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【摘要】 目的 从生地黄中提取多糖，并测定其含量。方法 运用微波技术用水提醇沉法提取生地黄多糖，用酚-硫酸比色法测定多糖含量。结果 测得生地黄多糖含量13.4186%，平均回收率为98.94%，RSD=1.34%（n=5）。结论 运用微波技术从生地黄中提取出多糖，反应速度加快，实验结果令人满意。
【关键词】 微波技术； 生地黄； 多糖； 提取； 含量测定
Microwave technique extraction and content determination of polysaccharide of rehmannia glutinosa libosch root
SUN Ping,GU Cheng-zhi,LU Jian-jiang，et al. School of Chemistry and Chemical engineering, Shihezi University,Xinjiang, Shihezi City 832003,China
【Abstract】 Objective The extraction and content determinations polysaccharides of Rehmannia glutinosa Libosch root. Methods Microwave technique applied in polysaccharides of Rehmannia glutinosa Libosch root were obtained by hotwater extraction and ethanol precipitation，content determination with phenol-vitriolic colorimetry. Results The polysaccharides content of Rehmannia glutinosa Libosch root is 13.418%，recovery rate is 98.94%. Conclusion Microwave technique applied in the polysaccharides of Rehmannia glutinosa Libosch root has been obtained for the first time.
【Key words】 microwave technique；rehmannia glutinosa libosch root；polysaccharide；extraction；content determination
生地黄为玄参科植物地黄Rehmannia glutinosa Libosch.的干燥块根，别名地髓、生地、干地黄等，地黄根茎主要含梓醇、地黄素、糖类、氨基酸、维生素A等成分。生地黄有败毒抗癌、清热凉血、养阴生津、医疮消肿、促进免疫、降压、抑制皮肤癣菌等作用，可用于治疗传染性肝炎、功能性子宫出血等。
微波技术的应用，近年来得到很大发展。微波具有穿透力强、选择性高、加热效率高等特点。微波辐射（MWI）可以大大加快反应速度（最高达1240倍），反应时间以分、秒计［3］。微波技术应用于植物细胞破壁，有效地提高了收率［4］，亦取得了令人可喜的进展。
本实验运用微波技术对生地黄用石油醚、乙醚除去脂溶性杂质，用80%乙醇提取除去所含单糖、低聚糖及甙类等干扰性成分后，再运用微波技术用水提纯沉淀法制得生地黄粗多糖，并采用酚-硫酸比色法对其多糖含量进行测定［5］，取得了令人满意的结果。
1 仪器、试剂及样品
UV-2401 PC 紫外分光光度计（日本岛津），MCL-3型连续微波反应器（四川大学无线电系）。葡萄糖（AR）105℃干燥恒重，苯酚（AR），硫酸（AR）。 生地黄：购买于石河子市药店，干燥品，粉碎待用。
2 标准曲线的绘制
2.1 标准葡萄糖溶液的配制 精确称取干燥恒重的葡萄糖25.2mg，加适量水溶解，转移至250ml 容量瓶中，加水至刻度，摇匀，配成浓度为100.8μg/ml标准葡萄糖溶液备用。
2.2 5%苯酚试剂的配制 取苯酚100g，加铝片0.1g和NaHCO3 0.05g，蒸馏，收集182℃馏份，称取7.5g，加水150ml溶解，置棕色瓶内放冰箱备用。
