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【摘要】 目的建立迷迭香提取物中鼠尾草酸含量测定的方法。方法外标一点法。Hypersil ODS柱为色谱柱，流动相乙腈-0.1%磷酸溶液（60∶40），柱温度30℃，流速1.0ml/min，检测波长285nm，进样量10μl。结果鼠尾草酸能很好地分离。鼠尾草酸的线性范围为0.0442～0.8420 mg/ml（R=0.9997）。加样平均回收率为97.96%（n=9），RSD为1.1%。结论该方法简便、快速、重复性好，适用于本品中鼠尾草酸的含量测定。
【关键词】 迷迭香提取物 鼠尾草酸 高效液相色谱 含量测定
【Abstract】ObjectiveTo establish a method for the determination of the content of carnosic acid in rosemary extracts.MethodsAn external standard method by RP- HPLC Hypersil ODS C18 column and acetonitrile-0.1%phosphoric acid (60:40)as mobile phase.The column temperature was 30℃.The flow rate was 1.0ml/min.The detection wavelength was 285nm and the injection volume was 10μl. ResultsThe linear range of carnosic acid were 0.0442～0.8420mg/ml（R2=0.9995），average recovry of rosemary extracts were 97.86% and RSD=1.1%（n=9）.ConclusionThis method was simple,rapid and accurate.It is suitable to be adopted for quantitative analysis of carnosic acid in rosemary extract
【Key words】rosemary extracts； carnosic acid；high performance liquid chromatography;content determination
迷迭香Rosmarinus officinalis L系唇形科迷迭香属植物，其主要成分主要有二萜类、黄酮类、三萜类化合物和精油，现多作为抗氧化剂及香料用于食品、化妆品、医药领域［1］。迷迭香中所含的二萜酚类成分有明显的抗氧化、防腐、抗菌、抗肿瘤等活性,其中鼠尾草酸的活性最强［2］。迷迭香提取物（Extractum rosemary siccus）是迷迭香的叶、花和植株的各部分切碎之后，先提取精油后，用适宜的溶剂提取获得。本品具有阻止或延缓其他各类产品的氧化变质，提高稳定性，延长贮存期，确保其他产品的商品稳定。
1仪器与试药
美国安捷伦高效液相色谱仪Agilent 1100(Agilent 1100四元泵、Agilent 1100真空脱气泵、Agilent 1100VWD检测器、Agilent 1100色谱工作站)；CBL100型柱温箱；0.45μm滤膜，十万分之一CP255D型电子天平。鼠尾草酸对照品（天津一方科技有限公司）；乙腈为色谱纯，甲醇为分析纯，磷酸为分析纯，水为超纯水；迷迭香提取物（海正药业试制）批号为：060801、060802、060804、060805、060806
2色谱条件
色谱柱为依利特Hypersil ODS （5μm 4.6×250mm ）流动相：乙腈-0.1%磷酸水溶液（60∶40）；紫外检测波长285nm，流速：1.0ml/min；柱温：30℃，进样量10ul,在上述色谱条件下进样分析,鼠尾草酸与其他成分达到基线分离,与其相邻缝的分离度大于1.5,计算理论板数按鼠尾草酸大于10000。色谱图见图1。
3.1对照品溶液的制备精密称取鼠尾草酸对照品适量，加甲醇溶解制成浓度为0.17mg/ml的溶液即得。
3.2供试品溶液的制备精密称取本品适量，加甲醇溶解制成浓度为1.15mg/ml的溶液，进样前用0.45μm滤膜过滤，即得。
3.3归一化法测定鼠尾草酸对照品含量加甲醇配制成浓度为0.8420mg/ml，6次进样按平均峰面积计算得鼠尾草酸含量为93.22%。本对照品系购于天津一方科技有限公司，因此作含量的标定。
4方法与结果
4.1线性关系考察精密称取鼠尾草酸对照品，用甲醇配置成浓度为0.0442、0.0884、0.1768、0.3536、0.5894、0.8420 mg/ml的对照品溶液,精密吸取上述对照溶液10μl注入色谱仪。重复2次,以峰面积平均值(Y) 为纵坐标,溶液浓度(X)为横坐标,绘制标准曲线。鼠尾草酸的回归方程、相关系数分别为:Y=1888.7X-6.2869 R2=0.9995结果说明鼠尾草酸浓度在0.0442～0.8420 mg/ml范围内与峰面积之间具有良好的线性关系。
4.2检测限和定量限的确定检测限取鼠尾草酸对照品，用甲醇配置成稀溶液，经测定检测限为1.55μg/ml。定量限为3.72 μg/ml。
4.3精密度试验取线性范围项下的对照品溶液(每1ml含鼠尾草酸1.0030mg),重复进样6次,测的峰面积的RSD为0.1%。结果说明,本法仪器精密度符合检测要求。
4.4重复性试验取本品(批号为060806)细粉6份,按“3.2”项下方法制备供试品溶液。分别进样2次，测定，结果平均含量为，14.63%，RSD为1.7%（n=6），表明该方法重复性较好。
4.5稳定性试验取供试品溶液,在0、0.5、1、2、4、6、8、10、12、15、19h进样分别进样1次,测定峰面积,RSD为1.0%。实验结果表明,供试品溶液在19h内稳定。
4.6回收率试验取已知含量批号为060806的样品，按测定量的80%、100%、120%精密称取本品，各3份，分别加对照品与对应的样品中的鼠尾草酸量相当，配置溶液，过0.45μm的滤膜，取续滤液照含量测定方法进样测定，按外标法以峰面积计算。平均回收率为97.96%，RSD为1.1%。（n=3）表明该方法准确性和可靠性良好。
4.7样品测定取迷迭香提取物各约10.0mg，按“3.1”项下方法制备供试品溶液，分别进样测定，结果见表1。表1样品含量测定结果(5批样品)结论用反相液相色谱法测定鼠尾草酸含量，方法简便快速，重复性好，结果准确可靠，在内控标准中，鼠尾草酸的含量不得少于12.0%。
5讨论
5.1检测波长的选择选择检测波长230nm和285nm，测定，结果虽然在230nm处吸收响应值很大, 基线波动较大，杂质干扰也大，主峰分离不好；而在285nm处吸收响应值相对较小，但基线比较平稳，杂质干扰也小，主峰分离很好。所以本实验选择285nm作为检测波长。
5.2迷迭香提取物作为一种抗氧剂，应用十分广泛。广泛应用于食品（各类动植物海藻油脂、肉制品、天然色素、DHA、EPA、AA、动植物提取物、保健口服液、蜂产品、营养调味品、冻干食品、烘焙食品和高档香精）、药品、化妆品、饲料及其他化工产品中，能很好地阻止或延缓产品氧化变质，提高稳定性，延长贮存期，从而确保产品的商品价值。
【参考文献】
1Tu PF,Xu ZH.Chemical constituents and their application from rosemary.Nat Prod Res Dev(天然产物研究与开发),1998,10(3):62-68.
2屠鹏飞,徐占辉,等.新型资源植物迷迭香的化学成分及其应用.天然产物研究与开发,1997,10(3):62.
(编辑：齐永)
作者单位：318000 浙江台州,浙江海正药业股份有限公司