HPLC法测定复方天麻颗粒中五味子醇甲的含量

【摘要】  目的 用HPLC法测定复方天麻颗粒中五味子醇甲的含量。方法 HPLC用外标一点法，Kromasil ODS1 C18柱，甲醇－水（65：35）为流动相，流速为1.0ml/min，λ=220nm。结果 五味子醇甲在5～80μg/ml范围内呈良好线性,回归方程为y=0.9807x-0.8152 r=0.9998，平均加样回收率99.7%、RSD%为1.7%（n=9）。结论 方法简便、准确，专属性强，测定结果重复性好，为复方天麻粒颗中五味子的定量分析提供了科学有效的方法。

【关键词】  复方天麻颗粒；五味子醇甲；HPLC

    【Abstract】  Objective  To establish the method for detemining the content of  Schisandrin in Fufang Tianma Keli by HPLC.Methods  Using Kromasil ODS1 C18 Column, acetonitrile-0.05% phosphoric acid solution（2：98） as the mobile phase,detection wavelength as 220nm and flow rate was 1.0ml/min.Results  The calibration curve was linear at a range of 10～120μg/ml for the Schisandrin and linear equation was y＝0.3015x-0.9865  r＝0.9995. The average  recovery was 99.7% and the related standard deviation（RSD) was 1.7%（n=9）.Conclusion  This method was simple and accurate and proper,which can be provide for scientific quantitative analysis method of  Schisaandrae chinensis in Fufang Tianma Keli and the reduplication of the result was good.

    【Key words】  Fufang Tianma Keli； Schisandrin； HPLC

    复方天麻颗粒为原《卫生部药品标准》第十二册收载品种，为民间常用药，具有健脑安神作用，用于失眠健忘，神经衰弱，以及高血压引起的头昏头痛。本方由天麻、五味子、麦冬三味中药经提取加工制成。据现行药典及多数文献的报道，对复方天麻粒颗的质量控制没有含量测定。而在实际处方中，五味子虽不是君药，为提高药品的质量标准，控制其中五味子的含量极有必要。现经实验论证，对方中的五味子所含五味子醇甲的含量测定方法进行方法学研究，认为线性、重复性、回收率、精密度等均较理想。

     1  仪器与试药

    色谱仪为戴安四元泵液相色谱仪（美国），配有UVD170U紫外检测器；全自动进样器ASl－100Automated Sample injector；柱温箱Thermostatted columncompartment TCC－100配有戴安数据工作站。

    甲醇为色谱纯，水为重蒸馏水，其他有关试剂均为分析纯。对照品：五味子醇甲对照品（批号为110857-200406）购自中国药品生物制品检定所，作含量测定用。复方天麻颗粒本公司自产，批号为050101、050102、050103。上市药品：云南某药业有限公司，批号：20040425。

     2  分析方法的研究

    2.1  色谱条件与系统适用性试验

    2.1.1  色谱柱  Kromasil ODS1 C18 柱 （4.6mm×250mm，5μm)。

    2.1.2  流动相  甲醇－水（65：35）；与中国药典2005年版的流动相同。

    2.1.3  检测波长  测定五味子醇甲的紫外吸收波长证明他们在220nm有较大吸收，并比250nm处响应更大，确定为220nm。

    2.1.4  流速  1.0ml/min；进样量  10μl。

    此色谱条件下，对照品及经前处理后的供试品中的五味子醇甲与其他组分达到分离。

    2.2  对照品的制备  见图2。精密称取真空干燥（五氧化二磷）24h的五味子醇甲对照品10.5mg，置100ml量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，作为贮备液；精密量取10ml,置50ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度（每1ml中含五味子醇甲21μg)，作为对照品溶液。

    2.3  供试品溶液的制备  见图3。取装量差异项下本品（批号为050101）研细后的粉末9g，精密称定，置具塞烧瓶中，精密加入甲醇5 0ml，称定重量，回流3h，放冷至室温，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，滤过，精密量取续滤液20ml，蒸至近干，加硅藻土1g，混匀，蒸干，加甲醇分次洗脱溶解，滤入20ml的量瓶中至刻度。

    2.4  标准曲线  精密量取五味子醇甲对照品贮备液适量，加甲醇制成每1ml含以下表中的浓度溶液测定。表1  五味子醇甲的线性结果表明：五味子醇甲在5～80μg/ml范围内呈良好线性。

    2.5  检测限与定量限的测定   取上述配制的对照品贮备液，用甲醇多级稀释后进样，结果信噪比（S/N）为2；检测限为0.126μg/ml。信噪比（S/N）为10；定量限为0.42μg/ml。

    2.6  阴性样品的测试  取缺五味子的样品；按供试品制备法制备供试品后测定，在五味子醇甲相应位置无峰出现，说明阴性样品的其他成分无干扰（见图1）。

    图1   缺五味子的复方天麻颗粒色谱图图2  五味子醇甲对照品色谱图图3  复方天麻颗粒色谱图2. 7  精密度试验

    2．7．1  仪器精密度  取同一批样品（批号为050101），供试品粉末9g按法制备供试品后连续进样6次，RSD为0.5%。表2  复方天麻颗粒的精密度试验1

    2．7．2  精密度  取同一批样品（批号为050101）,按要求称取低、中、高样品量来测定五味子醇甲的含量, 平均收得率为99.8%；其RSD值为0.9%（n=9）。结果见表3。

    2．8  回收率试验  取本品（批号为050101）细粉3.6g、 4.5g、 5.4g各三份，分别加对照品五味子醇甲0.420mg、 0.525mg、0.630mg。平均回收率为99.7%,其RSD值为1.7%，实验证明本方法的重复性较好，结果见表4。表3  复方天麻颗粒的精密度试验表4  复方天麻颗粒中五味子醇甲的加样回收率试验

    2.9  1样品测定：按上述方法处理样品后测定结果见表5。表5  复方天麻颗粒三批样品测定结果从对三批天麻颗粒中试样品的测定结果可以看出，样品中五味子醇甲的平均含量为1.5mg/袋，从市场上购得一批产品未测得五味子醇甲的含量，结合大生产时实际情况，将成品每袋中五味子醇甲（C24H32O7）的含量定为不得少于1.2mg。

　　3  讨论

    3．1  流动相据文献报道曾比较甲醇－水（65：35）和乙腈－0.05%磷酸（50：50），结果以前者为好。

    3．2  对五味子醇甲的含量方法虽比较成熟，但在复方制剂中受到其他药材的复杂成分影响，需要进行方法学的研究，本文以此目的，经阴性样品测定和一系列的试验，方法简易、正确。

作者单位：312560 浙江新昌，新昌得恩德制药有限公司