2.3 标准曲线绘制 精确量取葡萄糖标准溶液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7ml置干燥试管中，分别加水使成1.0ml，再分别加入5%苯酚溶液1.6ml，摇匀，然后加浓H2SO4 7.0ml，充分摇匀，室温放置25min，在400～600nm处测定其最大吸光度，同时做一空白。
将上述实验数据做回归处理得回归方程：A = 0.0691C + 3×10-3 R2 = 0.9981 r=0.99905。
3 生地黄多糖的提取及精制
生地黄破碎后，称取30g，置500ml烧瓶中，将此烧瓶放入MCL-3型连续微波反应器中，依次用300ml石油醚(60～90℃)、乙醚和80%乙醇回流提取，调整功率560W、500W、400W、350W，反应时间20min。残渣挥干溶剂后，再放入MCL-3型连续微波反应器中，继续以水回流提取20min，调整功率630W、600W、560W、450W。减压浓缩至一半体积，加入0.1%活性炭，脱色，过滤，滤液加入95%乙醇使溶液含醇80%，静置过夜，过滤，残渣用乙醚、无水乙醇反复洗涤，得生地黄多糖。60℃ 烘干备用。
4 换算因素测定
精确称取60℃干燥恒重的生地黄多糖20mg，水溶解后定容到100ml容量瓶中，摇匀，作为多糖储备液。
精确量取多糖储备液0.20ml，加水至1.0ml，按测定标准曲线同样的方法测其吸光度值。按下式计算换算因素：
f = W/CD
式中：W为多糖重量(μg)，C为多糖液中葡萄糖的重量（μg)，D为多糖的稀释倍数。测得f=2.9115。
5 样品测定
分别精确称取生地黄粉末0.200g、0.250g、0.203g，用80%乙醇浸泡过夜，再于MCL-3型连续微波反应器中用80%乙醇回流20min，调整功率560W、500W、400W、350W。残渣挥去溶剂后，再放入MCL-3型连续微波反应器中，继续以水回流提取20min，调整功率630W、600W、560W、450W。反复洗至250ml容量瓶中，定容，摇匀成为样品液。测定时，精确吸取样品液1.0ml，按测定标准曲线同样方法测其吸光度值，按下式计算多糖含量:
多糖含量%=CDf/W ×100
式中：C为样品溶液的葡萄糖的重量（μg)，D为样品溶液的稀释倍数，f为换算因素，W为样品的重量(μg)，测得平均结果为13.4186%，RSD=0.5097%（n=5）。
6 加样回收率测定
精确称取生地黄粉末0.15g，精密加入生地黄多糖7mg，再于MCL-3型连续微波反应器中用80%乙醇回流20min，调整功率560W、500W、400W、350W。残渣挥去溶剂后，再放入MCL-3型连续微波反应器中，继续以水回流提取20min，调整功率630W、600W、560W、450W。反复洗至250ml容量瓶中定容。摇匀后，精确移取1.0ml，按测定标准曲线同样方法测其吸光度值。计算多糖含量，平均回收率为98.94%，RSD=1.34%（n=5）。
7 讨论
多糖广泛存在于自然界，是多种中草药的有效成分之一，具有多种生物活性，是理想的免疫增强剂，它能促进T细胞、B细胞、NK细胞、MΦ细胞等免疫细胞的功能，还能促进白介素、干扰素、肿瘤坏死因子等细胞因子的产生。目前对多糖的研究方兴未艾，多糖的作用机制以及生物功能与结构的关系的研究不断深入，而且不断有新的多糖物质被发现。微波技术应用于植物细胞破壁，大大地加快了反应速度，有效地提高了收率。本实验从生地黄中提取多糖，并对其含量进行测定，反应时间缩短了12倍，多糖含量为13.4186%。生地黄多糖的提取方法、结构组成、药理作用及生物学功能有待进一步研究。
【参考文献】
1 张翼伸.怎样研究植物多糖.生命的化学，1999，6：296-297.
2 卢端萍,王勇．地黄药理作用及临床应用研究进展.海峡药学，2004，16（3）：23-26.
3 曾昭钧，李香文.微波有机化学进展.沈阳药科大学学报，1999，10：304-309.
4 张代佳，刘传斌，修志龙，等.微波技术在植物胞内有效成分提取中的应用.中草药，2000，31（9）：5-6.
5 周静，李艳，薛梅，等.酸浆果多糖的提取及含量测定.数理医药学杂志，2000，13（3）：242.
作者单位： 832003 新疆石河子，石河子大学化学化工学院实验中心
（编辑：汪 洋)