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【摘要】 目的 建立氯芬黄敏片中胆红素的含量测定方法。方法 采用高效液相色谱法［1］，Lichrospher C18柱(5μm 4．6 mmID×250cm)，以甲醇-四氢呋喃-0.5%醋酸(80：10：10)为流动相，流速1．0ml／ min，检测波长450 nm。结果 胆红素在2～10μg范围内呈良好的线性关系(r=0．9993)，平均回收率(n=5)为99．2％(RSD=1．2％)。结论 制定的含量测定方法准确，结果较为满意。
【关键词】 氯芬黄敏片； 胆红素； 高效液相色谱法
氯芬黄敏片是由双氯芬酸钠、人工牛黄、马来酸氯苯那敏等组成的复方制剂。具有清热解毒、消肿止痛功效，用于感冒引起的头痛、发热、鼻塞、流涕、咽痛、痰多等症。《国家药品标准》（第十一册）［2］采用分光光度法测定人工牛黄中胆红素的含量，为确保制剂质量，本文采用高效液色谱法，测定了氯芬黄敏片中胆红素的含量。
1 仪器与试药
高效液相色谱仪：包括Waters2695分离单元，Waters2996PDA检测器；StartoriusBP211D电子分析天平。
甲醇为色谱纯(江苏汉邦科技有限公司)，其余试剂均为分析纯，胆红素对照品(供含量测定用，批号：100077-200503，中国药品生物制品检定所)。氯芬黄敏片(新乡中杰药业有限公司，批号：041211；山西晋华药业有限公司，批号：050101；四川蜀中制药有限公司，批号：050105)。
2 方法与结果
2．1 色谱条件 色谱柱：汉邦科技Lichrospher C18柱(5μm 4．6 mmID×250cm)；流动相：甲醇-四氢呋喃-0.5%醋酸(80：10：10)［2］；柱温：30℃；检测波长：450nm［3］；流速：1．0 ml／min。胆红素与其他组分基线分离，R1．5。以胆红素峰计算柱效，其理论板数应不低于l500。
2．2 考察线性关系 精密称取经五氧化二磷干燥至恒重的胆红素对照品20mg，置100 ml棕色量瓶中，加氯仿溶解并稀释至刻度，摇匀。精密吸取上述对照品溶液分别制成浓度分别为2.0，4.0，6.0，8.0，10.0μg/ml，按上述色谱条件进样10μl，测定峰面积，以峰面积积分值为纵坐标，胆红素量(μg)为横坐标绘制标准曲线。回归方程为：Y=46039X＋156，r=0．9993，表明胆红素在2.0～10.0μg/ml内线性关系良好。
2．3 稳定性试验 取对照品溶液，于室温下避光放置，在0，l，2，4 h不同时间段内重复进样3次，每次10μl，峰面积变化不大，表明该溶液基本稳定，能满足测定需要。
2．4 空白试验 按处方方法制备空白片，按样品溶液制备法制得空白对照溶液，并依法测定，结果胆红素色谱峰保留时间在12～20min范围内几无色谱吸收峰，认为无干扰。见图1。
图1 氯芬黄敏片HPLC色谱图 （略）
2．5 重复性试验 精密称取同一批样品(新乡中杰药业有限公司，批号：041211)共5份，依样品测定项下方法测定并计算每片含量，求得平均含量为(0.0545±0.0008)mg，RSD=1．0％。
2．6 加样回收试验 精密称取经五氧化二磷干燥至恒重的胆红素对照品约20mg，加氯仿稀释成20μg/ml，作为对照品溶液。精密吸取已知含量的样品溶液，分别精密加入对照品储备液2.0ml、3.0ml、4.0ml，然后按样品测定方法操作，测得胆红素平均回收率(n=3)分别为98.85%，100.23%，98.98%，RSD分别为0.98%，1.05%，1.25%。
2．7 样品测定 精密称取经五氧化二磷干燥至恒重的胆红素对照品适量，加入氯仿溶解并定量稀释成约含胆红素6μg/ml的溶液，作为对照品溶液。取本品20片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于胆红素60μg），置10 ml棕色具塞锥形瓶中，加入氯仿溶解并稀释至刻度，滤过，取续滤液作为样品溶液。分别精密吸取对照品溶液与样品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定峰面积，按外标法计算，即得。结果见表1。
表1 样品测定结果 (略)
3 讨论
人工牛黄是氯芬黄敏片的主要成分，具有解热、抗炎及抗感染作用，其中有效成分是胆红素、胆酸、去氧胆酸等，牛黄之贵贵在胆红素，以其中胆红素作为指标进行含量测定是科学、合理的。
胆红素易氧化，溶液颜色变绿，所以有关操作应尽量在避光条件下快速进行。
【参考文献】
1 国家药典委员会.中华人民共和国药典，二部.北京：化学工业出版社，2005，附录28.
2 国家药品监督管理局.国家药品标准.化学药品地方标准上升国家标准，第11册.11-69.
3 徐丽婷，丁静慧，孙泰俊，等.高效液相色谱法测定人工牛黄工药材及制剂中胆红素含量.液相色谱网.
作者单位： 223001 江苏淮安，淮安药品检验所
(编辑：汪 洋)