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首页医源资料库在线期刊中华实用医药杂志2007年第7卷第3期

复检试管标本与复检血辫标本检测结果的差异

来源:《中华实用医药杂志》
摘要:【摘要】目的应高度重视HBsAg弱阳性复检试管标本与复检血辫标本检测结果存在明显差异,正确判定最终血液检测结果,提高血液的质量和安全性。方法采用ELISA,当出现HBsAg检测呈弱阳性复检试管标本时,再从复检试管标本对应的血袋上剪取辫管血作为复检血辫标本,将复检试管标本和复检血辫标本两者进行平行双孔重......

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【摘要】  目的 应高度重视HBsAg弱阳性复检试管标本与复检血辫标本检测结果存在明显差异,正确判定最终血液检测结果,提高血液的质量和安全性。方法 采用ELISA,当出现HBsAg检测呈弱阳性复检试管标本时,再从复检试管标本对应的血袋上剪取辫管血作为复检血辫标本,将复检试管标本和复检血辫标本两者进行平行双孔重复检测。结果 发生复检试管标本与复检血辫标本检测结果往往不相吻合,既复检试管标本呈阳性而复检血辫标本呈阴性结果。结论 为了提高血液质量,保证输血安全,根据最终检测结果判定血液质量是否合格,决不能仅取决于血袋复检血辫标本检测结果。而应综合各种因素来分析,避免检测结果最终判定错误造成阴差阳错,最大限度提高血液安全性。

【关键词】  献血者;EDTA-NA2抗凝剂;CPDA-1保存液;复检试管标本;复检血辫标本

      《献血法》实施以来,本站采集血液均来自无偿献血者,但在实际工作中仍可检测出输血相关传染病标志物如:HBsAg,Anti-HCV等。由于对献血者的血液检测标本缺乏严格统一的规定,复检试管标本留样五花八门,有使用EDTA-NA2抗凝血液标本的,也有使用枸橼酸盐抗凝血液标本的,也有使用肝素抗凝血液标本的,暂不讨论基质效应[1]是否对检测结果有影响。根据我站工作中经验,目前血液检验的安全模式是无论复检试管标本那种传染病标志物呈阳性或反应性,都应从复检试管标本对应的血袋母袋上再留取辫管血作为复检血辫标本,与复检试管标本进行平行双孔重复检测。以证实复检试管标本与复检血辫标本是一一对应,也就是留取的复检试管标本是与血袋母袋对应。复检试管标本与复检血辫标本进行平行双孔重复检测的目的,第一防止由于工作人员张冠李戴留错复检试管标本,发生复检试管标本是张三的而检测结果实际却是李四的情况,从而避免造成将合格血报废,却将阳性不合格血发往临床的非常严重后果。第二能排除由于加样或其他因素交叉污染引起的复检试管标本检测结果“假阳性”,避免宝贵血液资源浪费。但决不能完全依靠复检血辫标本结果作为检测最终结果来判定血液质量是否合格。因为这样是不科学的,是错误的,也是极危险的。现只探讨HBsAg弱阳性复检试管标本与复检血辫标本检测结果OD值的差异,因为HBsAg强阳性复检试管标本与复检血辫标本检测结果OD值均远远大于Cutoff值。排除非一一对应和交叉污染标本,检测结果不会出现一阳一阴的现象,不再讨论。而HBsAg弱阳性复检试管标本检测结果OD值在0.105~0.475之间,而复检血辫标本检测结果OD值往往小于Cutoff值,小于0.105,检测结果出现一阳一阴的现象,检测最终结果如何来判定显得尤其重要,因为它直接关系到血液质量和血液安全性。现共同探讨如下。

    1  材料与方法

    1.1  试剂  自制3%EDTA-NA2(乙二酸四乙胺二钠)抗凝剂;CPDA-1保养液(血袋中含)。

    1.2  检测标本  采血完毕后从血袋采血针头放4.5~5.0ml血液于加入3%EDTA-NA2抗凝剂200ul的试管中,此标本是复检试管标本,复检试管标本HBsAg检测呈弱阳性,再剪血袋的中段热合辫管,将其中血液放入空试管中约2.5ml,此标本是复检血辫标本。

    1.3  设备  瑞士哈美顿公司ML AT plus2全自动样本处理机和ML FAME酶免分析系统,微量加样器。

    1.4  方法  采用ELISA检测血浆中HBsAg,ELISA试剂由上海科华提供,批批检合格,在效期内使用,每批每板QC在控制范围。实验标本均为复检试管标本HBsAg检测呈弱阳性,然后与复检血辫标本进行平行双孔重复检测,排除有明显交叉污染和非一一对应标本。

