Cancer, 2003,85:2138-2143.

  2  Vasef MA,Ross JS,Cohen MB.Telomerase activity in human solid tumors diagonstic utility and clinical applications.Am J Clin Pathol, 2002,112:868-875.

  3  吴成秋,陈雯,张桥,等.二甲肼诱导大鼠肠癌过程中端粒酶活性的变化. 肿瘤,2000,20(3):174-176.

  4  Feng J,Funk WD,Wang SS,et al. The RNA componet of human telomerase. Science,1995,269(5228):1236-1242.

  5  Cheah PL,Looi LM,Sivanesaratnam V.Telomerase activity and human papillomavirus infection in invasive uterine cervical carcinoma in a set of Malaysian patient. Clin Pathol,2003,55:22-26.

  (编辑:齐  永)

  作者单位: 410000 湖南长沙,长沙市妇幼保健院妇产科

 

作者: 李寒梅 2006-8-20
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