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【摘要】 目的 研究竹醋液的体外抗真菌作用。方法 采用体外真菌药敏试验方法测定竹醋液对10种临床上常见的致病性皮肤癣菌和白色念珠菌的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)。结果 竹醋液对皮肤癣菌的MIC在1:256～1:32， MBC在1:128～1:8之间；对白念珠菌的MIC在1:32～1:16，MBC在1:16～1:8之间。结论 竹醋液对皮肤癣菌具有较强的抑菌和杀菌效果。
【关键词】 竹醋液；最小抑菌浓度(MIC)；最小杀菌浓度(MBC)
竹醋液是在竹材热解过程中收集的一种液体混合物，液体呈青黄色或黄棕色，具独特的烟熏味。主要由水、有机酸、酚类、酮类、醇类等物质组成，成分相当复杂，用途十分广泛。国内外的研究都表明其具有广谱的抑菌、消毒功能［1～3］。用竹醋液搽涂或稀释浸泡，对治疗脚癣效果较好。但竹醋液对致病性皮肤癣菌的抑制作用，尚未见系统性体外药效学研究［4］。本研究采用体外真菌药敏试验方法测定了竹醋液对10种临床上常见的致病性皮肤癣菌和白色念珠菌的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)。现报道如下。
1 材料与方法
1．1 供试样品 竹醋液原液由浙江遂昌文照竹炭有限公司提供；再经实验室不同配方和工艺处理后，分为1～3号样品。
1．2 受试真菌
1．2．1 标准菌株 4个属10个种，每种各1株，分别是表皮癣菌属：絮状表皮癣菌；小孢子菌属：犬小孢子菌和石膏样小孢子菌；毛癣菌属：红色毛癣菌、须癣毛癣菌、断发毛癣菌、紫色毛癣苗、许兰氏毛癣菌和同心性毛癣菌；念珠菌属：白念珠菌。均引自中国医学科学院皮肤病学研究所真菌菌种保存中心。
1．2．2 培养基 以不含任何抗生素的沙堡琼脂和沙堡液基作为基础培养基。
1．3 方法
1．3．1 最小抑菌浓度(MIC)的测定 采用沙堡琼脂培养基稀释法（试管法）［5］。
1．3．1．1 药液培养基的制备 将3个竹醋液样品用 V/V 的方法进行稀释。取无菌试管11支，排成一排，除第1管只加入20ml药基原液外，其余每管加入灭菌蒸馏水20ml，在第2管加入药基原液20ml混匀，然后吸取20ml至第3管，混匀后再吸取20ml至第4管，如此连续倍比稀释至第9管，并从第9管中吸取20ml弃去，第10管为不含供试药液的基础生长对照，第11管为溶媒对照。此时1～9管药基浓度依次为1:1、1:2、1:4、1:8、1:16、1:32、1:64、1:128、1:256。然后各管分别与灭菌后的倍量沙堡琼脂20ml混匀，再另分装每管3.5ml，制成斜面，最终使药基浓度分别为：(1)1:2；(2)1:4；(3)1:8；(4)1:16；(5)1:32；(6)1:64；(7)1:128；(8)1:256；(9)1:512；(10) 基础对照；（11）溶媒对照。余样操作同前。
1．3．1．2 菌悬液的制备及接种 挑取1菌环新培养真菌菌落(种于沙保琼脂培养基)混悬于2m1生理盐水中振荡15 min，使之充分混匀，将其浊度调至1.0～10×105 CFU／ml。用微量加样器从第1管至第10管顺序每管加50μl悬液，混匀，放入26℃温箱，皮肤癣菌培养7天，白念珠菌培养48h，观察并记录抑菌结果。
1．3．2 最小杀菌浓度(MBC)测定 将菌未生长示有抑菌作用的各药基管中，分别加入1.5ml沙堡基础液基，放置 26 ℃孵育 2h，充分震荡将原接种的菌液洗脱在液体培养基中，再将液体培养基倾入事先准备好的含有3.5ml沙堡液基的灭菌试管中，此时总液体量为 5ml，混匀后放入26℃温箱，皮肤癣菌培养7天，白念珠菌培养48h，观察并记录杀菌结果。
1．3．3 结果判定
1．3．3．1 最低抑菌浓度 (MIC) 以沙堡琼脂培养基基础对照管菌已生长为参照，药基管中菌未生长示有抑菌作用。菌未生长的最低药物浓度管就是该提取液对该菌的最低抑菌浓度(MIC) ，用 V/V 表示。
1．3．3．2 最低杀菌浓度 (MBC) 先测出M1C，然后经再培养后，在液体培养基中菌又生长为仅有抑菌作用，无杀菌作用；菌仍未生长的为杀菌作用，菌仍未生长的最低药物浓度管就是该提取液的最低杀菌浓度(MBC)，用 V/V 表示。
2 结果
竹醋液1～3号样品对标准菌株的最小抑菌浓度和最小杀菌浓度测定 竹醋液1号样品对7株的MIC为1：256，对2株的MIC为1：128，对1株的MIC为1：32,而且5株的MBC高出MIC1倍，其余菌株的MBC高出MIC2～4倍。竹醋液3号样品的MIC与1号样品基本相同，而MBC高出MIC1倍有6株。竹醋液2号样品的MIC仅1株为1：256，6株为1：128，MBC有7株为1：64。见表1～3。 表1 竹醋液1号对10种常见致病皮肤菌的ＭＩＣ和ＭＢＣ表2 竹醋液2号 对10种常见致病皮肤菌的ＭＩＣ和ＭＢＣ表3 竹醋液3号对10种常见致病皮肤菌的ＭＩＣ和ＭＢＣ注：“＋”菌已生长示无抗菌作用；“△”在药基上菌未生长，转种到沙堡液基中菌又生长，示仅有抑菌作用，无杀菌作用；“-”在药基上菌未生长，转种到沙堡液基中菌仍未生长，示既有抑菌作用又有杀菌作用。
3 讨论
本研究表明，竹醋液1～3号样品对4属 10种常见致病菌均有较好的抑菌和杀菌作用，1号样品和3号样品结果基本一致，其中对毛癣菌、絮状表皮癣菌和白念珠菌的杀菌作用3号样品比1号样品高出2倍。两者均比2号样品抗菌作用强约为1倍以上。
3个竹醋液样品的工艺处理和配方不同，因此在抗菌作用方面显示出一定的差异，试验结果表明，1号和3号样品具有进一步研究开发的潜力。
3个样品对4属10种常见致病真菌的抗菌结果表明，竹醋液对皮肤癣菌有较强的优势(MIC在1:256～1:32，MBC在1: 128～1:8之间)；对白念珠菌作用稍弱(MIC在1:32～1:16，MBC在1: 16～1:8之间)。提示竹醋液是一种高效的杀菌剂，这为临床应用竹醋液治疗常见的皮肤癣菌和白色念珠菌引起的癣疾提供了理论依据。竹醋液作为竹炭生产过程中的主要副产物，属纯天然原料，价廉易得。以竹醋液作为抗皮肤真菌新药进行深入研究，具有一定开发和应用前景。
（致谢：中国医学科学院皮肤病学研究所真菌科沈永年研究员对本研究提供了指导和帮助，在此表示衷心感谢）
【参考文献】
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作者单位：310023 浙江杭州，浙江省林业科学研究院