    1.5  统计学处理  统计学方法采用t检验。

    2  结果

    见表1。统计结果采用t检验,t=7.97,P<0.001,说明HBsAg弱阳性复检试管标本与复检血辫标本检测结果OD值存在显著差异,复检血辫标本与阴性标本OD值也存在显著差异。表1  HBsAg弱阳性复检试管标本与复检血辫标本检测结果OD值

    3  讨论

    本站使用长春生复含CPDA-1保存液血袋,血袋辫管长度1000mm,除去针头剩余长度930 mm,辫管内径3.2mm,采血完毕后,此辫管内存有不含任何抗凝剂的7.5ml未抗凝血,经反复实践实际容量与计算值相符,放出4.5~5.0ml于加入3%EDTA-NA2抗凝剂200ul试管中作为复检试管标本,那么辫管内仍残留2.5ml未抗凝血,然后用热合机均匀压头、中、尾三段辫管,近针头端称为头段长为300~330mm辫管将被剪下作为检测血型和保留标本,此段辫管内恰好含有2.5~2.7ml血液,此时辫管内原有不含任何抗凝剂的7.5ml未抗凝血全部挪作他用,剩余的中、尾两段辫管内存血液是由血袋CPDA-1保养液中枸橼酸盐抗凝的,分别作为复检血辫标本和临床配血试验标本,既复检试管标本是由EDTA-NA2抗凝,它的稀释倍数是0.20/4.70-5.20=0.043-0.039,均值为0.041倍。复检血辫标本是由血袋CPDA-1保养液中枸橼酸盐抗凝,本站严格执行采血量标准并使用摇摆称充分混匀采集血液,200ml采血袋和400ml采血袋所含保养液分别为28ml和56ml,复检血辫标本它的稀释倍数是28/228或56/456=0.123,复检血辫标本它的稀释倍是复检试管标本的0.123/0.041=3.0倍。同理,ELISA试验中,其他检测项目如Anti-HCV,Anti-HIV,Anti-TP复检血辫标本与复检试管标本也同样存在这样的关系。

    举例说明:Cutoff=0.105,某一HBsAg初试呈弱阳性复检试管标本OD值=0.196,判定结果为阳性。复检血辫标本OD值=0.068,同一块反应板其他阴性标本OD值=0.018,此时如按复检血辫标本OD值判断结果为阴性,如果将此作为最终结果判定这袋血合格,这是不科学的,也是非常危险的,是错误结果报告。在曲线范围内HBsAg含量与OD值呈直线相关[2],因为复检血辫标本稀释倍数是复检试管标本的3.0倍,复检血辫标本的实际OD值应为0.066×3.0=0.198,正确的判断结果为阳性,此袋血为不合格,应报废。当然也可能存在基质效应影响,但不是影响本ELISA试验最主要因素,不予考虑。以上这个例子是我站检验科工作中的实例之一,提示,千万不要以为只要辫管血既复检血辫标本检测结果是阴性,就片面认为复检呈阳性是交叉污染造成的,而错误的将此袋血判定为合格。

    由于强阳性的复检试管标本与复检血辫标本其HBsAg浓度为高,OD值已不在线性范围,两种标本的检测结果OD值远远高于Cutoff值,均为阳性,正常情况不会出现结果判断错误。且经统计学检验,两种标本的检测结果OD值无明显差异。

    其他检测项目如:Anti-HCV,Anti-HIV,Anti-TP弱阳性复检试管标本与复检血辫标本检测结果OD值也同样存在显著差异,不再一一赘述。

    我国约一亿五千人患有乙肝或携带HBV,也有报道感染率是14.8%,总之我国是肝炎大国,且血液是HBV最有效的传播途径,具有传染性的一滴血千分之一的量就足以使易感人群感染HBV,虽然初复检或复检两次检测已很大程度提高了血液的安全性,但由于受窗口期,检测设备,检测试剂,以及检测人员水平素质等诸多因素影响仍有漏检现象发生。据日本报道ELISA检测HBsAg合格血液再经PCR核酸检测漏检率为千分之一,根据现状不容乐观,作为检验科的工作人员肩负着极为重要的职责,应树立高度的责任心,恪守职业道德,不断加强学习,提高检测技能,在工作中不断积累总结经验,透过现象看本质,具体问题具体分析,防微杜渐,避免将已经检测出阳性或反应性的标本,在复检再检时错判结果,严把质量关,保证输血安全。

【参考文献】
  1 安万新,康炜.输血检验学.大连:辽宁出版社,2002,55.

2 张克强,杨振华.临床酶学标准化的新途径.中华检验杂志,1999,1:32-33.


作者单位:1 054000 河北邢台,邢台市中心血站 2 河北邯郸,邯郸铁路医院

作者: 张琦,宋贺欣 2008-6-30
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