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【摘要】 目的 建立伤科1号合剂的微生物限度检查方法。方法 依据《中国药典》2005年版一部附录ⅩⅢ C有关微生物限度检查法方法验证实验［1］。结果 伤科1号合剂的微生物限度检查可采用常规法。结论 有必要对医院中药制剂进行微生物限度检查法验证。
【关键词】 伤科1号合剂；微生物；限度检查
伤科1号合剂是由当归、红花、丹参、山楂、桂枝等中药煎制而成的褐色液体；其具有活血化瘀、消肿止痛之功效。主用于上肢骨折、脱位伤筋初期。现将其微生物限度检查方法报告如下。
1 材料
1.1 样品 伤科1号合剂，规格500ml。批号：050806、050807、050808。
1.2 验证用菌种 大肠埃希菌［CMCC（B）44102］、金黄色葡萄球菌［CMCCB（B）26003］、枯草芽孢杆菌［CMCC（B）63501］、黑曲霉［CMCC（F）98003］、白色念珠菌［CMCC（F）98001］，上述菌种均由金华市药品检验所所提供，本院保藏，均为5代以内。
1.3 培养基 营养琼脂培养基、玫瑰红钠琼脂培养基、胆盐乳糖培养基、改良马丁液体培养基、改良马丁琼脂培养基、4-甲基伞形酮葡糖苷酸培养基，以上培养基均为北京三药科技开发公司生产。
1.4 稀释剂 0.9%无菌氯化钠溶液，pH 7.0无菌氯化钠蛋白胨缓冲液。
2 方法
照《中国药典》2005年版一部附录ⅩⅢ C有关微生物限度检查法方法验证实验［1］。具体操作方法如下。
2.1 菌液制备 (1)取经37℃培养18～24h的金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌的营养肉汤培养物1ml+9ml 0.9%生理盐水管，10倍稀释至10-6～10-7，做活菌计数备用。(2) 取经26℃培养18～24h的白色念珠菌改良马丁液体培养物1ml+9ml 0.9%生理盐水管，10倍稀释至10-5，做活菌计数备用。(3) 取经26℃培养5天的黑曲霉改良马丁琼脂斜面培养物，加3ml生理盐水洗下霉菌孢子，吸取出菌液，然后取1ml+9ml 0.9%生理盐水管，10倍稀释至10-5，做活菌计数备用。
2.2 供试液制备 取样品10ml，加入pH 7.0无菌氯化钠蛋白胨缓冲液90ml置灭菌三角烧瓶中成1：10供试液，人工污染上述5种菌株。
2.3 回收率测定
2.3.1 实验组 摇匀，分别取1：10供试液1ml，加入上述备用的实验菌液1ml，加入平皿中，立即倾注琼脂培养基，测定细菌用营养肉汤琼脂培养基，测定白色念珠菌及黑曲霉采用改良马丁琼脂培养基，待凝固后，置规定温度培养24～72h观察结果。
2.3.2 菌液组 取1ml，测定加入的菌数。
2.3.3 供试液对照组 取供试品1ml，测定供试品本底菌数。
2.3.4 菌落计数结果 见表1，表2，表3。表1 菌液组菌落计数注：本底菌数均为0个/g表2 供试品对照组菌落计数表3 微生物检查方法验证人工染菌回收率
2.3.5 结论 根据验证结果，实验组的菌回收率均达到70%以上，本品可按常规法进行菌数测定。（注：常规法为1ml供试液加15～20ml菌落计数用培养基）。
2.4 大肠埃希菌检查
2.4.1 菌种 取经37℃培养18～24h的大肠埃希氏菌营养肉汤培养物1ml+9ml 0.9%生理盐水管，10倍稀释至10-7，做活菌计数备用。
2.4.2 实验组 取大肠埃希菌菌液 1ml（含菌量为36个/ml）和10ml 供试液，同时加入100ml胆盐乳糖增菌液中。按2005年版《中国药典》附录Ⅺ J项下微生物限度检查法大肠埃希菌检查法项下依法检查。
2.4.3 阴性对照组 同时以金黄色葡萄球菌作为阴性对照菌，方法同实验组。加入量为1ml(含菌量60个/ml)。按2005年版《中国药典》附录Ⅺ J项下微生物限度检查法金黄色葡萄球菌检查法项下依法检查。
2.4.4 结果 实验组MUG及靛基质试验均为阳性，检出大肠埃希菌，阴性对照菌金黄色葡萄球菌未检出。
2.4.5 结论 根据验证结果，控制菌的检查可用上述方法制备的供试液，按常规法进行检验。
【参考文献】
1 国家药典委员会.中国药典，2005年版一部附录ⅩⅢ C.北京：化学工业出版社，2005，附录70.
作者单位：321000 浙江金华，金华市中医院
(编辑：汪 洋)