高效液相色谱法测定胃得宁片中芍药苷含量

　　【摘要】    目的   建立测定胃得宁片有效成分含量的方法。  方法  采用HPLC对胃得宁片中芍药苷的含量进行测定。流动相：甲醇-0.05mol/L磷酸二氢钾-醋酸-异丙醇（50：200：3：4）；检测波长：234nm。  结果  芍药苷在1.018～9.183μg之间具有良好的线性关系，平均回收率为100.7%,RSD=2.76%（n=5)。结论   该方法灵敏、重现性好，适用于胃得宁片中芍药苷的含量测定。

    【关键词】  胃得宁片；芍药苷；高效液相色谱法

    【Abstract】  Objective  To develop a method for the determination of paeoniflorin in Weidening tablet.Methods  An HPLC method was developed,mobile phase:methanol-0.05mol/L dihydropotassium phosphate-acetic acid-isopropyl alcohol（50：200：3：4）,wavelength at 234nm.Results  Linearity was found in the range of 1.018～9.183μg,the average recovery was 100.7%,RSD=2.76%(n=5).Conclusion  This method is reliable,recurrent well and suitable for the determination of paeoniflorin.

    【Key words】  weidening tablet; paeoniflorin; HPLC

    本品系由白芍 、甘草、丹参等10味中药材细粉及中药材提取物制成的片剂。具有理气健胃，缓急止痛之功效。用于治疗浅表性胃炎、胃脘疼痛、胃炎气滞血瘀等症。为了控制胃得宁片的质量，保证临床用药效果，笔者对胃得宁片的质量标准进行了研究。本文以其中的君药白芍中芍药苷为指标，采用高效液相色谱法测定其含量，结果较为满意。

    1  仪器与试剂

    美国Agilient1100高效液相色谱仪；ReliaSil-C18柱；德国Sartorius BP211D(1/10万)电子天平；芍药苷由中国药品生物制品检定所提供；甲醇为色    谱纯；其他试剂均为分析纯。

    2  方法与结果

    2.1  色谱条件  色谱柱:ReliaSil -C18（4.6mm×250mm,5μm）;流动相:甲醇-0.05mol/L磷酸二氢钾-醋酸-异丙醇（50：200：3：4）［1］;流速:1.0ml/min;检测波长:234nm;柱温:室温。

    2.2  对照品溶液的制备  取芍药苷对照品适量，精密称定，置5ml量瓶中，加甲醇制成lml中含lmg的溶液，摇匀，即得。

    2.3  供试品溶液的制备［1］  取本品5片，除去包  衣，研匀，取2.0g，精密称定，置锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，放置2h，超声处理0.5h，冷却至室温，称定重量，加甲醇补足减失的重量，滤过，滤液中加入活性炭0.2g,水浴加热15min，滤过，用甲醇20ml洗滤渣，合并洗液与滤液，蒸干，残渣加甲醇溶解，定溶至5ml量瓶中，作为供试品溶液。

    2.4  阴性对照品溶液的制备  取缺白芍的样品2.0g，照供试品溶液的制备项下同法操作，即得。

    2.5  线性关系考察  精密吸取芍药苷对照品溶液（5.04mg/5ml）1、3、5、7、9μl分别注入液相色谱仪，依法测定，根据对照品的峰面积积分值对芍药苷的进样量绘制标准曲线，得回归方程：Y=1.180×106x－5.068×104, r=0.9998。结果表明：芍药苷在1.018～9.183μg之间呈良好的线性关系，由于标准曲线经过原点，故采用外标一点法。色谱图见图1。

    1-芍药苷

    1-paeoniflorin

    图1  芍药苷对照品（A）和胃得宁片（B）的HPLC图

    2.6  方法学考察

    2.6.1  精密度试验  分别吸取4μl的对照品溶液，重复进样5次，测得其峰面积的RSD为1.52%。

    2.6.2  稳定性试验  精密吸取对照品溶液4μl，于0、2、4、24、36h分别依法测定，结果峰面积的RSD为1.53%，芍药苷在36h内测定结果稳定。

    2.6.3  重现性试验  精密称取同一批样品5份，按供试品溶液的制备和测试方法测定，结果峰面积的RSD为1.28%。

    2.6.4  回收率试验  精密称取已知样品含量（1.386mg/g）的样品5份，分别加入芍药苷对照品一定量，按正文2.3项下操作，测定，并根据样品含量及芍药苷对照品加入量，计算回收率。结果平均回收率为100.7%,RSD为2.76% (n=5)。

    2.7  样品测定   依法测定三批样品结果见表1。表1  胃得宁片中芍药苷含量

    3  讨论与小结

    3.1  流动相考察  参照《中国药典》2000年版（一部）白芍含量测定项下测定芍药苷的流动相及相关文献［2］,通过实验摸索,流动相选用甲醇-0.05mol/L磷酸二氢钾-醋酸-异丙醇（50：200：3：4）芍药苷具有较好的峰型和相对合理的保留时间和分离度，故选用甲醇-0.05mol/L磷酸二氢钾-醋酸-异丙醇（50：200：3：4）为芍药苷分析的流动相。

    3.2  样品检测波长  取芍药苷对照品，加氯仿制成每lml中含芍药苷lmg溶液，作为对照品溶液，进行紫外检测。结果选定测定波长λmax=234nm。且溶剂、阴性无干扰。

    本实验建立的高效液相色谱法测定加样回收率高,是一种快速、简便、较准确的方法。

    【参考文献】

    1  国家药典委员会.中国药典，2000年版.北京：化学工业出版社，2000，（一部）.

    2  汤子孝，王旭东，王利宾.HPLC法测定妇科十味片中芍药苷的含量.中草药,2002,33(3):231-232.

   作者单位：1 213164  江苏常州,江苏工业学院化工系

    2 130021 吉林长春,长春中医药大学 
　
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