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【摘要】 目的 为开发海洋药物资源，对于海藻有效成分海藻硫酸多糖蛋白复合物（compound of sulfated polysaccharide protein from laminaria japonica, SPL）的化学成分分析具有一定的实际意义。方法 采用高效液相色谱仪对SPL进行分析，利用紫外线和示差检测器同时检测蛋白和多糖组分。结果 SPL呈现生物活性大分子的特性，并且SPL中的多糖组分与蛋白组分处于结合状态。另外，通过对Fucoidan与牛血清白蛋白（BSA）混合样品的研究，结果发现多糖大分子与蛋白分子之间存在相互作用。结论 建立了采用高效液相色谱技术研究多糖蛋白复合物的方法，研究发现SPL中蛋白和多糖存在相互作用。
【关键词】 海藻硫酸多糖蛋白复合物；液相色谱；大分子相互作用
【Abstract】 Objective In order to explore natural resources of ocean plant, character research of the compound of sulfated polysaccharide and protein from laminaria japonica（SPL）is most practical and meaningful.Methods SPL characteristics were studied with fully automatic HPLC. The protein and saccharide of SPL were detected at the same time with ultraviolet and differential detector.Results The protein and saccharide of SPL are combined together. Besides，there are biomacromolecule interactions between protein BSA and saccharide Fucoidan detected by HPLC.Conclusion SPL can be successfully analyzed with HPLC, and it offers the base for researches of interactions among biomacromolecules.
【Key words】 SPL；HPLC；biomacromolecule interactions
我国海洋资源丰富，充分研究和利用这些资源对于海洋药物的开发和应用具有广泛的应用价值。海藻含多种有效成分，其中海藻硫酸多糖蛋白复合物（compound of sulfated polysaccharide and protein from laminaria japonica, SPL）就是由中药材昆布（laminaria japonica）提取的有效部位，它是一种无毒副作用的天然药物，具有抗病毒、抗肿瘤、抗氧化等作用［1～3］。有效提取分离和鉴定分析SPL，对于海洋药物资源的开采开发，新适应证的发现提供重要的依据和信息。SPL属硫酸化的杂多糖蛋白复合物，单糖组成以岩藻糖为主，并含有木糖、甘露糖和半乳糖等。高效液相色谱是分析大分子多糖类化合物的有力工具，可用于多糖类化合物的提纯、分子量测定等。本研究采用高效液相色谱技术同时对SPL复合物中的多糖和蛋白组分进行同时检测，根据出峰时间判断其结合状态及相互作用。
1 材料与方法
1.1 仪器与试剂 HPLC液相色谱仪，瑞典 Pharmacia Biotech 公司；2410示差折光检测器，BIORAD公司；紫外线检测仪；GPC软件；SPL，本实验室制备，经比色法测定，SPL硫酸根含量为29.12%，总糖27.83 %，蛋白质12.69%；牛血清白蛋白（BSA），Fucoidan，均为SIGMA公司。
1.2 色谱柱及色谱条件 色谱柱SB-804HQ，日本Shodex公司；流动相，水溶液；流速，0.5ml/min；柱温，常温；进样量，30μl。记录紫外线变化及示差检测出的分子量变化情况，吸收波长220nm。
2 结果
由海藻提取的SPL样品用流动相配制成5mg/ml的溶液，按照上述方法进行检测。图1为SPL样品液相色谱图，其中较高的峰为示差检测器所测得多糖分子峰，另一曲线上的峰则是紫外检测器所测得的蛋白峰。两者出峰时间大致相同，因此可以判断，SPL复合物中的多糖与蛋白是结合在一起的。
另取SIGMA公司产品Fucoidan为对象，其蛋白成分已经去除，用流动相将Fucoidan和BSA分别配制成5mg/ml溶液。取等量的Fucoidan和BSA，将两者混匀，取30μl进行检测。结果见图2，较高的峰为示差检测器所测得多糖分子峰，另一曲线上的峰则是紫外检测器所测得的蛋白峰。两者出峰时间大致相同，因此可以判断，多糖分子与蛋白分子间存在相互作用，在溶液当中两者结合在一起。
图1 SPL样品液相色谱图图2 混合样品液相色谱图3 讨论
近年来，许多国家都将目光盯在海洋药源上，认为海洋植物海藻是未来的医药宝库。我国海域宽广，海洋资源丰富，因此，能够在海洋医药宝库中开辟开发新药研究对于我国医药卫生事业的发展有着现实的意义。海带有效成分褐藻胶的提取与应用已经产业化，但是，对于海藻硫酸多糖蛋白复合物的提取、应用与研究还不充分。国内外多数研究发现，海带硫酸多糖具有较强的药理活性。本研究以高效液相色谱技术为手段，采用示差检测结合紫外检测的技术，对该多糖蛋白复合物中多糖成分和蛋白成分同时检测，结果显示该复合物中两者存在相互作用，处于结合状态。具体结合状态是物理连接还是化学连接还需要进一步的实验研究。
SPL同Sigma公司产品Fucoidan产品单糖组分相同，具有类似的理化特性。SPL制品不同成分的含量同多数文献报道的基本一致，另外，本实验室也进行了大量SPL的药理作用研究，特别是在抗氧化、抗病毒、抗辐射等方面，获得到了许多有价值的实验结果［4～8］。笔者将Fucoidan同BSA混合，以流动相配制成溶液，采用同样的方法检测，结果发现两个大分子在溶液状态发生相互作用。本研究采用液相色谱技术研究了多糖蛋白复合物的多糖和蛋白大分子的结合状态，为生物大分子相互作用的研究提供了依据，并且对于大分子生物结构的深入研究提供了基础。
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作者单位： 1 100850 北京，北京放射与辐射医学研究所
2 100071 北京，北京军区联勤部药品仪器检验所
(编辑：邓 锋)